徐榮 張佩華

摘要：目前研究進(jìn)展顯示，黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1簡(jiǎn)寫為AFB1）是化學(xué)物質(zhì)中致癌性最強(qiáng)的一種，對(duì)人和動(dòng)物都會(huì)造成危害，本文旨在對(duì)黃曲霉毒素B1的毒性和檢測(cè)方法進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素B1 毒性 檢測(cè)方法

黃曲霉毒素B1主要是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是谷物污染中常見的具有強(qiáng)致癌性、致毒性、致畸性的真菌毒素，在生產(chǎn)中容易造成經(jīng)濟(jì)損失、影響人畜健康，所以黃曲霉毒素B1的檢測(cè)方法在飼料生產(chǎn)和人類生活中具有重要意義。

1 黃曲霉毒素B1簡(jiǎn)介

AFB1是含有一個(gè)雙呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀┑亩溥秽蹼s萘鄰?fù)难苌?，是目前已知化學(xué)致癌性最強(qiáng)的物質(zhì)之一.可以通過儲(chǔ)存、加工等各種途徑污染糧油等農(nóng)產(chǎn)品、食品和飼料等，直接或間接危害人類和動(dòng)物的健康。

2 黃曲霉毒素B1的毒性

黃曲霉毒素B1的毒性要比嘔吐毒素的毒性強(qiáng)30倍，比玉米赤霉烯酮的毒性強(qiáng)20倍。黃曲霉毒素B1的急性毒性是砒霜的68倍，氰化鉀的10倍，慢性毒性可誘發(fā)癌變，致癌能力為二甲基亞硝胺的75倍，比二甲基偶氨苯高900倍，人的原發(fā)性肝癌也很可能與黃曲霉毒素有關(guān)。

當(dāng)人類大量攝人AFB1時(shí)，可發(fā)生急性中毒，出現(xiàn)急性肝炎、出血性壞死、肝細(xì)胞脂肪變性和膽管增生;微量持續(xù)攝入，可造成慢性中毒，生長(zhǎng)障礙，引起纖維性病變，致使纖維組織增生。AFB1具有致癌性，可導(dǎo)致人類肝癌和食道癌。

當(dāng)動(dòng)物家禽攝入AFB1時(shí)，采食量，體增重和飼料轉(zhuǎn)化率均會(huì)降低;還會(huì)導(dǎo)致不孕、流產(chǎn)、肺水腫、疫病易感性增加等現(xiàn)象發(fā)生。

3 黃曲霉毒素B1的檢測(cè)方法

世界各國(guó)及國(guó)際組織都制定了黃曲霉毒素B1的限量標(biāo)準(zhǔn)。GB 5009.22-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》中規(guī)定當(dāng)稱取樣品5g時(shí)，柱前衍生法AFB，的檢出限為0.03μg/kg。目前，AFB1的檢測(cè)方法有薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）、微柱篩選法、微柱快速法、近紅外線分析儀測(cè)定法等。

3.1 薄層色譜法（TLC）

TLC法是測(cè)定黃曲霉毒素的經(jīng)典方法，是中國(guó)測(cè)定食品及飼料中AFT黃曲霉素B1（AFBl）的標(biāo)準(zhǔn)方法之一（GB/T5009.23-2006）。其原理是針對(duì)不同的樣品，用適宜的提取溶劑將AFB1從樣品中提取出來，經(jīng)溶劑萃取純化，再在薄層板上層析展開，分離，利用AFB1的熒光特性，根據(jù)熒光斑點(diǎn)的大小和強(qiáng)弱，比較測(cè)定黃曲霉毒素含量。

TLC有單項(xiàng)展開法和雙向展開法，TLC法由于設(shè)備簡(jiǎn)單，易于普及，所以國(guó)內(nèi)外仍在使用，但由于該法樣品前處理繁瑣，且提取和凈化效果不夠理想.提取液中雜質(zhì)較多因而在展開時(shí)影響斑點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，而雙向展開雖避免了雜質(zhì)干擾，增加了靈敏度，但增加了操作步驟和時(shí)間。

3.2 液相色譜法

葉雪珠等（2003）用高效液相色譜法對(duì)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2分別進(jìn)行定量分析。其主要是用熒光檢測(cè)器檢測(cè).在適宜的流動(dòng)相條件下.采用反相C18柱，使多種黃曲霉毒素同時(shí)分離。黃曲霉毒素免疫親和柱HPLC法采用單克隆抗體免疫技術(shù)，可以特效地將黃曲霉毒素與其他真菌素中分離出來，分離效率和同收率高。此方法已得到廣泛應(yīng)用，并被美國(guó)官方分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）確認(rèn)為官方檢測(cè)方法。該方法的檢測(cè)限可達(dá)0.02—5ug/L。

郭金喜等（2017）研究結(jié)果表明，此方法影響測(cè)量AFB1結(jié)果不確定度的主要因素為樣品稱量、溶液體積、最小二乘法標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、樣品同收率等。所以在測(cè)試過程中可以從減小主要不確定度的來源進(jìn)行改進(jìn)，進(jìn)而降低測(cè)量不確定度，使測(cè)試的準(zhǔn)確率提高。

3.3 酶聯(lián)免疫法（ELISA）

酶聯(lián)免疫法檢測(cè)AFB1的理論基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，其采用單克隆或多克隆抗體技術(shù)，具有特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。其原理是抗原（或抗體）吸附于載體上的免疫吸附劑和用酶標(biāo)抗體（或抗原）與標(biāo)本中的待測(cè)物（抗原或抗體）起特異的免疫學(xué)反應(yīng)，最后用測(cè)定酶活力的方法來增加測(cè)定的敏感度。大體分為兩類：一是用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中的AFTB1，二是用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)樣本中的AFTB1。為了使用方便，目前國(guó)內(nèi)外已研制了酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定試劑盒及配套儀器，此方法也被列入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T5009.22 1996第二法）。

但由于ELISA法中酶的活性易受反應(yīng)條件影響，因此ELISA法測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定性較差，分析結(jié)果的準(zhǔn)確性不高，容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

柳其芳（2006）研究表明酶聯(lián)免疫吸附法是目前國(guó)際測(cè)定黃曲霉毒素B1的先進(jìn)方法，靈敏度高，干擾少，測(cè)定步驟簡(jiǎn)便、快速、操作安全。薄層色譜法中的確證試驗(yàn)是利用三氟醋酸和黃曲霉毒素B1的特異性反應(yīng)所生產(chǎn)的衍生物，確證黃曲霉毒素B1。結(jié)合國(guó)際先進(jìn)酶聯(lián)免疫吸附法和傳統(tǒng)方法的優(yōu)點(diǎn)，科學(xué)地實(shí)現(xiàn)了快速、可靠、準(zhǔn)確測(cè)定黃曲霉毒素B1的目的。

張?。?013）也研究表示薄層色譜法測(cè)定玉米中黃曲霉毒素B1含量有操作繁瑣、使用化學(xué)試劑量大、對(duì)實(shí)驗(yàn)人員健康危害大、定量差、耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn)。張俊個(gè)人建議推廣使用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定糧食及其制品中黃曲霉毒素B1含量。

3.4 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

一般來說，組織中黃曲霉毒素含量很低，而液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有比高效色譜法更高的靈敏度和準(zhǔn)確性，如今這種方法還極少使用在測(cè)定組織霉菌毒素含量中。該方法檢測(cè)限可達(dá)0.02～0.025 ug/L。84%甲醇水溶液提取樣品中，正己烷脫脂，HLB固相萃取柱凈化。采用電噴霧電離，正離子掃描，選擇多反應(yīng)檢測(cè)模式（MRM）監(jiān)測(cè)，外標(biāo)法定量，該法靈敏，結(jié)果可靠。

甘盛等（2016）研究利用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)軟膠囊中藥用油輔料內(nèi)黃曲霉毒素B1含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明此法靈敏準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，干擾少，重現(xiàn)性佳，對(duì)含油藥物制劑中黃曲霉毒素B1含量檢測(cè)有參考意義。

孫偉華等（2017）在基于分散固相萃取液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定大米中8種真菌毒素試驗(yàn)中取得了成功并表示此方法實(shí)用、可靠，具有簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可作為大米中真菌毒素的快速檢測(cè)方法。

4 小結(jié)

黃曲霉毒素B1容易污染飼料，對(duì)人畜健康會(huì)造成嚴(yán)重危害，容易造成經(jīng)濟(jì)價(jià)值損失，目前各學(xué)者對(duì)黃曲毒素B1檢測(cè)方法仍在不斷研究，液相色譜法所需設(shè)備簡(jiǎn)單，相對(duì)傳統(tǒng)，目前國(guó)內(nèi)外仍在應(yīng)用，但其存在耗時(shí)較長(zhǎng)、操作繁瑣、使用化學(xué)試劑量大、對(duì)實(shí)驗(yàn)人員健康危害大、定量差等不足之處;液相色譜法的準(zhǔn)確率相對(duì)較高，目前也已廣泛應(yīng)用：酶聯(lián)免疫法就目前來說比較先進(jìn)，但是其也有缺點(diǎn)存在，比如酶的活性易受試驗(yàn)條件影響，結(jié)果穩(wěn)定性差，但總的來說其優(yōu)點(diǎn)多于缺點(diǎn)，所以不少學(xué)者開始推薦使用酶聯(lián)免疫法測(cè)定黃曲霉毒素Bl在食品和飼料中的含量;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法目前使用較少，但其靈敏度和準(zhǔn)確度相對(duì)較高，近年來也有關(guān)于此方法的研究，筆者認(rèn)為，此方法在以后也會(huì)被廣泛推廣應(yīng)用。

總的來說，每種方法都有其優(yōu)、缺點(diǎn)，在日常生產(chǎn)中具體使用什么方法還是得具體針對(duì)其當(dāng)前條件做出選擇。希望以后能找到更方便有效的檢測(cè)方法，達(dá)到快速和準(zhǔn)確監(jiān)控飼料中的黃曲霉毒素含量。

參考文獻(xiàn)（略）