陳新濤，呂光輝，陳黎

(十堰市太和醫(yī)院/湖北醫(yī)藥學院 藥學部，湖北 十堰 442000)

大白杜鵑Rhododendrondecorum為杜鵑花科杜鵑花亞科杜鵑花屬植物，產于四川西部至西南部、貴州西部、云南西北部和西藏東南部，生于海拔1000～3300 m的灌叢中或森林下，主產于中國四川、貴州、云南和西藏，緬甸東北部也有分布。該物種因花朵美麗，有栽培，具有較高的觀賞價值。本實驗標本采自四川寶興，民間常用其根煎煮治療跌打損傷[1]。杜鵑花屬植物化學成分十分豐富[2-3]，但是文獻對大白杜鵑萜類的研究較少，文獻僅僅報道了少量的二萜類、黃酮類等化合物[4-7]，為了從天然產物中分離得到結構新穎的化合物，我們選取大白杜鵑進行了深入研究。從大白杜鵑的95%乙醇提取物中分離鑒定了8個化合物，其中包括6個二萜類化合物，2個降倍半萜類化合物，分別是grayanotoxin I(1)，grayanotoxin X(2)，grayanotoxin VIII(3)，rhododecorumin VII(4)，leucothol A(5)，grayanotoxin XXI(6)，(+)-Dehydrovomifoliol(7)，5α，6α-Epoxy-3β-hydroxy-megastigm-7-en-9-one(8)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

核磁共振譜(Bruker AM-400)，半制備液相(Agilent 1100)，氘代試劑，J&K Chemical LTD、Cambridge Isotope Laboratories，Inc.半制備型色譜柱為YMC(5 μm，RP C18，250 mm×100 mm)，正相柱層析硅膠(100目、200～300目，青島海洋化工)；高效液相色譜純甲醇、分析純甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、石油醚(上海國藥集團化學試劑有限公司)；純凈水(杭州娃哈哈集團)。

1.2 材料

植物材料于2016年從四川寶興海拔1400 m左右采摘，由湖北醫(yī)藥學院藥學院葉方教授鑒定為杜鵑花屬植物大白杜鵑Rhododendrondecorum.，植物樣本現保存在湖北十堰市太和醫(yī)院武當中藥研究所標本室(No.20170725)。

2 提取和分離

干燥的大白杜鵑枝葉12 kg粉碎，在室溫條件下反復用95%的乙醇冷浸提取4次，真空濃縮得總浸膏。然后將總浸膏用熱水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，分別合并濃縮后得到石油醚部位180 g，乙酸乙酯部位102 g。將乙酸乙酯部位用大正相柱(CHCl3-MeOH，50∶1→1∶1)分成4個組分(A-D)。B組分用用ODS柱分成了5個子組分(MeOH-H2O，30%→90%)。各子組分又經凝膠、正相以及半制備HPLC分離純化得到化合物3(7.5 mg)、5(3.8 mg)、6(3.9 mg)。C組分用RP-C18柱分成了3個子組分(MeOH-H2O，30%→90%)。各子組分又經凝膠、正相以及半制備HPLC分離純化得到化合物2(28.4 mg)、4(11.5 mg)、7(14.3 mg)。D組分反復用RP-C18柱，正相以及半制備HPLC分離純化得到化合物1(8.6 mg)、化合物5(6.4 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：無色針晶；ESI-MSm/z：413.12[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：2.52(1H，dd，J=11.8，4.4 Hz，H-1)，2.11(1H，m，H-2α)，1.93(1H，m，H-2β)，3.51(1H，d，J=4.4 Hz，H-3)，3.52(1H，d，J=4.6 Hz，H-6)，1.91(1H，d，J=4.4 Hz，H-7β)，1.84(1H，br s，H-7α)，2.07(1H，br s，H-9)，1.66(1H，dd，J=13.5，6.0 Hz，H-11β)，1.51(1H，m，H-11α)，2.08(1H，overlap，H-12β)，1.53(1H，m，H-12α)，1.75(1H，m，H-13)，5.38(1H，s，H-14)，1.95(1H，s，H-15α)1.85(1H，s，H-15β)，1.26(3H，s，H-17)，0.91(13H，s，H-18)，1.12(3H，s，H-19)，1.29(3H，s，H-20)，2.04(3H，s，14-COCH3)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：51.2(C-1)，35.1(C-2)，83.5(C-3)，51.4(C-4)，84.6(C-5)，74.2(C-6)，43.4(C-7)，52.2(C-8)，55.5(C-9)，79.3(C-10)，22.6(C-11)，27.5(C-12)，59.5(C-13)，83.0(C-14)，60.2(C-15)，80.2(C-16)，23.5(C-17)，23.5(C-18)，19.1(C-19)，27.1(C-20)，172.3(14-COCH3)，21.3(14-COCH3)。以上數據與文獻報道的grayanotoxin I數據一致[8]，化學結構見圖1。

化合物2：無色針晶；ESI-MSm/z：377.05[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.98(3H，s，H-18)，1.15(3H，s，H-19)，1.82(1H，ddd，J=14.4，8.9，2.7 Hz，H-2a)，2.05(3H，s，14-COCH3)，2.36(1H，m，H-2b)，2.44(2H，m，H-15)，2.62(1H，m，H-13)，2.72(1H，t，J=6.7 Hz，H-9)，2.94(1H，t，J=9.4 Hz，H-1)，3.63(1H，dd，J=6.6，2.7 Hz，H-3)，3.70(1H，dd，J=10.5，2.2 Hz，H-6)，4.88(1H，s，H-17a)，4.92(1H，s，H-17b)，5.01(1H，s，H-20a)，5.08(1H，s，H-20b)，5.22(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：45.4(C-1)，38.9(C-2)，82.5(C-3)，51.4(C-4)，84.2(C-5)，71.6(C-6)，40.1(C-7)，48.1(C-8)，54.6(C-9)，151.8(C-10)，26.3(C-11)，32.4(C-12)，49.2(C-13)，81.8(C-14)，50.5(C-15)，155.7(C-16)，106.8(C-17)，24.7(C-18)，19.4(C-19)，114.4(C-20)，172.9(14-COCH3)，21.2(14-COCH3)。以上數據與文獻報道的grayanotoxin X數據一致[9]，化學結構見圖1。

化合物3：無色針晶；ESI-MSm/z：335.15[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.04(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-19)，1.72(1H，dd，J=14.3，2.3 Hz，H-7α)，1.83(1H，ddd，J=14.4，9.2，2.8 Hz，H-2β)，1.92(1H，dd，J=14.3，10.2 Hz，H-7β)，2.25(1H，d，J=16.5 Hz，H-15β)，2.34(1H，ddd，J=14.4，9.8，6.8 Hz，H-2α)，2.45(1H，dt，J=16.5，2.5 Hz，H-15α)，2.53(1H，d，J=5.1 Hz，H-13)，2.65(1H，t，J=6.8 Hz，H-9)，2.95(1H，t，J=9.5，H-1)，3.62(1H，dd，J=6.8，2.8 Hz，H-3)，4.00(1H，dd，J=10.2，2.3 Hz，H-6)，4.06(1H，s，H-14)，4.86(1H，s，H-17a)，4.93(1H，s，H-17b)，4.96(1H，s，H-20a)，5.04(1H，s，H-20b)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：45.4(C-1)，39.1(C-2)，82.6(C-3)，51.5(C-4)，84.0(C-5)，71.6(C-6)，40.0(C-7)，48.8(C-8)，55.1(C-9)，152.5(C-10)，26.1(C-11)，32.6(C-12)，51.2(C-13)，78.1(C-14)，50.1(C-15)，157.3(C-16)，106.5(C-17)，24.9(C-18)，19.4(C-19)，113.8(C-20)。以上數據與文獻報道的grayanotoxin VIII數據一致[10]，化學結構見圖1。

化合物4：無色針晶；ESI-MSm/z：351.20[M+H]+。1H-NMR(C6D5N，400 MHz)δ：3.46(1H，brd，H-1)，3.75(1H，d，J=2.6 Hz，H-2)，3.28(1H，d，J=2.9 Hz，H-3)，4.04(1H，dd，J=11.2，2.9 Hz，H-6)，1.99(1H，m，H-7a)，2.62(1H，t，J=12.2 Hz，H-7b)，2.44(1H，d，J=6.4 Hz，H-9)，1.97(1H，m，H-11a)，2.07(1H，m，H-11b)，1.85(1H，m，H-12a)，2.03(1H，m，H-12b)，1.95(1H，d，J=11.6 Hz，H-14a)，2.61(1H，d，J=9.8 Hz，H-14b)，1.90(1H，d，J=15.3 Hz，H-15a)，2.09(1H，d，J=14.2 Hz，H-15b)，1.45(3H，s，H-17)，1.30(3H，s，H-18)，1.58(3H，s，H-19)，5.30(1H，s，H-20a)，5.63(1H，s，H-20b)；13C-NMR(C6D5N，100 MHz)δ：49.8(C-1)，60.2(C-2)，65.6(C-3)，48.1(C-4)，80.7(C-5)，74.0(C-6)，49.0(C-7)，41.2(C-8)，49.1(C-9)，151.3(C-10)，32.2(C-11)，33.0(C-12)，81.1(C-13)，44.5(C-14)，59.1(C-15)，77.3(C-16)，21.7(C-17)，21.2(C-18)，21.1(C-19)，115.8(C-20)。以上數據與文獻報道的Rhododecorumin VII數據一致[11]，化學結構見圖1。

化合物5：無色粉末；ESI-MSm/z：319.08[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：1.12(3H，s，H-19)，1.19(3H，s，H-18)，1.36(3H，s，H-17)，3.97(1H，t，J=2.8 Hz，H-3)，4.84(1H，s，H-20a)，4.94(1H，s，H-20b)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：42.8(C-1)，31.4(C-2)，78.4(C-3)，49.7(C-4)，214.6(C-5)，48.2(C-6)，38.4(C-7)，46.0(C-8)，49.8(C-9)，151.7(C-10)，21.4(C-11)，24.6(C-12)，49.2(C-13)，36.1(C-14)，55.1(C-15)，80.2(C-16)，24.2(C-17)，25.4(C-18)，21.1(C-19)，105.6(C-20)。以上數據與文獻報道的leucothol A數據一致[12]，化學結構見圖1。

化合物6：白色無定形粉末；ESI-MSm/z：395.14[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.14(3H，s，H-19)，1.30(3H，s，H-18)，1.37(3H，s，H-17)，2.01(3H，s，H-20)，2.06(3H，s，14-COCH3)，3.87(1H，dd，J=6.9，2.9 Hz，H-3)，4.07(1H，dd，J=4.8，2.0 Hz，H-6)，5.47(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：127.1(C-1)，33.5(C-2)，79.5(C-3)，51.8(C-4)，215.6(C-5)，70.3(C-6)，42.5(C-7)，55.1(C-8)，59.2(C-9)，143.2(C-10)，23.4(C-11)，28.3(C-12)，54.2(C-13)，82.0(C-14)，57.9(C-15)，80.2(C-16)，24.5(C-17)，23.9(C-18)，22.1(C-19)，16.7(C-20)，172.8(14-COCH3)，21.6(14-COCH3)。以上數據與文獻報道的grayanotoxin XXI數據一致[13]，化學結構見圖1。

化合物7：白色無定形粉末；ESI-MSm/z：223.20[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：0.99(3H，s，H-11)，1.08(3H，s，H-12)，1.86(3H，d，J=1.3 Hz，H-13)，2.28(3H，s，H-10)，2.50(1H，d，J=17.3 Hz，H-2a)，2.33(1H，d，J=17.3 Hz，H-2b)，5.93(1H，s，H-4)，6.45(1H，d，J=15.7 Hz，H-8)，6.81(1H，d，J=15.7 Hz，H-7)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：41.8(C-1)，49.7(C-2)，197.4(C-3)，127.6(C-4)，160.8(C-5)，79.5(C-6)，145.5(C-7)，130.5(C-8)，197.8(C-9)，28.6(C-10)，24.5(C-11)，23.1(C-12)，18.7(C-13)。以上數據與文獻報道的(+)-Dehydrovomifoliol數據一致[14]，化學結構見圖1。

化合物8：白色無定形粉末；ESI-MSm/z：225.09[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.96(3H，s，H-12)，1.18(3H，s，H-13)，1.19(3H，s，H-11)，1.58(1H，ddd，J=12.8，3.3，1.8 Hz，H-2a)，1.66(1H，dd，J=14.3，9.1 Hz，H-4a)，1.82(1H，d，J=12.8 Hz，H-2b)，2.28(3H，s，H-10)，2.30(1H，ddd，J=14.3，5.0，1.8 Hz，H-4b)，3.76(1H，m，H-3)，6.18(1H，d，J=15.8 Hz，H-8)，7.16(1H，d，J=15.8 Hz，H-7)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：36.4(C-1)，47.8(C-2)，64.7(C-3)，41.5(C-4)，69.3(C-5)，71.0(C-6)，145.6(C-7)，133.7(C-8)，200.4(C-9)，27.6(C-10)，29.9(C-11)，25.3(C-12)，20.2(C-13)。以上數據與文獻報道的5α，6α-Epoxy-3β-hydroxy-megastigm-7-en-9-one數據一致[15]，化學結構見圖1。

圖1 大白杜鵑中化合物1～8化學結構

4 結論

文獻中報道的對大白杜鵑化學成分和生物活性的研究主要集中在黃酮類成分上，杜鵑花屬植物化學成分豐富，主要包含揮發(fā)油、二萜、三萜、甾體、黃酮以及香豆素類化合物。該研究深化了對大白杜鵑化學成分的認識，豐富了杜鵑花屬植物中化合物的結構類型。

本實驗從大白杜鵑的95%乙醇提取物中分離鑒定了8個化合物，其中包括6個二萜類化合物，2個降倍半萜類化合物，除了化合物4，其余化合物均為首次從大白杜鵑枝葉中分離得到。該實驗為大白杜鵑的化學成分和藥理活性的研究提供了一定參考。