張家俠， 孫欽玉， 葛超美， 葉 濤， 夏先江， 丁 勇

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，安徽黃山 245000)

灰茶尺蠖(EctropisgrisescensWarren)和茶尺蠖(EctropisobliquaProut)屬鱗翅目尺蛾科的2個(gè)近緣種，為茶園主要的食葉類害蟲[1-2]。茶尺蠖和灰茶尺蠖的形態(tài)特征極為相似，在生產(chǎn)上常統(tǒng)稱為茶尺蠖或茶尺蛾。近年來，在茶園使用茶尺蠖核型多角體病毒(EoNPV)時(shí)發(fā)現(xiàn)，EoNPV對不同地區(qū)茶尺蠖的防治效果存在差異。席羽研究發(fā)現(xiàn)，不同地理種群的“茶尺蠖”對EoNPV的敏感性存在差異，在11個(gè)“茶尺蠖”地理種群中，8個(gè)地理種群(江蘇揚(yáng)州、安徽潛山、浙江衢州、浙江龍游、湖南長沙、湖南高橋、湖北武漢、湖北襄樊)對EoNPV為低敏感性，3個(gè)地理種群(江蘇宜興、浙江杭州、安徽十字鋪)對EoNPV為高敏感性，且種群間毒力水平差異高達(dá)700余倍，并存在生殖隔離，判斷兩者可能不是同1個(gè)種[3]。為明確差異，姜楠等通過形態(tài)學(xué)鑒定和基于線粒體COⅠ的分子鑒定手段成功區(qū)分灰茶尺蠖和茶尺蠖，并發(fā)現(xiàn)對EoNPV低敏感性種群為灰茶尺蠖，高敏感種群為茶尺蠖[4]。現(xiàn)初步明確灰茶尺蠖廣泛分布于我國各產(chǎn)茶省份(市、區(qū))或地區(qū)，而目前發(fā)現(xiàn)茶尺蠖主要分布在浙江、江蘇、安徽3省交界的部分區(qū)域[5]。研究3種茶尺蠖誘芯和1種中試階段的灰茶尺蠖誘芯的引誘效果差異，旨在明確試驗(yàn)區(qū)效果最優(yōu)尺蠖性誘芯，并為茶園尺蠖的預(yù)測預(yù)報(bào)和防治提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

4種誘芯中除北京中捷四方生物科技有限公司的誘芯為毛細(xì)管型誘芯以外，其他3種均為反口鐘型天然橡膠誘芯，具體信息和編號如表1所示。誘捕器和白色黏蟲板均購自福建省漳州市英格爾農(nóng)業(yè)科技有限公司，其中誘捕器為長×寬×高為 27 cm×21.6 cm×14 cm的船型誘捕器，黏蟲板為 28 cm×22 cm 的單面黏蟲板。

表1 誘芯基本信息

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 性誘芯的田間布置 試驗(yàn)時(shí)間為2016年6月23日至9月6日，試驗(yàn)地點(diǎn)在安徽省黃山市屯溪區(qū)屯溪試驗(yàn)茶廠茶園，試驗(yàn)期間茶園未使用藥劑。

選擇總面積約4 669 m2的連片茶園，按三角形設(shè)置3個(gè)誘捕區(qū)(即重復(fù)3次)，每誘捕區(qū)由4個(gè)誘捕器組成，按正方形設(shè)置，誘芯分別是中捷四方(BL)、英格爾(ZL)、紐康(NL)、中茶所(TL)。誘捕區(qū)間距為45 m，每個(gè)誘捕器間距為12 m，誘捕器與田邊間距不少于5 m，將3根竹竿呈H型固定，誘捕器懸掛在橫向竹竿上，底部與茶蓬間距約為20 cm，將誘芯嵌入誘芯架內(nèi)，誘捕器安置后，每25 d更換1次誘芯，每隔3 d調(diào)查1次，調(diào)查時(shí)間選擇在上午，分別檢查誘蛾數(shù)，統(tǒng)計(jì)并記載每次誘捕器誘蛾數(shù)量。田間具體布置方案如圖1所示。

1.2.2 尺蠖種類的分子鑒定 采用線粒體COⅠ分子鑒定方法對茶園尺蠖種類進(jìn)行鑒定。

將4種性誘芯誘集的尺蠖成蟲分別進(jìn)行基因組DNA提取(編號分別為：BL-1、BL-2、BL-3；ZL-1、ZL-2、ZL-3；NL-1、NL-2、NL-3；TL-1、TL-2、TL-3)，所用試劑盒為TIANamp Blood DNA Kit[天根生化科技(北京)有限公司]。以提取的總DNA為模板，采用通用引物(表2)擴(kuò)增灰茶尺蠖線粒體DNACOⅠ基因片段，PCR擴(kuò)增方法參照袁志軍等的方法[6-7]。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測合格后，送至上海華津生物科技有限公司進(jìn)行雙向測序。

表2 線粒體COⅠ基因引物序列

將測序所得的DNA序列用SeqMan 7.1軟件進(jìn)行校對拼接后，在NCBI網(wǎng)站(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)上進(jìn)行Blast檢索和同源性比對，以確定所得序列是否為所需要的目的基因，并利用DNAMAN軟件進(jìn)行多序列比對。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種性誘芯對茶園尺蠖的引誘效果

由表3可知，在整個(gè)調(diào)查期，4種誘芯3次重復(fù)累計(jì)誘殺尺蠖成蟲數(shù)分別為19(BL)、4(ZL)、196(NL)、797(TL)頭。與其他3種誘芯相比，誘芯TL誘捕成蟲量最高，差異極顯著，其中誘芯NL對茶園尺蠖也具有一定的引誘能力，較BL、ZL的誘捕量要高，差異顯著，而BL與ZL間差異不顯著。另外，從日誘捕量分析可知，4種誘芯的最高日平均誘蟲量差異明顯，調(diào)查期內(nèi)BL日均誘蟲量最高為 1.67頭/d，ZL為 0.67頭/d，NL為13.33頭/d，而TL為 24.67頭/d，TL的引誘能力明顯高于其他3種誘芯(圖2)。由此可知，灰茶尺蠖誘芯TL對試驗(yàn)區(qū)茶園尺蠖的引誘效果最好，而另外3種茶尺蠖誘芯對該試驗(yàn)區(qū)尺蠖引誘效果相對較差，其中誘芯NL對尺蠖有一定的引誘能力。

表3 4種誘芯田間誘殺效果

注：統(tǒng)計(jì)分析采用DPS 7.05 Duncan’s新復(fù)極差法，同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母、大寫字母分別表示處理間差異顯著(P<0.05)、差異極顯著(P<0.01)。

2.2 試驗(yàn)區(qū)茶園尺蠖的種類

基于線粒體COⅠ分子鑒定手段，利用DNAMAN基因比對軟件對各誘芯誘集的尺蠖成蟲線粒體COⅠ基因499 bp序列進(jìn)行比較分析，比對結(jié)果如圖3所示。獲取的試驗(yàn)區(qū)樣本序列與姜楠等得到的灰茶尺蠖COⅠ基因序列(GenBank登錄號：KJ704354)[4]完全一致，說明該試驗(yàn)區(qū)尺蠖發(fā)生種類為灰茶尺蠖。

2.3 茶園尺蠖成蟲發(fā)生高峰期預(yù)測

通過分子鑒定已明確該試驗(yàn)區(qū)所發(fā)生尺蠖為灰茶尺蠖。將整個(gè)調(diào)查期內(nèi)灰茶尺蠖誘芯TL的誘蟲高峰期與3種茶尺蠖誘芯中引誘效果相對好的NL進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明，6月26日灰茶尺蠖誘芯TL和茶尺蠖誘芯NL 3 d平均誘蟲量分別為24.7、3.3頭，均為同期內(nèi)最高值。根據(jù)文獻(xiàn)和歷史發(fā)生期調(diào)查數(shù)據(jù)[8]，由圖4可類推，6月25—27日為灰茶尺蠖的第2代成蟲發(fā)生高峰期；7月19—21日為第3代成蟲發(fā)生高峰；8月12—14日為第4代成蟲發(fā)生高峰期。另外，第2代成蟲發(fā)生高峰期誘蟲量明顯高于第3、4代，可能與不同代次發(fā)生期溫濕度有關(guān)。

3 結(jié)論與討論

(灰)茶尺蠖是茶園主要的食葉類害蟲，對茶葉生產(chǎn)可造成嚴(yán)重影響[9-12]。性誘劑作為一種重要的無公害防治手段，隨著其開發(fā)和技術(shù)的不斷成熟，目前已廣泛應(yīng)用于(灰)茶尺蠖的預(yù)測預(yù)報(bào)和生物防治中[13-17]。由于田間存在茶尺蠖和灰茶尺蠖2種尺蠖，所以明確不同地區(qū)茶園的高效誘芯種類，對于合理有效地防治茶園尺蠖具有重要的生產(chǎn)指導(dǎo)意義。

本研究對比分析3種茶尺蠖誘芯和1種中試階段的灰茶尺蠖誘芯在田間對尺蠖的引誘效果，結(jié)果表明，3種茶尺蠖誘芯和1種灰茶尺蠖誘芯在試驗(yàn)區(qū)對尺蠖的引誘效果存在明顯差異，其中以灰茶尺蠖誘芯的引誘蟲頭數(shù)最多，與其他3種茶尺蠖誘芯均差異極顯著。對比分析所誘集尺蠖的線粒體COⅠ 基因序列發(fā)現(xiàn)，該試驗(yàn)區(qū)尺蠖均為灰茶尺蠖，所以灰茶尺蠖誘芯在該地區(qū)引誘效果最好。性信息素專一性強(qiáng)，在生產(chǎn)中根據(jù)尺蠖發(fā)生種類， 有針對性地選擇誘芯對尺蠖高效防治至關(guān)重要。

通過對成蟲發(fā)生高峰期進(jìn)行預(yù)測可知，調(diào)查期各代成蟲高峰期誘捕量存在較大差異，可能與氣候條件有關(guān)[8，18]?；也璩唧蹲钸m溫度為21～25 ℃，該溫度范圍內(nèi)繁殖力最強(qiáng)，溫度大于27 ℃時(shí)生命力開始下降[8]。試驗(yàn)期內(nèi)，6月下旬黃山溫度為21～27 ℃，適合尺蠖生長發(fā)育，誘捕數(shù)量最高；7月、8月溫度升至30 ℃以上，成蟲發(fā)生高峰期溫度則高達(dá)35 ℃以上，尺蠖生長發(fā)育受到抑制，誘蟲量下降。