楊登林，楊穎，黃麗

（1.四川省綿陽(yáng)市梓潼縣瑪瑙鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，綿陽(yáng) 622157；2.四川省綿陽(yáng)市梓潼縣大新鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，綿陽(yáng)622159；3.四川省綿陽(yáng)市梓潼縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，綿陽(yáng) 622150）

0 引言

為探究新城疫和重組禽流（H5+H7）二價(jià)苗同時(shí)注射接種，能否達(dá)到對(duì)雞新城疫和重組禽流感（H5+H7）的免疫保護(hù)效果，進(jìn)行以下試驗(yàn)研究。

1 試驗(yàn)用疫苗與器材

1.1 雞新城疫活疫苗

含雞新城疫病毒低毒力弱毒LaSota株（CVCCAV1615），每羽份疫苗含有的新城疫弱毒病毒≥106.0TCID50，性狀為淡黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫落，加稀釋液后迅速溶解，山東華宏生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為201701001。

1.2 重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫（H5N1Re-8+H7N9H7-Re1株）

滅活前Re-8株雞胚液HA效價(jià)不低于1∶512、H7-Re1雞胚液HA效價(jià)不低于1∶256。性狀乳白色均勻乳劑，廣東永順生物制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為2017018。

1.3 試驗(yàn)用器材

96孔微量反應(yīng)板、加樣槽、吸管、燒杯、移液器、TDL80-2B離心機(jī)、離心管、UPC-Ⅲ-10T自動(dòng)純水儀、SKP-電熱恒溫培養(yǎng)箱、微量震蕩器、托盤天平等。

2 試驗(yàn)用抗體檢測(cè)試劑

雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原（Blood coagulation inhibition test antigen in chicken new city）、雞新城疫抗體檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：EPPPR-1002，哈爾濱維科生物科技股份有限公司生產(chǎn)。

禽流感病毒H7亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號(hào)20170803；禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號(hào)20170428，均由哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)。

3 試驗(yàn)雞分組與檢測(cè)方法

3.1 試驗(yàn)雞選擇

在某養(yǎng)雞戶隨機(jī)選擇60日齡且未經(jīng)過(guò)任何疫苗接種的雞40只，由專人飼養(yǎng)管理，飼喂相同的飼料，自由飲水。試驗(yàn)前對(duì)所選中的雞進(jìn)行全面健康檢查：體重在0.6 kg/只左右，呼吸為22～25次/min，心跳為150～200次/min，體溫在40.5～42 ℃，食欲正常，精神狀態(tài)良好；經(jīng)翅靜脈采血檢測(cè)，雞新城疫、禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體均呈陰性。

3.2 動(dòng)物分組

將這40只雞隨機(jī)分成4組：第1組（簡(jiǎn)稱A組）10只雞，在每只雞胸部肌肉注射2羽份雞新城疫活苗；第2組（簡(jiǎn)稱B組）10只雞，在每只雞胸部肌注2 mL重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫；第3組（簡(jiǎn)稱C組）10只雞，在每只雞左側(cè)胸部部肌肉注射2羽份新城疫活苗，同時(shí)在其右側(cè)胸部部肌注射2 mL重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫；對(duì)照組10只，在每只雞左側(cè)胸部肌肉注射生理鹽水2 mL，在其右側(cè)胸部肌注生理鹽水2 mL。

3.3 方法

在接種后7 d、14 d、21 d、28 d時(shí)采集每只雞翅靜脈血5.0 mL，用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定雞新城疫、禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體。

4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

新城疫抗體檢測(cè)方法按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T166550-2008新城疫診斷技術(shù)》進(jìn)行，禽流感檢測(cè)方法按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T18936-2003高致病性禽流感診斷技術(shù)》進(jìn)行。觀察各組雞接種新城疫疫苗和重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗后抗體的動(dòng)態(tài)變化，將所得樣品Log2值數(shù)據(jù)，用SPSS10.0軟件的One-Way ANVOA方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

5 試驗(yàn)結(jié)果

5.1 臨床接種副反應(yīng)

各試驗(yàn)組的雞在接種疫苗后72 h內(nèi)，沒(méi)有出現(xiàn)臨床不良反應(yīng)，其體溫、呼吸、脈搏、飲食情況均在正常范圍內(nèi)。

5.2 A組、C組、對(duì)照組雞血清新城疫抗體動(dòng)態(tài)

據(jù)雞新城疫抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書提供的方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示A組10份樣品7 d時(shí)HI疫苗的平均抗體滴度高于6.8（log2），在14～28 d時(shí)抗體陽(yáng)性均高于80%，C組雞群10份樣品7 d時(shí)HI疫苗的平均抗體滴度高于6.7（log2），在14～28 d時(shí)抗體陽(yáng)性率均高于80%，試驗(yàn)對(duì)照組HI抗體均值為0，數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 雞血清新城疫抗體血凝抑制試驗(yàn)（HI）抗體水平均值（log2）

5.3 B組、C價(jià)組、對(duì)照組雞血清禽流感病毒（H7+H5）亞型抗體動(dòng)態(tài)

據(jù)禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書提供的判定標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示B組10份樣品7 d時(shí)HI抗體均值為6.4（log2），在14～28 d時(shí)抗體陽(yáng)性率達(dá)80%以上，C組雞群、10份樣品7 d時(shí)HI抗體均值為6.6（log2）在14～28 d時(shí)抗體陽(yáng)性率達(dá)80%以上，試驗(yàn)對(duì)照組HI抗體均值為0。數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 雞血清亞型抗體血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)樣品抗體HI均值（Log2）

5.4 B組、C組、對(duì)照組雞血清抑制試驗(yàn)抗體動(dòng)態(tài)

據(jù)雞血清抑制試驗(yàn)抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書提供的方法檢測(cè)，結(jié)果顯示B組10份樣品7 d時(shí)HI抗體均值為6.6（log2），在14～28 d時(shí)抗體陽(yáng)性率達(dá)80%以上，C組雞群10份樣品7 d時(shí)HI抗體均值為6.8（log2），在14-28d時(shí)抗體陽(yáng)性率達(dá)80%以上，試驗(yàn)對(duì)照組HI抗體均值為0。見(jiàn)表3。

表3 各試驗(yàn)組雞血清亞型抗體檢測(cè)樣品抗體HI均值（log2）

5.5 HI抗體平均值

A組和C價(jià)組在接種后7 d、14 d、21 d、28 d，7 d時(shí)HI抗體平均值為6.5 （log2）以上，14 d、21 d、28 d時(shí)HI抗體平均值8.3（log2）以上。

B價(jià)組和C價(jià)組在接種后7 d、14 d、21 d、28 d，禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體7 d時(shí)HI抗體平均值為6.6（log2）以上，14 d、21 d、28 d時(shí)HI抗體平均值8.3（log2）以上。

B價(jià)組在接種后7 d、14 d、21 d、28 d時(shí)，禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞洲型抗體7d時(shí)HI抗體平均值為6.4（log2）以上，14d、21d、28d時(shí)HI抗體平均值8.5（log2）以上。

C價(jià)組在接種后7d、14 d、21 d、28 d時(shí)，禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體7d時(shí)HI抗體平均值為6.6（log2）以上，14 d、21 d、28 d時(shí)HI抗體平均值8.3（log2）以上。

6 分析與結(jié)論

從表1、表2、表3可以看出，在接種后的整個(gè)控制試驗(yàn)期間，試驗(yàn)開(kāi)始前所有被選擇實(shí)驗(yàn)用雞和試驗(yàn)開(kāi)始后對(duì)照組雞血清中均未檢出新城疫、禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體，說(shuō)明整個(gè)試驗(yàn)期間，A組、B組、C價(jià)組雞所產(chǎn)生的抗體均源自接種雞新城疫、重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗后而產(chǎn)生，雞均不存在自然感染新城疫、禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型病毒后而產(chǎn)生相應(yīng)抗體的可能性[1]。

從得出的A組抗體陽(yáng)性率變化分析，雞新城疫、重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗在分別或同時(shí)接種后對(duì)A組抗體的陽(yáng)性率沒(méi)有任何影響；從表1的A組抗體Log2均值還可以看出，在7～28 d期間，兩試驗(yàn)組之間A組抗體HI值，Log2均值比較差異不顯著（P＞0.5），兩試驗(yàn)組分別與對(duì)照組之間Log2均值比較差異顯著，說(shuō)明A組和重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗分別或同時(shí)接種雞對(duì)其A組抗體的產(chǎn)生沒(méi)有任何負(fù)面影響[2]。

從得出的禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型型抗體陽(yáng)性率變化分析，無(wú)論重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)苗單獨(dú)還是和A組疫苗同時(shí)接種，在接種后7 d亞型抗體陽(yáng)性率均能達(dá)到60%，在接種后14～28 d，亞型抗體陽(yáng)性率均能達(dá)到100%，且從表2的抗體 Log2均值還可以看出，在7～28 d期間，兩試驗(yàn)組之間抗體均值比較差異不顯著（P＜0.5），兩試驗(yàn)組分別與對(duì)照組之間Log2均值比較差異顯著，說(shuō)明A組疫苗和重組禽流感（H5+H7）二價(jià)苗單獨(dú)或同時(shí)接種雞，在接種后7～28 d內(nèi)對(duì)禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體的產(chǎn)生沒(méi)有任何負(fù)面影響。

從得出的禽流感病毒H7亞型和禽流感病毒H5亞型抗體陽(yáng)性率變化分析，重組禽流感（H5+H7）二價(jià)價(jià)苗和A組疫苗同時(shí)接種雞，從抗體陽(yáng)性率分析可看出A組疫苗對(duì)重組禽流感（H5+H7）二價(jià)苗中亞型抗體的產(chǎn)生有輕微的促進(jìn)作用，但從表3還可以看出，重組禽流感（H5+H7）二價(jià)苗單獨(dú)還是和A組疫苗同時(shí)接種雞，兩試驗(yàn)組之間亞型抗體 Log2均值比較差異不顯著，而兩試驗(yàn)組分別與對(duì)照組之間亞型抗體Log2均值比較，差異顯著，說(shuō)明兩試驗(yàn)組之間亞抗體陽(yáng)性率的差異可能是個(gè)別雞個(gè)體差異所致；至少在接種21 d后都具有國(guó)家規(guī)定的70%以上的抗體陽(yáng)性率[3]。

7 結(jié)束語(yǔ)

隨著農(nóng)村畜牧業(yè)的日益發(fā)展，畜禽飼養(yǎng)量迅速增加，通過(guò)試驗(yàn)結(jié)果支持新城疫和重組禽流（H5+H7）二價(jià)苗同時(shí)注射接種，既能達(dá)到減輕防疫員的工作強(qiáng)度和工作時(shí)間，又能達(dá)到對(duì)雞新城疫和重組禽流感（H5+H7）的免疫保護(hù)效果。