楊曉迷， 盧 軍， 孟 瑤， 阿依提拉·麥麥提江， 姜 林

(新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院藥研室， 烏魯木齊 830000)

2型糖尿病是一種慢性疾病，是胰島β細(xì)胞功能受損不能分泌足夠的胰島素和(或)胰島素抵抗的結(jié)果，胰島β細(xì)胞功能進(jìn)行性衰退及胰島素抵抗是導(dǎo)致糖尿病發(fā)生、發(fā)展的主要原因[1]。早期表現(xiàn)主要為尿糖升高，并伴隨脂質(zhì)紊亂以及氧化應(yīng)激等代謝異常[2-4]。目前治療糖尿病的藥物主要有增強(qiáng)胰島素敏感藥物如二甲雙胍、阿卡波糖等[5]。在糖尿病治療過程中，很多合成藥物會引起水腫，心力衰竭等不良反應(yīng)[6-7]。傳統(tǒng)中藥對糖尿病的治療具有療效穩(wěn)定、不良反應(yīng)少、多靶點效應(yīng)等特點[8-9]。復(fù)方降糖三號方為新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院常用方，主要有太子參、茯苓、白術(shù)、澤瀉等11味藥組成，方中太子參健脾益氣、潤肺生津。茯苓利水滲濕，白術(shù)健脾益氣。澤瀉利水滲濕，諸藥合用，除濕化痰之力更強(qiáng)。配伍山藥、葛根助君藥以健脾益氣，陳皮、半夏助君藥以健脾化痰。赤芍、丹參涼血活血化淤；郁金疏肝理氣，綜觀全方，補(bǔ)中氣，滲濕濁，行氣滯，使脾氣健運，濕邪得去，則諸癥自除。本方具有健脾益氣、化痰通絡(luò)的功效，臨床上主要用于脾虛痰於所致的高血糖，治療咽干口渴、乏力自汗、腰腿重困、肢體麻木伴針刺樣疼痛等癥狀的治療。采用鏈脲佐菌素溶液對小鼠進(jìn)行糖尿病造模實驗成功率基本可達(dá)80%[4]。本研究采用糖尿病小鼠模型，探究復(fù)方降糖三號方對糖尿病小鼠的治療作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1儀器SN1455-7153729型血糖儀(拜耳醫(yī)藥保健有限公司)，MULTI-SKAN型酶標(biāo)儀(美國Thermo Scientific公司)，TDZ5WS型低速離心機(jī)(鹽城市凱特實驗儀器有限公司)，HC-3518型高速離心機(jī)(長沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，WELLWASH型洗板機(jī)(北京伯邁科技有限公司)。

1.2試藥鏈脲佐菌素(STZ,北京中生瑞泰科技有限公司，批號614J033)，參芪降糖顆粒(甘肅佛仁制藥科技有限公司，批號00117048)，血糖試紙(長沙益群醫(yī)療器械有限公司，批號1A6875AA)，糖化血紅蛋白(HbAlc)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號A056-1 )，小鼠血清胰島素(INS)檢測試劑盒(ELISA法)(上?？吕咨锟萍加邢薰?，批號AK0017DEC14015)，小鼠血清NF-KB檢測試劑盒(ELISA法)(上?？吕咨锟萍加邢薰?，批號AK0018FEB07003)，小鼠血清TNF-α檢測試劑盒(ELISA法)(上海柯雷生物科技有限公司，批號AK0018FEB07002)，復(fù)方降糖三號方為新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院院內(nèi)制劑。

1.3動物昆明種雌性小鼠60只，體質(zhì)量(20±2)g，由新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(新)[2003-0002]；飼養(yǎng)溫度：(23±2)℃、相對濕度：40%～70%、通風(fēng)情況：10～20次/h、光照條件：12 h/12 h明暗交替。 飼養(yǎng)飼料及墊料均購自新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心，小鼠自購入當(dāng)日開始常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w。

1.4實驗方法

1.4.1 糖尿病小鼠模型的建立及給藥方法 取昆明種雌性小鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，隨機(jī)抽取10只為正常對照組，其余50只小鼠腹腔注射STZ 12 mg/10 g體質(zhì)量(稱取STZ粉末100 mg，溶于16.66 mL的pH4.5枸櫞酸緩沖溶液中)，3 d后腹腔注射STZ 18 mg/10 g體質(zhì)量，1 w后尾靜脈采血測定血糖，血糖值≥11.1 mmol/L即為建模成功，空白組(蒸餾水，0.1 mL/10 g體質(zhì)量)10只外，將50只糖尿病模型小鼠隨機(jī)分為模型組，陽性組(參芪顆粒0.1 mL/10 g體質(zhì)量)，復(fù)方降糖三號低(0.2 mL/10 g體質(zhì)量)、中( 0.4 mL/10 g體質(zhì)量)、高(0.8 mL/10 g體質(zhì)量)劑量組，每組10只，連續(xù)給藥4 w。

1.4.2 小鼠空腹血糖(FBG)、HbAlc的測定及血清 INS、HOMA-IR、TNF-α、NF-kB測定方法 小鼠末次給藥24 h后測定FBG，將小鼠麻醉后頸動脈取血，測定HbAlc，將剩余血液3 000 r/min離心5 min，分離血清，采用ELISA法測定血清中INS、HOMA-IR、TNF-α、NF-kB，測定方法按照試劑盒說明。

2 結(jié)果

2.1小鼠FBG的測定與模型組比，復(fù)方降糖三號方各劑量組小鼠FBG均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

表1 各組小鼠給藥后FBG的比較

注：與模型組比較，**P<0.01。

2.2小鼠血清INS含量、HOMA-IR的測定與模型組比，復(fù)方降糖三號方高劑量組小鼠血清INS含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方降糖三號方各劑量組小鼠血清HOMA-IR均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3小鼠血清HbAlc的測定與模型組相比，復(fù)方降糖三號方高劑量組小鼠血清HbAlc水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2.4小鼠血清TNF-αNF-kB的測定與模型組比，復(fù)方降糖三號方中、高劑量組小鼠血清TNF-α降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；復(fù)方降糖三號方低、中、高各劑量組小鼠血清NF-kB均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表4。

表4 各組小鼠給藥后血清TNF-α、NF-kB的比較

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

糖尿病發(fā)病原因大多是由于胰島B細(xì)胞功能受損不能夠分泌足夠的胰島素和胰島素抵抗的結(jié)果[10]。本研究觀察了復(fù)方降糖三號方對小鼠的血清胰島素及胰島素抵抗指數(shù)的影響，研究結(jié)果表明：復(fù)方降糖三號方中，低劑量組均對糖尿病小鼠的血清胰島素有升高作用，且各劑量組均能降低胰島素抵抗指數(shù)，提示復(fù)方降糖三號方對糖尿病小鼠有一定的治療作用。

2型糖尿病主要病理變化為糖代謝出現(xiàn)異常，患者體內(nèi)糖、脂肪過剩導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生了一種慢性的炎癥反應(yīng)，胰島 β細(xì)胞在氧化應(yīng)激下分泌TNF-α等炎癥因子，引起炎癥反應(yīng)加重胰島細(xì)胞損傷，使胰島素分泌減少[11-12]。產(chǎn)生的炎癥因子會與胰島素受體競爭性結(jié)合，導(dǎo)致胰島素作用生理作用消失，胰島素下游信號傳導(dǎo)通路被阻斷。本實驗結(jié)果初步顯示復(fù)方降糖三號方中，高劑量組可降低血清TNF-α水平，且有顯著性差異(P<0.01)，提示復(fù)方降糖三號方治療糖尿病可能與降低血清中的TNF-α的水平有關(guān)。在諸多的炎性因子中，NF-kB是糖尿病病理生理機(jī)制中最重要的轉(zhuǎn)錄因子之一，且NF-kB是系膜細(xì)胞表達(dá)多種免疫炎癥相關(guān)基因的調(diào)控樞紐，通過激活的NF-kB通路可誘導(dǎo)靶基因炎癥分子在機(jī)體的高表達(dá)，炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，而抑制NF-kB通路是糖尿病炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵通路之一[13-14]。

該實驗結(jié)果表明復(fù)方降糖三號方各劑量組均能降低血清中的NF-kB水平，提示該方在治療糖尿病的過程中可能與下調(diào)NF-kB水平有關(guān)。

綜上所述，復(fù)方降糖三號方對糖尿病小鼠FBG、HbAlc有降低作用，可以升高INS水平及降低HOMA-IR，同時還可降低糖尿病小鼠血清TNF-α及NF-kB水平，對糖尿病小鼠有一定的治療改善作用，其作用機(jī)理可能與下調(diào)NF-kB水平及降低TNF-α有關(guān)。動物實驗的結(jié)果為復(fù)方降糖三號方的新藥申報奠定了一定的基礎(chǔ)。