李榮海 姚興偉 邱聰穎 楊琦 盧欣 張澤 郭姮 王斌

[摘要] 目的 評估血清標(biāo)本冷藏保存7 d內(nèi)每24小時各個生化項目的穩(wěn)定性及重復(fù)性，為臨床醫(yī)師提供良好的建議與指導(dǎo)。 方法 收集2017年1～12月來自西苑醫(yī)院臨床血清標(biāo)本30例，采用Roche Cobas 8000全自動分析儀檢測，并將每次檢測后的血清樣本以半封閉式保存于4℃冰箱中，每24小時對葡萄糖（GLU）、肌酐（Cr）、C反應(yīng)蛋白（CRP）等44項生化指標(biāo)進行檢測。 結(jié)果 K+、Cl-、Na+、補體C3、肌酸激酶（CK-MB）和乳酸脫氫酶（LDH）在24 h內(nèi)的檢測結(jié)果與其他時間段的檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；K+、Cl-、Na+、補體C3濃度隨時間的變化明顯升高；而CK-MB、LDH濃度隨時間的變化明顯降低。其余天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、GLU等38項生化項目差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P ﹥ 0.05）。 結(jié)論 醫(yī)務(wù)工作者應(yīng)充分理解血清標(biāo)本存放期間各個生化項目的變化，尤其是K+、Cl-、Na+、補體C3、CK-MB和LDH濃度的變化。

[關(guān)鍵詞] 血清標(biāo)本；生化項目；穩(wěn)定性；冷藏時間

[中圖分類號] R446 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）07（a）-0143-04

Effect of cold storage time on the stability of biochemical project

LI Ronghai1# YAO Xingwei2# QIU Congying3 YANG Qi2 LU Xin2 ZHANG Ze2 GUO Heng2 WANG Bin2

1.Department of Clinical Laboratory， Xiyuan Hospital， CACMS， Beijing 100091， China； 2.Department of Clinical Laboratory， Dongzhimen Hospital， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100700， China； 3.Department of Clinical Laboratory， Beijing Bo′ai Hospital， China Rehabilitation Research Center， Beijing 100068， China

[Abstract] Objective To evaluate the stability and repeatability of every 24 hours biochemical project in the serum samples for 7 days， in order to provide good advice and guidance for clinicians. Methods From January to December in 2017， 30 cases of clinical serum samples from Xiyuan Hospital were collected， and Roche Cobas 8000 automatic analyzer was used for the detection. The samples were stored at 4℃ after being detected with 44 biochemical projects every day in the study， such as glucose （GLU）， creatinine （Cr） and C-reactive protein （CRP）. Results The detection results of K+， Cl-， Na+， C3， CK-MB， LDH in 24 h were significantly different from those of other time periods， and the differences were statistically significant （P < 0.05）. The concentration of K+， Cl-， Na- and complement C3 were significantly increased， while the levels of CK-MB and LDH were significantly decreased. However， the level of other 38 testing projects had not statistically significant （P > 0.05）. Conclusion It is important for medical workers to know the changes of some biochemical markers in serum samples during one week， especially the changing concentration of K+， Cl-， Na-， complement C3， CK-MB and LDH.

[Key words] Serum samples； Biochemical test； Stability； Cold storage time

根據(jù)《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準(zhǔn)則》[1]相關(guān)文件的規(guī)定，實驗室應(yīng)根據(jù)樣本的性狀、檢驗和任何適用的要求來制訂文件化程序及規(guī)定臨床樣本保留的時限，以便于當(dāng)出現(xiàn)與患者歷史數(shù)據(jù)有較大變化需要進行復(fù)查的結(jié)果。樣本保存時間和條件可能影響檢測項目的穩(wěn)定性和重復(fù)性。杜忠明等[2]通過研究發(fā)現(xiàn)，即使樣品保存在冰箱內(nèi)，雖利于某些成分的穩(wěn)定，但由于致冷時的除濕作用，在這樣的環(huán)境中存放置樣品，蒸發(fā)仍相當(dāng)嚴重。故本研究將探討血清標(biāo)本放置不同的時間對生化項目穩(wěn)定性的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器

北京白洋離心機廠生產(chǎn)的白洋離心機對標(biāo)本進行離心，3500 r/min，離心10 min；采用Roche Cobas 8000全自動生化分析儀進行分析。

1.2 標(biāo)本及其來源

收集2017年1～12月來自西苑醫(yī)院臨床血清標(biāo)本30例，各標(biāo)本無黃疸、溶血、乳糜。將1 d檢測后的標(biāo)本采用半封閉式方式保存在4℃冰箱中，每24小時檢測1次，并詳細記錄檢測結(jié)果，然后分別與1 d檢測結(jié)果進行對比分析，觀察各生化項目的穩(wěn)定性。冰箱的溫度由北京國尚信科技有限公司的冷鏈系統(tǒng)進行監(jiān)測。

1.3 試劑、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品

γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品由中生北控生物科技股份有限公司提供；載脂蛋白B的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品由德國Disvs公司提供；其它生化項目的檢測試劑均采用德國羅氏公司原裝試劑和德國羅氏系列定標(biāo)液。質(zhì)控品由德國廠家羅氏公司提供兩個水平質(zhì)控品。

1.4 檢測方法

K+、Na+、Cl-、Mg2+等離子采用離子選擇電極法（ISE法）；補體C3、C4、免疫球蛋白A、免疫球蛋白E等采用免疫比濁法；乳酸脫氫酶（LDH）、γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）等酶采用連續(xù)監(jiān)測法；總膽紅素（TBIL），直接膽紅素（DTBIL）采用重氮法；葡萄糖（GLU）采用氧化酶法等。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，重復(fù)測量數(shù)據(jù)采用重復(fù)測量方差分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)過連續(xù)7 d對血清標(biāo)本44項生化項目的檢測，其中K+、Cl-、Na+、補體C3、CK-MB、LDH差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05），其余38項差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。

K+、Cl-、Na+、補體C3濃度隨時間的延長而逐漸升高。與1 d相比，K+在6、7 d升高（P < 0.05或P < 0.01）；Na+除了2 d檢測結(jié)果與1d比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），3～7 d檢測結(jié)果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）；Cl-在2～7 d檢測結(jié)果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）；補體C3在6、7 d檢測結(jié)果均高于1 d（P < 0.05或P < 0.01）。

CK-MB、LDH濃度隨時間的延長而逐漸降低。CK-MB在4～7 d檢測結(jié)果結(jié)果均低于1 d（P < 0.05或P < 0.01），LDH在7 d檢測結(jié)果低于1 d（P < 0.05）。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，電解質(zhì)K+、Na+、Cl-以及補體C3隨著樣本存放時間延長而逐漸升高。血清中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-水平是監(jiān)測機體中水、電解質(zhì)及酸堿平衡的重要生化指標(biāo)，在臨床檢驗中有重要的指導(dǎo)作用，臨床急救醫(yī)生需要通過檢驗科電解質(zhì)的快速檢驗報告對患者的病情進行診斷[3-6]。對于樣本中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-明顯升高的趨勢，秦海瑜等[7]認為有兩個重要原因：第一，分離膠并不能完全使血清和血細胞隔離開，導(dǎo)致血細胞內(nèi)高濃度離子釋放到血清中；第二，某些外部因素所致，在實際臨床工作中要盡可能降低外部因素對檢測結(jié)果的影響程度，尤其注意在室溫環(huán)境下放置一段時間的生化標(biāo)本。特別是敞口后血清中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-水平高于其實際水平，可能是血清水分的蒸發(fā)導(dǎo)致被檢測物質(zhì)在血清中的水平明顯增高的原因[8]。由于本實驗室將檢測后血清樣本采用不加原儲血管的橡膠蓋進行半封閉式的保存在4℃冰箱，造成血清水分部分蒸發(fā)，可能是導(dǎo)致血清中電解質(zhì)K+、Na+、Cl-濃度隨時間的延長而逐漸升高的原因之一。

補體C3是人體補體系統(tǒng)中含量最高的組分，也是補體激活經(jīng)典途徑以及旁路途徑的關(guān)鍵成分。本實驗通過監(jiān)測顯示補體C3的水平隨保存時間延長而上升，2 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.06±0.24）g/L，上升了2.11%；3 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.09±0.24）g/L，上升了4.74%，仍屬于臨床的可接受范圍，但4 d與1 d相比較，由（1.04±0.23）g/L上升至（1.14±0.26）g/L，上升超過10%。升高的原因可能是樣本存放時間過久導(dǎo)致血清中補體C5轉(zhuǎn)化酶的自行裂解，從而引起C3濃度明顯升高[9-11]。鑒于補體的不穩(wěn)定性，建議血清補體C3測定最好采用新鮮標(biāo)本，若無法及時檢測或考慮到成本因素，分離的血清可置于-20℃保存3 d。

實驗中CK-MB、LDH濃度隨時間的變化而逐漸降低。CK-MB主要存在于心肌細胞中，是診斷急性心肌梗死（AMI）的重要指標(biāo)之一，AMI時血清CK-MB可顯著升高，曾被認為是診斷AMI的金標(biāo)準(zhǔn)[12-15]。CK-MB活性的酶易于老化，主要表現(xiàn)為酶構(gòu)象的改變，引起CK-MB檢測降低或正常的原因可能是由于過了檢測的時間，以致于血清酶老化使酶的催化活性降低或喪失。

LDH是一種糖酵解酶，也是一種冷變性酶，存在于所有的組織細胞中，但分布于腎臟的含量較高，LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5是LDH五種形式的同工酶，其最適合的溫度應(yīng)該是室溫。本次實驗的標(biāo)本采用分離膠采血管收集并保存的溫度是4℃，檢測的結(jié)果與1 d相比，7 d檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。因此有學(xué)者建議對不同溫度及不同保存方式的血清進行相關(guān)項目的檢測，以便找到便捷合理的血清保存方式[16]。華永川等[17]探討了分離膠管、血清血球共用管、血清管不同時間段血清酶活性和穩(wěn)定性的變化，結(jié)果顯示分離膠不影響酶的穩(wěn)定性和活性，且LDH（血清血球管）于第5天開始升高，與本研究中的LDH變化趨勢相符。

楊永紅等[18]通過OLYMPUS AU54OO全自動生化儀對36個生化項目進行檢測，除GLU、CO2結(jié)合力、K+外其他測定的33項生化項目隨著時間的延長其濃度無明顯變化。然而上述的研究中只有K+的檢測趨勢與本研究相同，部分檢測項目（GLU、Na+、Cl-、LDH、CK-MB）的變化趨勢與本研究有所差異，可能的原因包括冷藏時采用的保存的措施有所不同，楊永紅等[18]采用的是用儲血盒直接加蓋冷藏其制備的血標(biāo)本，而本研究采用的是半封閉式方式保存，檢測儀器設(shè)備的不同、實驗設(shè)計等其他原因等，因此值得后續(xù)研究進一步比較分析。

張麗霞[19]認為影響分析物穩(wěn)定性和檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要參數(shù)包括實驗室的室溫以及血清或血漿的貯存溫度、時間。國內(nèi)很多學(xué)者建議對于C3、C4補體應(yīng)采用冰凍保存方式[20]，據(jù)實驗研究顯示LDH、CK、AST、ALT只要檢測后立即對標(biāo)本進行密封及避光也可在室溫下進行保存?？傊?，本研究實驗表明大多數(shù)血清的生化項目可以置于4℃冰箱中且其結(jié)果具有一定的穩(wěn)定性，而應(yīng)該特別關(guān)注K+、Cl-、Na+、補體C3以及CK-MB、LDH濃度的變化，并詳盡地分析其可能的影響因素。因此，實驗室應(yīng)根據(jù)自身的實際情況（儀器設(shè)備型號、試劑類別、血清標(biāo)本儲存方式等），總結(jié)歸納出血清樣本存留時間對檢測結(jié)果的具體影響，為本地區(qū)的臨床醫(yī)生提供更加真實可靠的數(shù)據(jù)來源，以便于進一步提高檢驗質(zhì)量，更好地服務(wù)于臨床。

[參考文獻]

[1] 中國合格評定國家認可委員會.醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準(zhǔn)則[Z].2012.

[2] 杜忠明，徐揚，付冠華，等.樣品自動防蒸發(fā)保存系統(tǒng)研究與應(yīng)用評價[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2004，19（5）：416-418.

[3] 鄧若塵.全自動生化儀和電解質(zhì)儀測定血清鉀和鈉的方法學(xué)比較[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（22）：2827-2829.

[4] 佟威威，佟廣輝，劉勇，等.血清鉀危急值的評價研究[J].臨床誤診誤治，2014，27（10）：71-74.

[5] 任碧瓊，鄒國英，徐飛.肝素鋰抗凝管在臨床化學(xué)分析中的合理應(yīng)用[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2011，8（2）：41-43.

[6] 王建瓊，牛華，鄭瑞，等.肝素抗凝血漿鉀與血清鉀測定對比分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2010，31（5）：500-501.

[7] 秦海瑜，陳宇輝.不同放置方式對血清鉀 鈉 氯檢測結(jié)果影響[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（1）：106-107.

[8] 陳巧紅，陳珊珊，莫永忠，等.血液標(biāo)本不同放置時間和方式對9項生化指標(biāo)檢測結(jié)果的影響[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2017，7（10）：236-238.

[9] 劉麗婭，徐偉珍，錢芳.標(biāo)本儲存時間對C3、C4檢測結(jié)果的影響[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2004，19（3）：202.

[10] 金勝鑫，溫懷凱.分離膠和標(biāo)本放置時間對C3、C4檢測結(jié)果的影響[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗，2006，26（4）：380.

[11] 唐萍，唐榮，趙靈通.血液標(biāo)本儲存時間對C3、C4補體及血糖檢測結(jié)果的影響[J].吉林醫(yī)學(xué)，2014（21）：4696-4697.

[12] 何昕.急性心肌梗死患者cTnI﹑MYO﹑CK-MB和血流變檢測的臨床意義及相關(guān)性研究[D].廣州：廣州醫(yī)學(xué)院，2011.

[13] 楊海，邱海山，粱宗夏.肌鈣蛋白T、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶診斷心肌損傷的靈敏度及特異性比較分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，30（1）：86.

[14] 譚志敏，李科，許東明，等.急性肺栓塞患者合并與不合并肺動脈高壓時肌鈣蛋白Ⅰ及氨基末端腦鈉肽前體水平的差異[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2017，16（12）：1184-1187.

[15] 羅軍，劉云兵.心肌肌鈣蛋白在心血管病診治中的應(yīng)用[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2005，26（1）：38-39.

[16] 程薇莉，丁茗敏，何嬙，等.標(biāo)本保存條件對血清酶活性的影響[J].實用醫(yī)藥雜志，2004，21（2）：133-134.

[17] 華永川，金斐，呂國才，等.分離膠對血清酶類活性和穩(wěn)定性的影響[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2004，16（11）：3-4.

[18] 楊永紅，安仕剛，王樹輝，等.分離膠儲血管保存其制備血清標(biāo)本生化指標(biāo)穩(wěn)定性的觀察[J].貴州醫(yī)藥，2006， 30（1）：67-69.

[19] 張麗霞.臨床化學(xué)檢驗血液標(biāo)本的采集和處理[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2000，23（4）：251-252.

[20] 崔志剛，孫鮮麗.標(biāo)本儲存時間對C3、C4檢測結(jié)果的影響[J].實用醫(yī)技雜志，2005，12（2b）：533-534.

（收稿日期：2018-04-04 本文編輯：李岳澤）