鄒純才，呂文雅，周雨婷，鄢海燕，陳 華，江 薈

瓜蔞為葫蘆科植物栝樓（Trichosanthes kirilowii Maxim）或雙邊栝樓（Trichosanthes rosthornii Harms）的干燥成熟果實(shí)，有寬胸散結(jié)之功效［1］.現(xiàn)代藥理研究表明，瓜蔞具有增加冠脈流量、改善心肌缺血、抗血小板聚集等藥理活性，用于心血管疾病的預(yù)防與治療［2，3］.

薤白為百合科植物小根蒜（Allium macrostemon Bge）主要生長在高海拔地帶，如吉林省長白山地區(qū)的薤白就比較多見.薤白（Allium chinense G.Don）的干燥鱗莖，用于胸痹心痛，脘腹痞滿脹痛，瀉痢后重［1］.薤白具有增強(qiáng)免疫力、保護(hù)心肌組織、降脂、抗氧化、擴(kuò)張血管、抑制凝血和抗血栓等多種藥理作用［4］.薤白為病癥引經(jīng)藥，在治療胸悶、氣短、心悸等心陽不通時加入薤白能引藥歸心經(jīng)［5］.

瓜蔞薤白配伍使用源自于張仲景的《金匱要略·胸痹心痛短氣病脈證治》篇.有關(guān)瓜蔞薤白配伍抗凝血的研究少有報(bào)道.為此，本課題通過對瓜蔞、薤白及其配伍抗小鼠凝血效果的研究，探討薤白對瓜蔞抗凝血效果的影響，以期為瓜蔞薤白配伍抗血栓及其機(jī)制的深入研究奠定基礎(chǔ).

1 材料與儀器

1.1 儀器

EXTECH 365515型電子秒表（上海儀博儀器有限公司）；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司）；JW-2017HR高速冷凍離心機(jī)（安徽省嘉文儀器裝備有限公司）；FD5-series freeze dryer（sim international group）.

1.2 試藥

瓜蔞、薤白（河北安國市御顏坊中藥材公司，批號均為：20170501）；復(fù)方丹參滴丸（天津天士力制藥股份有限公司，27mg/丸，批號：20170411）；水合氯醛（上海譜振生物科技有限公司，批號：20160404）；活化部分凝血活酶時間測試盒（液體白陶土）（批號：20180327，南京建成生物工程研究所）、凝血酶原時間（PT）測定試劑盒（批號：20180327，南京建成生物工程研究所）；其余試劑為分析純.

1.3 實(shí)驗(yàn)動物

清潔級昆明小鼠，體重17～20g，雌雄各半，由南京青龍山動物養(yǎng)殖場提供，合格證號：SCXK（蘇）2017-0001.

2 方法

2.1 溶液的制備

（1）瓜蔞溶液的制備.取瓜蔞適量，按料液比1∶10（g/mL）加水回流提取2次，每次1h，合并提取液并減壓回收溶劑，得浸膏（相對密度1.20），用80%乙醇醇沉后放置36h，取上清液并減壓回收溶劑得浸膏，冷凍干燥24h得瓜蔞提取物.瓜蔞提取物用水溶解，制備瓜蔞溶液備用.

（2）薤白溶液的制備.取薤白適量，按上文溶液的制備方法制備薤白溶液備用.

（3）瓜蔞薤白溶液的制備.取瓜蔞、薤白，按1.5∶1（g∶g）配伍，取配伍后的瓜蔞薤白適量，按上文溶液的制備方法制備瓜蔞薤白溶液備用.

2.2 給藥劑量及實(shí)驗(yàn)分組

每個測定指標(biāo)取小鼠110只，隨機(jī)分為11組：空白組、復(fù)方丹參滴丸組（參照復(fù)方丹參滴丸說明，按成人60kg給藥0.81g計(jì)，小鼠給藥劑量為：0.12g/kg，陽性對照組）、瓜蔞組（參照《中國藥典》2015年版，按成人60kg給予瓜蔞提取物0.9g計(jì)，小鼠低、中、高劑量組為：0.15g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg），薤白組（參照《中國藥典》2015年版，按成人60kg給予薤白提取物0.6g計(jì)，小鼠低、中、高劑量組為：0.1g/kg、0.5g/kg、1.0g/kg），瓜蔞薤白組（參照《中國藥典》2015年版，按成人60kg給予瓜蔞薤白提取物1.5g計(jì)，小鼠低、中、高劑量組為：0.25g/kg、1.5g/kg、3.0g/kg），每組10只，空白組給予純水，各組每日灌胃一次，灌胃容量0.5mL/20g，連續(xù)灌胃7d.

2.3 瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠出血時間（bleeding time，BT）的影響

小鼠于末次給藥前12h，禁食不禁水，末次給藥1h后，固定小鼠，于小鼠尾尖3mm處切斷并計(jì)時，每隔30s用濾紙檢一次至出血停止為BT［6］.

2.4 瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠凝血時間（clotting time，CT）的影響

小鼠于末次給藥前12h，禁食不禁水，末次給藥后1h，用玻璃毛細(xì)管插入小鼠內(nèi)眥靜脈叢至血柱達(dá)5cm后計(jì)時，每隔30s折斷一小段至出現(xiàn)血凝絲的時間即為 CT［6］.

2.5 凝血酶原時間（prothrombin time，PT）的測定

小鼠于末次給藥前12h，禁食不禁水，末次灌胃1h后，摘眼球取血，枸櫞酸鈉抗凝，搖勻，1000r/min離心15min制備血漿，按試劑盒的方法測定.

2.6 活化部分凝血酶原時間（activated partial thromboplastin time，APTT）的測定［6］

血漿制備同“2.5”，按試劑盒方法測定.

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有顯著性.

3 結(jié)果

3.1 瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠BT、CT的影響

按“2.3”的方法分別測定瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠凝血及出血時間、凝血酶原時間和活化部分凝血酶原時間的影響.結(jié)果見表1.

與空白組比較，復(fù)方丹參滴丸組及各給藥組均可延長小鼠BT時間（P＜0.01）；除薤白組外，復(fù)方丹參滴丸組及各給藥組均可延長小鼠CT時間（P＜0.01）.與同劑量的瓜蔞薤白組比較，瓜蔞組及薤白組在延長小鼠BT時間上無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.瓜蔞薤白組在延長小鼠CT時間上明顯優(yōu)于同劑量薤白組，且中、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01）.

表1 瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠BT、CT的影響（xˉ±s，n=10）

3.2 瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠PT、APTT的影響

按“2.4”“2.5”和“2.6”的方法，分別測定瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠凝血及出血時間的影響、凝血酶原時間和活化部分凝血酶原時間.結(jié)果見表2.與空白組比較，復(fù)方丹參滴丸組及各給藥組均可延長小鼠PT時間（P＜0.01）；復(fù)方丹參滴丸組及各給藥組均可延長小鼠APTT時間（P＜0.01）.與同劑量的瓜蔞薤白組比較，瓜蔞組在延長小鼠PT及APTT時間上無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.瓜蔞薤白組在延長小鼠PT時間上明顯優(yōu)于同劑量薤白組，且中、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01）；瓜蔞薤白組在延長小鼠APTT時間上明顯優(yōu)于同劑量薤白組，且高、低劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）.

表2 瓜蔞、薤白及瓜蔞薤白配伍對小鼠PT、APTT的影響（xˉ±s，n=10）

4 討論

目前，臨床常用的抗血小板藥物主要有：阿司匹林、氯吡格雷、阿昔單抗等［6］，但不良反應(yīng)較多［7］，作用機(jī)制單一，部分人群對阿司匹林和氯吡格雷抵抗或反應(yīng)性低.為此，尋找高效安全的抗血小板藥物仍為各國研究者關(guān)注的重點(diǎn).

劉岱琳等利用體外抗血小板聚集的活性測試體系對從瓜蔞中分離出的化合物進(jìn)行了測定，證實(shí)了瓜蔞中存在抗血小板聚集物質(zhì)，如腺苷等［3］.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明了瓜蔞的抗凝血作用.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，瓜蔞由低劑量到中劑量呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，但當(dāng)達(dá)到高劑量后，BT、CT、PT、APTT四項(xiàng)指標(biāo)均未延長.

現(xiàn)有文獻(xiàn)表明，薤白具有抑制凝血和抗血栓等多種藥理作用.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，薤白由低劑量到高劑量呈現(xiàn)量效關(guān)系.

本實(shí)驗(yàn)在探討瓜蔞、薤白兩味藥單獨(dú)使用抗凝血作用的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了瓜蔞薤白配伍的抗凝血作用.瓜蔞薤白按1.5∶1配伍后其抗凝效果低劑量到中劑量呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，但當(dāng)達(dá)到高劑量后，BT、CT、PT、APTT四項(xiàng)指標(biāo)均未延長.與同劑量瓜蔞薤白組比較，瓜蔞組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；瓜蔞薤白組在延長小鼠CT時間上明顯優(yōu)于同劑量薤白組，且中、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01）.瓜蔞薤白組在延長小鼠APTT時間上明顯優(yōu)于同劑量薤白組，且高、低劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）.

綜上所述，瓜蔞、薤白均具有抗凝血作用，瓜蔞薤白配伍的抗凝血作用以瓜蔞為主，薤白為輔.