韓春華

(江蘇省南京市六合區(qū)畜牧獸醫(yī)站 211500)

豬偽狂犬病 (Pseudorabies.PR)是由皰疹病毒科、亞科中的豬皰疹病毒I型所引起豬、牛、羊等多種家畜和野生動物感染的一種以發(fā)熱、奇癢 (除豬外)及腦脊髓炎為主要癥狀的急性傳染病。豬是偽狂犬病的唯一自然宿主，對其危害大。不同階段豬表現出的癥狀不同，母豬感染癥狀有空懷、不發(fā)情、配不上種，返情率高達90%，屢配不上，部分胚胎早期死亡、產仔數少、易流產、前后無明顯癥狀、早產、產弱仔，有的延遲分娩；成年公豬是潛在攜帶者，其攜帶并傳播病毒且不表現癥狀或突然不能使用；仔豬口吐白沫或流涎 (鏈球菌和水腫病均無流涎現象) (第七對面神經麻痹)、角弓反張 (鏈球菌轉圈、水腫病半昏迷趴臥不動)(腦干受損)、個別豬觸摸反應激烈 (神經末梢受損或并發(fā)腦膜炎)、死亡率幾乎100%、頑固性拉人樣稀糞；斷奶以后仔豬：發(fā)病率20%～40%，死亡率10%～20%，表現為神經癥狀、拉稀、嘔吐。一耳向前一耳向后，或兩耳緊貼腦后，屬第五對三叉神經和第六對外展神經機能障礙；中、大豬：臨床無癥狀或類感冒癥狀，但發(fā)生混感時是其中主要潛在病原，起幫兇作用。

偽狂犬基因缺失疫苗注射動物后，動物不能產生針對缺失蛋白的抗體，通過相應缺失蛋白建立的血清學方法可以將感染野毒的血清學陽性豬與基因缺失疫苗豬區(qū)分開來。偽狂犬病目前已完成全基因組測序，多種與毒力和免疫原性相關的基因均已被定位，如TK、gG、gE、gB、gC、gD、gI等，其中TK為該病毒主要的毒力基因，目前Bartha、Buk毒株 (缺失gE基因)使用較多。代表疫苗：豬偽狂病活疫苗 (K61株)天然基因缺失弱毒苗，是一種gI、gE雙基因缺失弱毒疫苗，保留TK基因，該基因缺失阻斷弱毒株回復毒力的可能性，安全性高、產生免疫力快。本次2個試驗場均使用揚州威克生物工程有限公司生產的偽狂犬活疫苗Bartha-K61株。

本試驗目的擬在綜合國內外凈化和根除豬場偽狂犬病科技與實踐成果的基礎上，立足六合區(qū)內現有條件和技術，并結合本地實際情況進行技術集成和現場試驗示范，以期探索并制訂一整套符合六合區(qū)實際情況、可操作性強的豬場偽狂犬病控制凈化方案，為六合區(qū)規(guī)模化養(yǎng)豬場實施偽狂犬病控制凈化乃至根除規(guī)范的制定提供技術支撐。

1 試驗材料與方法

本試驗于2015年7月至2017年4月，對試驗中所選擇2個種豬場進行PRV-gE抗體監(jiān)測，每次樣品的采集、檢測、陽性豬的隔離處理都10d內完成。

1.1 試驗材料

1.1.1 疫苗

豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗（Barth-k61弱毒株），國藥集團揚州威克生物工程有限公司生產。

1.1.2 試劑

豬偽狂犬病gE/gBELISA檢測試劑盒，法國IDvet公司生產，按照 《偽狂犬診斷技術》（GB/T18641-2002）中規(guī)定的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測。

1.1.3 試驗動物

2個規(guī)?；B(yǎng)豬場（A豬場種母豬約60頭、B豬場種母豬約50頭）的種豬群，這2個養(yǎng)豬場在2015年1～2月期間進行豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗免疫。這2個規(guī)模化養(yǎng)豬場的豬群均進行口蹄疫、豬瘟和高致病性豬藍耳病的正常免疫。

1.2 試驗方法

1.2.1 豬偽狂犬病PRV-gE野毒感染抗體與gB免疫抗體檢測

首次檢測是對全部種豬和后備豬作一次偽狂犬病PRV-gE抗體野毒感染檢測，陰性者留作種用。PRV-gE抗體陽性者及時淘汰，或立即免疫gE基因缺失疫苗進行隔離飼養(yǎng)，間隔4～6周后加強免疫1次并檢測gB免疫抗體，作為商品豬出欄。二次監(jiān)測是在首次監(jiān)測3個月再次進行一次PRV-gE抗體檢測，再次淘汰/隔離陽性豬，同時檢測gB免疫抗體。第三次監(jiān)測在連續(xù)2次檢測結果均為陰性者，每6個月進行一次抽檢，每次每群抽檢30～60頭份，不足30頭者全部檢測PRV-gE抗體，同時檢測gB免疫抗體，若抽檢出現PRV-gE抗體陽性，則全群檢測并淘汰/隔離陽性豬。連續(xù)2次抽檢結果均為gE抗體陰性且gB免疫抗體合格率≥70%，則該豬群為凈化豬群；否則按照凈化步驟循環(huán)進行。

1.2.2 豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗免疫

本試驗于2015年7月至2017年4月，對試驗中所選擇2個種豬場進行PRV-gE抗體監(jiān)測，每次樣品的采集、檢測、陽性豬的隔離處理都在5d內完成。集中所有的陰性豬只，按照嚴格的管理措施和生物安全措施飼養(yǎng)，定期免疫、抽檢，觀察豬群PRV-gE抗體情況。對豬場內所有種豬、后備豬及種豬場內70～80日齡的育成/育肥豬均注射偽狂犬病gE基因缺失弱毒苗，種豬3次/年，即每4個月免疫1次；后備豬配種前免疫2次，育肥/育成豬免疫1次。

1.2.3 飼養(yǎng)管理

嚴格執(zhí)行防疫制度，科學制定免疫病種、免疫程序，建立免疫檔案；制定隔離制度，堅持自繁自養(yǎng)，嚴格引種，商品豬實行全進全出，生產區(qū)禁止飼養(yǎng)其他動物；根據生產實際，制定消毒計劃和程序，全面做好清潔和消毒，落實消毒責任；嚴格執(zhí)行生物安全管理措施，實行人員進出控制隔離制度；規(guī)范飼養(yǎng)管理行為，加強監(jiān)測預警。

2 結果與分析

2個豬場不同類別豬群豬偽狂犬病的PRV-gE抗體檢測結果見附表。

每個豬場分6次檢測，2015年7月首次檢測，前4次間隔3個月，共檢測380頭份，淘汰偽狂犬病陽性豬14頭。隨著檢測次數的增加，豬群偽狂犬病的陽性率不斷下降，到第3次檢測時全部為陰性，第4次檢測時也全部為陰性。連續(xù)2次檢測陰性后，每隔6個月在2個豬場各抽檢50頭份，至2017年4月抽檢200頭份樣品，偽狂犬野毒抗體gE均為陰性，免疫抗體合格率gB≧70%，表明2個豬場偽狂犬病達到凈化階段。

3 討論與結論

全球臨床實踐均已證實，豬偽狂犬病是一種可以撲滅和凈化的疫病。目前美國及歐盟部分國家已經做到了偽狂犬病的凈化。本次在六合區(qū)開展2個試驗種豬場控制和凈化豬偽狂犬病的研究結果說明使用gE基因缺失苗進行免疫，試驗應用gEELISA方法跟蹤監(jiān)測免疫種群，淘汰偽狂犬病陽性豬，在2個試驗場均達到凈化偽狂犬病的目的，試驗證明，依照我們的技術路線，按照 “檢測→淘汰/分群→免疫→檢測→淘汰-凈化”的程序，采取對野毒感染豬群進行淘汰，對假定陰性豬群實施高密度免疫，同時加強消毒和提高綜合飼養(yǎng)管理水平等措施開展豬偽狂犬病凈化工作，可以達到凈化甚至根除偽狂犬病的目的。

附表 2個豬場不同類別豬群的PRV-gE抗體檢測結果