楊宇奇，韓小亞，周紅，龍偉，虞斌

（江蘇省常州市婦幼保健院，江蘇 常州 213003）

早產(chǎn)兒是導(dǎo)致新生兒發(fā)病和死亡的重要原因之一。真正了解該階段小兒的代謝特征和營養(yǎng)素需要的特殊性，是臨床實施正確營養(yǎng)管理過程中不可忽視的問題[1]。本研究采用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測早產(chǎn)兒游離肉堿和?；鈮A的代謝水平，分析其特點，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2015年4月-2016年12月該院出生的活產(chǎn)早產(chǎn)兒1 992例，男1 104例，女888例。按是否合并低出生體重將其分為兩大組：單純早產(chǎn)組（孕周＜37周且體重＞2 500 g）765例，早產(chǎn)合并低體重組（孕周＜37周且體重＜2 500 g）1 227例。選擇同期4 035例正?；町a(chǎn)新生兒作為正常對照組（孕周＞37周且體重＞2 500 g）。其中，男性2 088例（51.7%），女性1 947例（48.3%）。排除孕婦發(fā)生不良妊娠情況。見表1。

1.2 器材和試劑

采用Waters AcquityTMTQD串聯(lián)質(zhì)譜儀，Waters 2777C自動進(jìn)樣器，Waters 1525 μ HPLC泵，非衍生化多種氨基酸、肉堿及琥珀酰丙酮測定試劑盒（neo base non-derivatized MSMS Kit，美國Perkin Elmer公司）進(jìn)行篩查檢測。

表1 3組臨床資料比較

1.3 樣本采集

按照新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范（2010版）出生72 h后、充分哺乳6次后足跟采集4個血斑（濾紙片Schleicher & Schuell 903）。低出生體重者待2 500 g或出生后20 d采血。血片采集后懸空平置自然干燥成深褐色，塑料袋內(nèi)封口，在規(guī)定時間內(nèi)送至新生兒疾病篩查中心實驗室，置入4℃冰箱保存?zhèn)錂z。

1.4 實驗操作

按本實驗室串聯(lián)質(zhì)譜新生兒疾病篩查方法進(jìn)行實驗。首先從濾紙片上打下3.2 mm左右的血斑放入V底微孔板，每孔加入100 μl內(nèi)標(biāo)工作液，黏貼膜封板，孵育振蕩45 min，溫度45℃，轉(zhuǎn)速4 100～4 700 r/m，然后轉(zhuǎn)移75 μl至V型無包被潔凈微孔板，靜止2 h后上機(jī)檢測樣本肉堿水平[包括游離肉堿（C0）、乙酰基肉堿（C2）、丙?；鈮A（C3）、丙二酰肉堿/3-羥基-丁?；鈮A（C3DC/C4OH）、丁酰肉堿（C4）、肉堿（C4DC/CSOH）、異戊酰肉堿（C5）、異戊酰肉堿（C5∶1）、戊二酰肉堿/3-羥基-異戊酰肉堿（C5DC/C6OH）、甲基丙二酰肉堿/3-羥基-異戊酰肉堿（C5DC/C6OH）、已二酰肉堿（C6DC）、辛酰肉堿（C8）、辛烯酰肉堿（C8∶1）、癸酰肉堿（C10）、癸烯酰肉堿（C10∶1）、癸二烯酰肉堿（C10∶2）、十二碳酰肉堿（C12）、十二碳烯酰肉堿（C12∶1）、十四碳酰肉堿（C14）、十四碳烯酰肉堿（C14∶1）、十四碳二烯酰基肉堿（C14∶2）、3-羥基-十四碳酰肉堿（C14OH）、十六碳酰肉堿（C16）、十六碳烯酰肉堿（C16∶1）、3-羥基-十六碳酰肉堿（C16OH）、3-羥基-十六碳烯酰肉堿（C16∶1OH）、18碳酰肉堿（C18）、18碳烯酰肉堿（C18∶1）、18碳二烯酰肉堿（C18∶2）、3-羥基-十八碳酰肉堿（C18OH）及3-羥基-十八碳烯酰肉堿（C18∶1OH）]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用易侕Empowerstats軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，偏態(tài)分布以中位數(shù)（Median）、第25百分位數(shù)和第75百分位數(shù)（P25，P75）表示。根據(jù)資料分布類型，采用單因素方差分析和Kruskal Wallis秩和檢驗比較多組間差異。多組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義后，采用LSD-t檢驗和Mann-WhitneyU檢驗比較兩組變量的差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般結(jié)果

1 992例活產(chǎn)早產(chǎn)兒中61.6%合并有低出生體重，38.4%出生時體重＞2 500 g。與正常對照組比較（2 843.97g vs 3 413.39 g），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。所有早產(chǎn)病例中，104例（5.2%）分娩孕周＜30周、30～＜34周563例（28.3%）、34～ ＜37周 1 325例（66.5%）。

2.2 早產(chǎn)兒酰基肉堿代謝水平特點

采用單因素方差分析和Kruskal Wallis秩和檢驗比較多組間差異，除C10與C10∶2以外，其余的29種肉堿在早產(chǎn)組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。早產(chǎn)組與正常組比較，其中C0、C3、C4、C5、C5DC+C6OH、C6、C8及 C18∶ 2指標(biāo) 升 高；C2、C3DC+C4OH、C4DC+C5OH、C6DC、 C8∶ 1、C10∶ 1、C12、C12：1、C14，C14∶ 1、C14∶ 2、C14OH、C16、C16∶ 1、C16∶ 1OH、C18、C18∶1、C18∶1OH及C18∶OH指標(biāo)降低（P＜0.05）。當(dāng)早產(chǎn)合并低體重時，大多上述肉堿與正常新生兒的差異將進(jìn)一步擴(kuò)大。見表2。

表2 早產(chǎn)兒全血肉堿代謝水平 （μmol/L）

表3 胎齡分組 （μmol/L）

2.3 早產(chǎn)兒?；鈮A與孕周的關(guān)系

將765例單純早產(chǎn)兒按出生胎齡進(jìn)行分組分析發(fā)現(xiàn)，血片中檢測到的C0、C3、C5及C18∶2的值隨胎齡的增長而遞減，而C10、C10∶1、C14∶1隨胎齡的增加也遞減。見表3。

3 討論

3.1 游離肉堿

肉堿的功能在20世紀(jì)50年代已經(jīng)被闡明[2]，人體內(nèi)的肉堿分為兩類（即游離肉堿和?；鈮A），其分布在能量供應(yīng)需求高的組織中，是細(xì)胞內(nèi)能量代謝的必須物質(zhì)。其中游離肉堿作為長鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體的載體，在脂肪酸氧化代謝過程中起著重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，早產(chǎn)兒組與正常新生兒組比較，血片中的游離肉堿濃度有差異，早產(chǎn)兒組游離肉堿高于正常對照組，且當(dāng)合并低體重時差異增大；同時按胎齡統(tǒng)計765例早產(chǎn)兒發(fā)現(xiàn)，血漿游離肉堿隨著胎齡的增加逐漸降低。有文獻(xiàn)報道[3]，孕后期胎兒體內(nèi)肉堿主動向組織內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，因此血漿肉堿逐漸下降而組織中肉堿逐漸上升。而早產(chǎn)兒尚未完成體內(nèi)游離肉堿向組織轉(zhuǎn)運(yùn)，血漿游離肉堿下降的過程，因此早產(chǎn)兒血漿游離肉堿高于足月兒，本研究結(jié)果與此相符。EMAMINAINI等[4]認(rèn)為，出生低體重兒血漿游離肉堿水平的增高還可能預(yù)示著組織攝入肉堿不足，出生后轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟、骨骼肌和腦組織的肉堿增加。

3.2 ?；鈮A

酰基肉堿是肉堿是與氨基酸或脂肪酸代謝物結(jié)合的一類酯類物質(zhì)。本研究將早產(chǎn)兒組?；鈮A與正常對照組比較，除C10與C10∶2外，其他均有差異。早產(chǎn)兒組中大部分短鏈、中鏈?；鈮A指標(biāo)高于正常對照組，絕大不部分長鏈?；鈮A早產(chǎn)組低于正常對照組。有報道認(rèn)為[5]，早產(chǎn)組血液中中鏈脂肪酸的濃度高于足月兒反應(yīng)機(jī)體的一種自我調(diào)節(jié)狀態(tài)，而長鏈脂肪酸在血液中的濃度反應(yīng)機(jī)體的生理和營養(yǎng)狀態(tài)，早產(chǎn)組血漿長鏈酰基肉堿大部分低于足月組。人體中肝和肌肉是進(jìn)行脂肪酸氧化最活躍的組織，圍產(chǎn)期新生兒脂肪分解迅速利用的是皮下棕色脂肪組織而并非像營養(yǎng)不良患兒一樣利用的肌肉組織，因此圍產(chǎn)期新生兒肝細(xì)胞內(nèi)中鏈?；o酶相對充足，而粒體內(nèi)膜的肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶Ⅱ（CPTⅡ）相對不足[6]。由此筆者推斷分析，早產(chǎn)兒由于中鏈?；o酶相對充足，因此中鏈酰基C10變化差異并不大。

本研究與國內(nèi)外許多文獻(xiàn)報道的情況大致相符但也有部分指標(biāo)存在差異。如董麗萍等[7]發(fā)現(xiàn)，山東魯中地區(qū)早產(chǎn)兒C0、C3、C4、C5、C5∶ 1、C5DC+C6OH、C8、C18∶2高于足月兒，而C3DC+C4OH、C4DC+C5OH、C6DC、C10、C10∶ 1、C12、C12∶ 1、C14∶ 1、C14OH、C16、C16∶ 1、C16∶ 1OH、C16OH、C18、C18∶1OH及C18OH低于足月兒；而本研究發(fā)現(xiàn)單純早產(chǎn)兒C3高于正常組且隨胎齡增加而逐漸降低，但當(dāng)合并低體重時均值反而會低于正常組，這與山東魯中地區(qū)統(tǒng)計的C3低體重兒高于正常組相反。吳鷹軍等[8]研究101例新生兒發(fā)現(xiàn)C0、C4DC、C14、C16、C16∶ 1、C18及 C18∶ 1隨 著妊娠時間的增加而升高，結(jié)果中C0指標(biāo)與本研究結(jié)果相反。而IMAN MANDOUR等[9]統(tǒng)計131例早產(chǎn)兒出生后第5天和第14天以及足月第5天后的發(fā)現(xiàn)早產(chǎn)兒中血漿肉堿中大部分在過早組（第5天）中提高（C0，C4，C5，C6，C8，C10∶1，C18∶1-OH），其中C10∶1和C18∶1-OH的結(jié)果又與本研究及董麗萍、吳鷹軍等相悖。該差異可能是因為生物樣本的復(fù)雜性（人群、種族及地區(qū)差異等），加上分析技術(shù)和方法學(xué)的差異造成。由于代謝組學(xué)分析技術(shù)和操作條件的多樣化，使得大量產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和結(jié)果缺乏規(guī)范性，這給代謝組學(xué)數(shù)據(jù)的采集、存儲、查詢、比較、共享及整合等帶來諸多不便[10]。因此如果想比較或共享早產(chǎn)兒代謝組學(xué)數(shù)據(jù)就必須構(gòu)建一個完善的早產(chǎn)兒代謝產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫，同時需標(biāo)準(zhǔn)化代謝數(shù)據(jù)的處理和研究。

本研究的樣本均來自常州地區(qū)2015年-2016年出生的早產(chǎn)兒，樣本量有限，且由于標(biāo)本數(shù)量少尚未采取本地化的參考值，因此研究結(jié)果存在一定的局限性。如要為臨床醫(yī)生提供更為可靠的早產(chǎn)兒肉堿代謝變化的特點，需要收集更多的臨床數(shù)據(jù)并通過長期隨訪來進(jìn)行驗證。