徐 力
(遼寧省盤錦市大洼區(qū)人民醫(yī)院 口腔科,遼寧 盤錦 124200)
口腔念珠菌感染為條件致病性真菌,患者可能是伴發(fā)臨床體征的口腔念珠菌病,也可能是不伴有臨床癥狀的健康帶菌者[1]。近些年因為開展了越來越多的器官移植治療,同時廣譜抗生素及其他各類藥物應(yīng)用的不斷增加,使得臨床出現(xiàn)更多口腔念珠菌感染病例[2]。本研究具體分析口腔念珠菌感染患者口內(nèi)菌株的分布情況,同時分析其藥敏結(jié)果,以期為臨床用藥提供相應(yīng)指導(dǎo)。
1.1 一般資料:回顧性分析2017年1月至2018年1月本院口腔念珠菌感染患者70例,男21例,女49例,平均年齡19~76(59.28±5.36)歲,將這70例患者視作觀察組。另外選取50例健康者作為對照組,包括男17例,女33例,平均年齡20~76(60.07±5.53)歲。對照組患者均除外伴有口腔黏膜病、齲病、牙周病,患者均沒有抗生素、抗真菌藥物、免疫抑制劑、激素長時間持續(xù)使用史。兩組各項基本資料比較無顯著性差異(P>0.05)。
1.2 方法:于病損位置利用無菌棉簽沾濕氯化鈉溶液后進(jìn)行標(biāo)本采集,通過顯微鏡對菌絲、孢子進(jìn)行觀察,在SDA上種好標(biāo)本,進(jìn)行持續(xù)2 d時間的培養(yǎng)。然后在念珠菌顯色培養(yǎng)基上完成菌種的轉(zhuǎn)種,持續(xù)給予2 d時間的培養(yǎng),分析培養(yǎng)結(jié)果。將念珠菌菌種通過SDA設(shè)置37 ℃的溫度進(jìn)行持續(xù)24 h的培養(yǎng),進(jìn)行2次活化,保證其為指數(shù)生長期的后期。利用氯化鈉溶液5 mL溶合菌落(直徑超過1 mm)進(jìn)行混懸液的制作,借助血細(xì)胞計數(shù)板調(diào)節(jié)濃度為(1~5)×106CFU/mL。通過RPMI 1640 液體培養(yǎng)基完成稀釋處理(1000倍)。體外藥敏試驗通過微量液體稀釋法進(jìn)行,通過二甲基亞砜溶液將制霉菌素、伊曲康唑、特比萘芬溶解,制為1600、1600、12800 μg/mL溶度的貯存液,通過雙蒸水將氟康唑溶解,制為貯存液(濃度1280 μg/mL),置于-20 ℃冰箱中保存等待使用。室溫環(huán)境下溶化貯存液,借助RPMI1640液體培養(yǎng)基完成稀釋。進(jìn)行藥敏試驗時,將氟康唑、特比萘芬起始質(zhì)量濃度保持為64 μg/mL,然后完成倍比稀釋,使終質(zhì)量濃度保持為0.5~64 μg/mL。進(jìn)行單用藥敏試驗時控制伊曲康唑、制霉菌素終質(zhì)量濃度為0.03~16 μg/mL,氟康唑、特比萘芬在0.5~256 μg/mL。
最后進(jìn)行藥敏反應(yīng)板的制備,并將其置入37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中實施持續(xù)2 d時間的濕盒孵,確定ATCC 6258以及90028 標(biāo)準(zhǔn)株作為本研究的質(zhì)控菌株,進(jìn)行持續(xù)48 h的培養(yǎng),對照陰性空白對照孔、生長陽性對照孔。
1.3 試驗評價。①視覺判定法:念珠菌菌種判定依據(jù)菌鑒定培養(yǎng)基上菌落的顏色進(jìn)行,如果為藍(lán)灰色或者鐵藍(lán)色,則為熱帶念珠菌菌落;如果為紫色,則為光滑念珠菌菌落;白色念珠菌菌落顏色是綠色或者翠綠色;其他念珠菌菌落是白色。②最低抑菌濃度(MIC):特比萘芬的MIC是培養(yǎng)基清亮相應(yīng)的最低藥物濃度,制霉菌素的MIC是生長完全抑制相應(yīng)的最低藥物濃度;伊曲康唑、氟康唑的MIC是生長抑制80%或以上(對照生長對照孔)相應(yīng)的最低藥物濃度。MIC有效標(biāo)準(zhǔn)為M27-A2范圍內(nèi)。有效率計算方法是劑量依賴菌株數(shù)所占敏感菌株數(shù)的比重。
1.4 統(tǒng)計學(xué)方法:借助SPSS16.0軟件分析研究結(jié)果,[n(%)]表示計數(shù)資料,χ2檢驗,P<0.05則存在統(tǒng)計學(xué)差異。
2.1 口內(nèi)菌株檢出情況:觀察組和對照組120份標(biāo)本中有70株被檢出假絲酵母菌,檢出率58.33%,觀察組70份中假絲酵母菌有52份,占74.29%,對照組檢出18份,占25.71%,檢出率差異明顯,P<0.05。兩組詳細(xì)菌株檢出情況見表1,白色念珠菌的檢出率最高,P<0.05。
表1 兩組患者口內(nèi)菌株具體類型檢出情況比較[n(%)]
2.2 藥敏結(jié)果:制霉菌素的敏感度有效性最高,特比萘芬最低,P<0.05,伊曲康唑、氟康唑的敏感度有效率差異不明顯,P>0.05,見表2。
表2 4種藥物對口腔念珠菌的作用分析[n(%)]
2.3 藥物MIC值:經(jīng)測定,特比萘芬聯(lián)合氟康哇使用的MIC值在0.125~8.000,氟康哇聯(lián)合特比萘芬在0.125~16.000,特比萘芬單用在1~128,氟康哇單用在0.15~64.00。
白色念珠菌是出現(xiàn)率最高的一類真菌感染致病菌,本研究觀察組白色念珠菌占比61.54%,與結(jié)論相符。但是近些年隨著研究不斷深入,逐步發(fā)現(xiàn)了非白色念珠菌在治療口腔念珠菌病中的良好效果。念珠菌屬于機(jī)體共生菌的一種,為正常菌群,多出現(xiàn)在胃腸道以及口腔,如果機(jī)體菌群出現(xiàn)失調(diào)表現(xiàn),免疫功能降低會進(jìn)展為條件致病菌,形成念珠菌病,甚至可能加重原發(fā)疾病,導(dǎo)致死亡[3]。
制霉菌素是廣泛應(yīng)用的一類抗真菌藥,能夠部分結(jié)合菌膜上的固醇,將其通透性改變,對菌體起到破壞作用,從而實現(xiàn)有效治療[4]。本研究藥敏結(jié)果也顯示制霉菌素的敏感度有效性為100%,和結(jié)論具有一致性。特比奈芬為丙胺類中的一種抗真菌藥物,研究顯示淺部白色念珠菌感染經(jīng)特比奈芬治療的有效率僅為56%~70%,本研究藥敏實驗結(jié)果的有效性為57.14%,與結(jié)論一致。研究發(fā)現(xiàn)氟康唑與伊曲康唑間有交叉不敏感,或者存在耐藥情況,主要是由于均為三唑類藥物,在作用機(jī)制上存在交叉耐藥表現(xiàn)[5]。同時氟康唑、特比萘芬聯(lián)合應(yīng)用后MIC值均明顯低于單用結(jié)果,單獨應(yīng)用時菌株從不敏感轉(zhuǎn)變成敏感,表明特比萘芬、氟康唑聯(lián)合應(yīng)用能夠使白色念珠菌不敏感性菌株的生成得到延緩,使治療獲得更佳的效果[6]。
綜上所述,白色念珠菌是主要口腔念珠菌種,針對耐藥菌株的治療,可以選擇特比萘芬、氟康唑聯(lián)合應(yīng)用,能夠獲得更高的療效。