黃燕萍 王寶維* 劉國(guó)棟 葛文華 張名愛 岳 斌

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，青島 266109；2.國(guó)家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營(yíng)養(yǎng)與飼料功能研究室，青島 266109)

鋅是人體內(nèi)多種酶的催化劑，是參與細(xì)胞分裂的重要物質(zhì)，對(duì)動(dòng)物、孕婦、嬰兒的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要意義，尤其是對(duì)孕婦和嬰兒[1-2]。孕期缺鋅會(huì)對(duì)導(dǎo)致孕婦流產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩、畸形，甚至是死胎的發(fā)生。并且嬰幼兒先天性缺鋅會(huì)出現(xiàn)厭食、注意力不集中、消瘦等癥狀，會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、智力降低、免疫力降低等現(xiàn)象[3-5]。王德才等[6]研究發(fā)現(xiàn)，缺鋅或高鋅大鼠的體重(BW)、飼料效率均低于正常組，并影響相關(guān)器官指數(shù)。Wedekind等[7]和王代剛[8]研究表明，飼糧中添加外源鋅能顯著影響組織器官、血清中鋅含量及血清堿性磷酸酶(AKP)活性。另外，崔志英等[9]研究表明，動(dòng)物對(duì)有機(jī)鋅的生物利用率高于無機(jī)鋅。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)微生物富集微量金屬元素的研究主要集中在酵母菌對(duì)環(huán)境中的銅離子(Cu2+)、鋅離子(Zn2+)、鎘離子(Cd2+)等金屬離子的吸附[10]。而趙佳英等[11]研究表明，枯草芽孢桿菌能夠富集鋅離子，能夠完成無機(jī)鋅向有機(jī)鋅的轉(zhuǎn)化?？莶菅挎邨U菌鋅作為一種新型補(bǔ)鋅添加劑，國(guó)內(nèi)外研究相對(duì)較少；利用枯草芽孢桿菌鋅干預(yù)先天性缺鋅大鼠的研究目前還處于空白。本試驗(yàn)以先天性缺鋅大鼠為研究對(duì)象，旨在研究枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠生長(zhǎng)性能、器官指數(shù)、養(yǎng)分利用率和器官中鋅、銅、鐵含量的影響，確定枯草芽孢桿菌鋅的作用效果和鋅減量化添加的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

枯草芽孢桿菌鋅：由國(guó)家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營(yíng)養(yǎng)與飼料功能研究室提供，枯草芽孢桿菌菌活數(shù)3×109CFU/g，鋅含量2 511.55 mg/kg。食品級(jí)硫酸鋅(ZnSO4)：購(gòu)自湖北金銘洲化學(xué)有限公司，分析純，七水合硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)含量不少于99.5%。AKP、金屬硫蛋白(MT)、銅鋅超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)試劑盒：均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 主要儀器

臺(tái)式高速大容量冷凍(湘儀離心機(jī)儀器有限公司)、醫(yī)用低溫保存箱(DW-86L388J青島海爾特種電器有限公司)、超級(jí)恒溫水浴鍋(DKB-501，上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公)、全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Multiskan MK3)、電子天平(AR1140，奧豪斯國(guó)際貿(mào)易有限公司)、微電腦自動(dòng)熱量計(jì)(WZR-1T)、等離子體發(fā)射光譜儀(ICP，美國(guó)PE公司)、真空干燥機(jī)(FD-1A-50，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)、凱氏定氮儀(FOSS TECATOR)、脂肪測(cè)定儀(SZC-C，上海纖檢儀器有限公司)、纖維素分析儀(ANKOM TECHNOLOGY)。

1.3 試驗(yàn)飼糧

基礎(chǔ)飼糧以玉米淀粉、大豆分離蛋白、蔗糖等為基礎(chǔ)進(jìn)行配制，經(jīng)檢測(cè)基礎(chǔ)飼糧中鋅水平為13.00 mg/kg，為缺鋅飼糧；正常飼糧是在缺鋅飼糧基礎(chǔ)上添加ZnSO4，使飼糧鋅水平達(dá)到38.00 mg/kg?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用健康SD大鼠，分為2個(gè)試驗(yàn)：先天性缺鋅幼齡大鼠模型建立試驗(yàn)和缺鋅大鼠后天干預(yù)試驗(yàn)。

1.4.1 先天性缺鋅幼齡大鼠模型建立試驗(yàn)

選取同期懷孕雌性SD大鼠72只，分為模型組和對(duì)照組2個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只。從懷孕10 d開始試驗(yàn)，模型組大鼠孕期飼喂缺鋅飼糧，對(duì)照組大鼠孕期飼喂正常飼糧，持續(xù)到哺乳期結(jié)束。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)微量元素(不含鋅)為每千克飼糧提供 The trace elements (without zinc) provided the following per kg of the diet：MgO 272.727 3 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 25 g，K2SO4612.881 7 g，MnSO4·H2O 16.95 g，KI 0.07g，NaSeO30.022 2 g，CuSO4·5H2O 2 g，CaCO370.36 g。2)多維素為每千克飼糧提供 The multivitamin provided the following per kg of the diet：VA 14 000 IU，VD31 500 IU，VE 120 IU，VK 5 mg，VB112 mg，VB212 mg，煙酸 nicotinic acid 60 mg，VB612 mg，生物素 biotin 0.2 mg，泛酸 pantothenate 24 mg，葉酸 folic acid 6 mg。3)鋅水平、代謝能為實(shí)測(cè)值，其他營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。Zinc and ME were measured values, while other nutrient levels were calculated values.

造模結(jié)束后，模型組和對(duì)照組各抽取12只幼鼠，禁食12 h，取血清和肝臟樣品，并檢測(cè)生長(zhǎng)指標(biāo)、肝臟鋅含量及血清生化指標(biāo)，驗(yàn)證模型是否建立成功。

1.4.2 缺鋅大鼠后天干預(yù)試驗(yàn)

建模成功后，首先選擇模型建立試驗(yàn)對(duì)照組中24日齡正常大鼠幼鼠18只，作為后天干預(yù)試驗(yàn)正常組(Ⅰ組)，飼喂正常飼糧；另外，選取模型建立試驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M中24日齡先天性缺鋅大鼠幼鼠90只，隨機(jī)分成5個(gè)試驗(yàn)組，開展后天干預(yù)試驗(yàn)，分為缺鋅組(Ⅱ組)、ZnSO4組(Ⅲ組)和低(Ⅳ組)、中(Ⅴ組)、高劑量枯草芽孢桿菌鋅組(Ⅵ組)，均飼喂缺鋅飼糧；每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只。采取灌胃方式補(bǔ)充鋅源，Ⅰ、Ⅱ組灌胃去離子水，Ⅲ組灌胃ZnSO4溶液，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組灌胃枯草芽孢桿菌鋅(需要用去離子水稀釋)，灌胃量為按大鼠每10 g體重灌胃0.2 mL/d。試驗(yàn)期5周。干預(yù)期大鼠分組飼喂情況如表2所示。

1.5 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間，大鼠自由攝食、飲水(去離子水)，室內(nèi)溫度(22±2) ℃，相對(duì)濕度(55±5)%，室內(nèi)通風(fēng)良好。每天觀察大鼠的精神狀態(tài)，活動(dòng)情況，記錄攝食量和飲水量，并且每周稱量1次體重。

1.6 動(dòng)物屠宰及取樣

飼養(yǎng)5周后，對(duì)大鼠禁食12 h后，稱量體重、體長(zhǎng)，并用乙醚麻醉，采用眼球取血，3 000 r/min離心15 min，取血清-80 ℃保存。處死大鼠后，迅速測(cè)量體長(zhǎng)并分離心臟、肝臟、脾臟、腎臟等器官，置于冷生理鹽水中洗凈后用濾紙吸干其表面液體進(jìn)行稱重。

1.7 測(cè)試指標(biāo)及方法

1.7.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

每周最后1天08:00以重復(fù)為單位進(jìn)行空腹稱重，稱重前10 h停料不停水。試驗(yàn)結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算大鼠體重、平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)。

待大鼠解剖后，取其心臟、肝臟、脾臟、腎臟等器官，用生理鹽水清洗后，測(cè)定濕重，并計(jì)算器官指數(shù)：

器官指數(shù)(%)=100×臟器濕重(g)/體重(g)。

1.7.2 養(yǎng)分利用率測(cè)定

待測(cè)飼料粉碎過40目篩，混勻，低溫干燥保存。糞類在65～75 ℃烘箱中烘干，自然狀態(tài)下回潮24 h，制成風(fēng)干糞樣，然后用小型萬能粉碎機(jī)將糞樣粉碎。

氮和粗蛋白質(zhì)(CP)含量采用凱氏定氮分析儀進(jìn)行測(cè)定，粗脂肪(EE)含量采用乙醚浸提法進(jìn)行測(cè)定，粗纖維(CF)、中性洗滌纖維(NDF)、酸性洗滌纖維(ADF)含量采用酸堿洗滌法進(jìn)行測(cè)定，鋅、鈣含量采用等離子體發(fā)射光譜儀(ICP)進(jìn)行測(cè)定。

表2 干預(yù)期大鼠分組飼喂情況

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率計(jì)算公式：

氮利用率(%)=[(飼料中氮含量-排泄物中氮含量)/飼料中氮含量]×100；CP利用率(%)=[(飼料中CP含量-排泄物中CP含量+內(nèi)源CP含量)/飼料中CP含量]×100；EE利用率(%)=[(飼料中EE含量-排泄物中EE含量)/飼料中EE含量]×100；CF利用率(%)=[(飼料中CF含量-排泄物中CF含量)/飼料中CF含量]×100；NDF利用率(%)=[(飼料中NDF含量-排泄物中NDF含量)/飼料中NDF含量]×100；ADF利用率(%)=[(飼料中ADF含量-排泄物中ADF含量)/飼料中ADF含量]×100；鋅利用率(%)=[(飼料中鋅含量-排泄物中鋅含量)/飼料中鋅含量]×100；鈣利用率(%)=[(飼料中鈣含量-排泄物中鈣含量)/飼料中鈣含量]×100。

1.7.3 器官中鋅、鐵、銅含量測(cè)定

將器官組織干燥至恒重，用濕法消化法消化，過濾定容。具體方法如下：準(zhǔn)確稱取0.5 g器官組織樣品于三角燒瓶中，用少量超純水潤(rùn)濕后加10 mL硝酸和2 mL高氯酸，混勻，蓋上表面皿放置過夜，置于可調(diào)電爐上低溫消煮至近干，將溶液無損失地轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，混勻待測(cè)，并做空白矯正。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0軟件中單因素方差分析(one-way ANOVA，LSD)和t檢驗(yàn)2種方法分析數(shù)據(jù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值表示，誤差以標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。P<0.05和P<0.01分別為差異顯著和極顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 幼齡大鼠缺鋅模型的建立

由表3可知，經(jīng)過缺鋅飼糧干預(yù)后，模型組的體重、體長(zhǎng)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其肝臟鋅含量和血清MT含量及AKP、Cu-Zn SOD活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)果表明，幼齡大鼠缺鋅模型建立成功。

2.2 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.2.1 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠生長(zhǎng)性能的影響

由表4可知，與Ⅰ組(正常組)比較，Ⅱ組(缺鋅組)大鼠體重極顯著降低(P<0.01)，ADFI顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)/G、ADG差異不顯著(P>0.05)。與Ⅱ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組(低、中、高劑量枯草芽孢桿菌鋅組)大鼠F/G差異均不顯著(P>0.05)；Ⅳ組大鼠體重、ADFI顯著增加(P<0.05)，ADG差異不顯著(P>0.05)；Ⅴ、Ⅵ組大鼠體重、ADFI極顯著增加(P<0.01)，ADG顯著增加(P<0.05)。與Ⅲ組(ZnSO4組)比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠F/G差異均不顯著(P>0.05)；Ⅳ組大鼠體重、ADFI顯著降低(P<0.05)，ADG差異不顯著(P>0.05)；Ⅴ、Ⅵ組大鼠體重、ADG顯著增加(P<0.05)；Ⅴ組大鼠ADFI顯著增加(P<0.05)，Ⅵ組ADFI差異不顯著(P>0.05)。

表3 低鋅飼糧對(duì)幼齡大鼠生長(zhǎng)及血液指標(biāo)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同小寫字母或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，相鄰小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相間小寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。In the same row, values with the same small or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with adjacent small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with alternate small letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.

以上結(jié)果表明，大鼠先天性缺鋅能夠顯著降低采食量，使生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，體重降低；枯草芽孢桿菌鋅能夠促進(jìn)缺鋅大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育，并且中、高劑量枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠生長(zhǎng)發(fā)育促進(jìn)效果優(yōu)于ZnSO4。

表4 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠生長(zhǎng)性能的影響

2.2.2 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官指數(shù)的影響

由表5可知，與Ⅰ組比較，Ⅱ組大鼠的心臟、脾臟、腎臟和肺臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)，肝臟指數(shù)顯著降低(P<0.05)。與Ⅱ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠的脾臟、腎臟、肺臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)，肝臟指數(shù)顯著升高(P<0.05)；Ⅵ組大鼠的心臟指數(shù)顯著增加(P<0.05)，Ⅴ組極顯著增加(P<0.01)，Ⅳ組無顯著差異(P>0.05)。與Ⅲ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠的肝臟、脾臟、肺臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)；Ⅵ組大鼠的心臟指數(shù)顯著增加(P<0.05)，腎臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)；Ⅴ組大鼠的心臟指數(shù)極顯著增加(P<0.01)，腎臟指數(shù)顯著增加(P<0.05)；Ⅳ組大鼠的心臟指數(shù)無顯著差異(P>0.05)，腎臟指數(shù)顯著增加(P<0.05)。

以上結(jié)果表明，大鼠先天性缺鋅會(huì)顯著影響肝臟的發(fā)育；枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠的脾臟、腎臟、肺臟發(fā)育影響不顯著，能顯著促進(jìn)肝臟發(fā)育，并且中、高劑量枯草芽孢桿菌鋅能顯著促進(jìn)心臟的發(fā)育；中、高劑量枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠心臟修復(fù)效果優(yōu)于ZnSO4，低、中劑量枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠腎臟修復(fù)效果優(yōu)于ZnSO4。

表5 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官指數(shù)的影響

2.3 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠養(yǎng)分利用率的影響

由表6可知，與Ⅰ組比較，Ⅱ組大鼠的CP、EE、CF、NDF、ADF、鈣利用率均極顯著降低(P<0.01)，鋅利用率顯著降低(P<0.05)。與Ⅱ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠的EE、鋅利用率極顯著增加(P<0.01)；Ⅴ、Ⅵ組大鼠的CF、NDF、鈣利用率極顯著增加(P<0.01)，Ⅳ組大鼠的CF、NDF、鈣利用率顯著增加(P<0.05)；Ⅳ組大鼠的CP、ADF利用率差異不顯著(P>0.05)，Ⅴ組大鼠的CP、ADF利用率極顯著增加(P<0.01)，Ⅵ組大鼠的CP、ADF利用率顯著增加(P<0.05)。與Ⅲ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠的CP利用率差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ組大鼠的EE利用率顯著升高(P<0.05)，NDF、鈣利用率顯著降低(P<0.05)，CF、ADF、鋅利用率差異不顯著(P>0.05)；Ⅴ組大鼠的EE、CF、NDF、ADF、鋅、鈣利用率均極顯著增加(P<0.01)；Ⅵ組大鼠的EE、CF利用率極顯著增加(P<0.01)，NDF、ADF、鋅利用率顯著增加(P<0.05)，鈣利用率無顯著差異(P>0.05)。

以上結(jié)果表明，先天性缺鋅大鼠對(duì)養(yǎng)分的利用率受到嚴(yán)重影響。低劑量枯草芽孢桿菌鋅能顯著增加缺鋅大鼠的EE、CF、NDF、鋅、鈣利用率，中、高劑量枯草芽孢桿菌鋅能顯著提高缺鋅大鼠的EE、CP、ADF、CF、NDF、鋅、鈣利用率。并且用低劑量枯草芽孢桿菌鋅飼喂缺鋅大鼠時(shí)，EE、NDF、鈣利用率高于ZnSO4組；用中、高劑量枯草芽孢桿菌鋅飼喂缺鋅大鼠時(shí)，EE、CF、NDF、ADF、鋅、鈣利用率高于ZnSO4組。

表6 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠養(yǎng)分利用率的影響

2.4 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠氮利用率的影響

由表7可知，與Ⅰ組比較，Ⅱ組大鼠的食入氮、氮利用率均極顯著降低(P<0.01)，糞便氮顯著升高(P<0.05)，沉積氮顯著降低(P<0.05)。與Ⅱ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠的糞便氮差異均不顯著(P>0.05)；Ⅳ組大鼠的沉積氮、氮利用率差異不顯著(P>0.05)，食入氮顯著增加(P<0.05)；Ⅴ組大鼠的食入氮、沉積氮、氮利用率極顯著增加(P<0.01)；Ⅵ組大鼠的食入氮極顯著升高(P<0.01)，沉積氮、氮利用率顯著升高(P<0.05)。與Ⅲ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠的糞便氮、氮利用率差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ大鼠的食入氮、沉積氮顯著降低(P<0.05)，Ⅴ組大鼠的食入氮、沉積氮顯著升高(P<0.05)；Ⅵ組大鼠的食入氮、沉積氮差異不顯著(P>0.05)。

以上結(jié)果表明，先天性缺鋅大鼠氮的利用率低，糞氮排泄量升高；枯草芽孢桿菌鋅能夠促進(jìn)缺鋅大鼠對(duì)氮的攝入，降低氮排泄，增加氮沉積，從而提高氮利用率；低、中劑量枯草芽孢桿菌鋅能夠提高先天性缺鋅大鼠食入氮、沉積氮、氮利用率，且作用效果優(yōu)于ZnSO4。

表7 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠氮利用率的影響

2.5 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官中微量元素含量的影響

2.5.1 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官中鋅含量的影響

由表8可知，與Ⅰ組比較，Ⅱ組大鼠心臟和腎臟中鋅含量顯著降低(P<0.05)，肝臟中鋅含量極顯著降低(P<0.01)，腦中鋅含量差異不顯著(P>0.05)。與Ⅱ組比較，Ⅳ組大鼠心臟、肝臟、腦、腎臟中鋅含量差異不顯著(P>0.05)，Ⅴ組大鼠心臟、腦、腎臟中鋅含量顯著提高(P<0.05)，肝臟中鋅含量極顯著增加(P<0.01)，Ⅵ組大鼠心臟、肝臟、腎臟中鋅含量顯著增加(P<0.05)，腦中鋅含量差異不顯著(P>0.05)。與Ⅲ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠腦中鋅含量差異不顯著(P>0.05)，Ⅴ、Ⅵ組大鼠心臟、腎臟中鋅含量差異不顯著(P>0.05)，Ⅳ組大鼠心臟、腎臟中鋅含量顯著降低(P<0.05)；Ⅳ組大鼠肝臟中鋅含量極顯著降低(P<0.01)，Ⅴ組大鼠肝臟中鋅含量顯著升高(P<0.05)，Ⅵ組大鼠肝臟中鋅含量顯著降低(P<0.05)。

以上結(jié)果表明，大鼠先天性缺鋅會(huì)影響肝臟、心臟、腎臟中鋅的沉積；中劑量枯草芽孢桿菌鋅能夠快速提高缺鋅大鼠心臟、腦、腎臟、肝臟中鋅含量，并且其對(duì)缺鋅大鼠補(bǔ)鋅效果與ZnSO4差異不顯著，但降低了鋅添加量。

表8 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官中鋅含量的影響

2.5.2 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠器官中銅含量的影響

由表9可知，與Ⅰ組比較，Ⅱ組大鼠心臟、腦、腎臟中銅含量顯著降低(P<0.05)，但肝臟中銅含量極顯著增加(P<0.01)。與Ⅱ組比較，Ⅳ組大鼠心臟中銅含量顯著升高(P<0.05)，肝臟中銅含量顯著降低(P<0.05)，腦和腎臟中銅含量差異不顯著(P>0.05)；Ⅴ組大鼠心臟中銅含量極顯著升高(P<0.01)，肝臟中銅含量極顯著降低(P<0.01)，腦和腎臟中銅含量顯著升高(P<0.05)；Ⅵ組大鼠心臟中銅含量顯著增加(P<0.05)，肝臟中銅含量極顯著降低(P<0.01)，腦和腎臟中銅含量差異不顯著(P>0.05)。與Ⅲ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠腎臟中銅含量差異不顯著(P>0.05)，Ⅳ、Ⅵ組大鼠心臟中銅含量差異不顯著(P>0.05)，腦中銅含量顯著降低(P<0.05)；Ⅴ組大鼠心臟中銅含量顯著增加(P<0.05)，腦中銅含量差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ組大鼠肝臟中銅含量顯著增加(P<0.05)，Ⅴ、Ⅵ組大鼠肝臟中銅含量差異不顯著(P>0.05)。

以上結(jié)果表明，大鼠先天性缺鋅導(dǎo)致心臟、腦、腎臟、肝臟中銅元素沉積量減少；低劑量枯草芽孢桿菌鋅能夠促進(jìn)先天性缺鋅大鼠心臟中銅的沉積，降低肝臟中銅的沉積；中劑量枯草芽孢桿菌鋅能夠促進(jìn)先天性缺鋅大鼠腦和腎臟中銅的沉積；枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠心臟中銅含量的修復(fù)效果優(yōu)于ZnSO4。

表9 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官中銅含量的影響

2.5.3 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠器官中鐵含量的影響

由表10可知，與Ⅰ組比較，Ⅱ組大鼠心臟中鐵含量顯著降低(P<0.05)，肝臟、腎臟中鐵含量極顯著降低(P<0.01)，腦中鐵含量差異不顯著(P>0.05)。與Ⅱ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠心臟、肝臟、腎臟中鐵含量顯著或極顯著增加(P<0.05或P<0.01)，腦中鐵含量差異不顯著(P>0.05)。與Ⅲ組比較，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組大鼠腦中鐵含量差異不顯著(P>0.05)，肝臟中鐵含量顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01)；Ⅴ、Ⅵ組大鼠腎臟中鐵含量顯著增加(P<0.05)，Ⅳ組大鼠腎臟中鐵含量顯著降低(P<0.05)；Ⅳ、Ⅵ組大鼠心臟中鐵含量差異不顯著(P>0.05)，Ⅴ組大鼠心臟中鐵含量顯著增加(P<0.05)。

以上結(jié)果表明，大鼠先天性缺鋅影響心臟、肝臟、腎臟中鐵的沉積；枯草芽孢桿菌鋅能夠通增加先天性缺鋅大鼠心臟、肝臟、腎臟中鐵吸收快速補(bǔ)充相應(yīng)器官中鐵的含量，并且枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠肝臟、腎臟中鐵含量的修復(fù)效果優(yōu)于ZnSO4。

3 討 論

3.1 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響

Doboszewska等[12]和Shah等[13]研究發(fā)現(xiàn)，大鼠孕期缺鋅，會(huì)降低自身免疫力，影響采食量，也會(huì)影響胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育，降低代謝。Doboszewska等[12]和Fukada等[14]研究表明，缺鋅可引起生長(zhǎng)期大鼠體重、體長(zhǎng)、脛骨長(zhǎng)度生長(zhǎng)緩慢、攝食量減少，食物利用率降低。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠先天性缺鋅會(huì)顯著降低采食量，影響心臟、肝臟等器官發(fā)育，使生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，體重降低。張慶[15]研究表明，混合鋅能夠顯著提高仔豬胸腺、脾臟、胰臟指數(shù)。王代剛[8]研究鋅源對(duì)缺鋅大鼠生長(zhǎng)性能的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，酵母鋅可提高大鼠ADFI、ADG，降低F/G。在本試驗(yàn)條件下，枯草芽孢桿菌鋅組大鼠體重、ADG、ADFI以及心臟和肝臟指數(shù)均高于缺鋅組，并且中、高劑量枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠心臟修復(fù)效果優(yōu)于ZnSO4，低、中劑量枯草芽孢桿菌鋅對(duì)缺鋅大鼠腎臟修復(fù)效果也優(yōu)于ZnSO4。這表明枯草芽孢桿菌鋅在一定濃度下能夠促進(jìn)缺鋅大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育，并且對(duì)缺鋅大鼠生長(zhǎng)發(fā)育改善效果優(yōu)于ZnSO4。

表10 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官組織鐵含量的影響

3.2 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠養(yǎng)分利用率的影響

Murugesan等[16]和馮定遠(yuǎn)等[17]研究表明，動(dòng)物良好的生長(zhǎng)性能取決于對(duì)飼糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的充分消化、吸收與利用。劉英麗[18]研究表明，酵母鋅的生物利用率顯著高于硫酸鋅。郭建來等[19]研究表明，與無機(jī)鋅組相比，有機(jī)鋅組顯著提高了仔豬干物質(zhì)、鈣和磷利用率，極顯著提高了粗灰分利用率。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌鋅具有快速補(bǔ)鋅，增加養(yǎng)分利用率的作用，這與枯草芽孢桿菌鋅能夠改善缺鋅大鼠生長(zhǎng)性能結(jié)果一致。此外，研究也表明，枯草芽孢桿菌鋅組大鼠氮等養(yǎng)分利用率增高，排泄率減少，降低了對(duì)環(huán)境的污染，進(jìn)一步說明枯草芽孢桿菌鋅作為生態(tài)型飼料添加劑具有重要的研究意義。

3.3 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠器官中微量元素含量的影響

鋅缺乏不僅導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)鋅水平降低，還會(huì)影響對(duì)其他微量元素的轉(zhuǎn)運(yùn)和生物利用率[20]。袁秀琴等[21]研究發(fā)現(xiàn)，缺鋅使大鼠血清、肝臟、脾臟、腎臟等中鋅和鐵的含量顯著降低，腎臟、脾臟中銅含量降低。趙長(zhǎng)峰等[22]、Zhao等[22]研究表明，缺鋅組孕鼠各組織中鋅水平和其他微量元素含量均顯著低于補(bǔ)鋅組和對(duì)照組。孔林[24]研究表明，在鋅水平足夠的條件下，酵母鋅和硫酸鋅對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能和組織鋅含量影響差異不顯著。本試驗(yàn)用枯草芽孢桿菌鋅干預(yù)先天性缺鋅大鼠，發(fā)現(xiàn)其對(duì)先天性缺鋅大鼠心臟、肝臟、腦和腎臟等器官中微量元素含量具有調(diào)節(jié)作用；并且中劑量枯草芽孢桿菌鋅能夠促進(jìn)器官中微量元素的吸收，這可能與枯草芽孢桿菌鋅具備雙重功能有關(guān)，該菌不僅具有補(bǔ)鋅的功能，而且還能夠促進(jìn)養(yǎng)分消化吸收，提高大鼠采食量，使銅、鋅和鐵等微量元素利用率提高，吸收增多，組織器官中沉積量也增多。本試驗(yàn)結(jié)果還表明，高劑量枯草芽孢桿菌鋅的作用效果低于中劑量枯草芽孢桿菌鋅，說明機(jī)體鋅需要量有一定閾值范圍，過高鋅水平不利于養(yǎng)分消化吸收利用。

4 結(jié) 論

① 大鼠飼糧中添加枯草芽孢桿菌鋅能夠顯著增加先天性缺鋅大鼠的采食量，提高肝臟指數(shù)、心臟指數(shù)和養(yǎng)分利用率，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，調(diào)節(jié)微量元素的分布。

② 枯草芽孢桿菌鋅對(duì)先天性缺鋅大鼠后天干預(yù)修復(fù)效果優(yōu)于ZnSO4。

③ 中劑量枯草芽孢桿菌鋅組比ZnSO4組修復(fù)效果更好，且降低了飼糧中鋅添加量。