杜 清，秦民堅*，吳 剛

（1.青海民族大學藥學院，青海省青藏高原植物資源化學研究重點實驗室，青海 西寧 810007；2.中國藥科大學中藥資源學研究室，江蘇 南京 210038；3.青海省藥物分析重點實驗室，青海 西寧 810007）

明黨參（Radix Changii）為傘形科明黨參屬單種植物明黨參（Changium smyrnioides Wolff.）除去栓皮的干燥根。主產(chǎn)于江蘇、安徽、浙江等地。具有補氣生津、潤肺化痰、平肝和胃的功效[1]。陳建偉等[2]從明黨參中首次分得膽堿[3-4]，一種抗脂肪肝因子的有效成分，分離提取后利用雷納克鹽法通過測定氯化膽堿的含量來定量膽堿的相對含量[5]。

1 實驗材料、試劑與儀器

1.1 實驗材料與試劑

明黨參藥材采集于野生地及購于安徽亳州藥材市場，經(jīng)中國藥科大學秦民堅教授鑒定為傘形科明黨參Changium smyrnioides Wolff.的干燥根。

1.2 試劑

氯化膽堿標準品購于中國藥品生物制品鑒定所；雷氏鹽：Sigma Aldrich of D-89552/Fluka chemie；硝酸（南京化學試劑一廠生產(chǎn)），甲醇（江蘇漢邦科技有限公司生產(chǎn)），正丙醇（上海凌峰化學試劑有限公司生產(chǎn)）；氫氧化鈉（上海凌峰化學試劑有限公司生產(chǎn)），丙酮（天津市博迪化工有限公司生產(chǎn)）。

1.3 儀器

水浴鍋（國華電器有限公司生產(chǎn)）；循環(huán)水式真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司生產(chǎn)）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)）；UV-2501可見分光光度計（日本島津公司生產(chǎn)）。

2 實驗方法

2.1 氯化膽堿標準液的配制

精密稱取105℃干燥至恒重的氯化膽堿標準品200mg，置于200ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度（即濃度為1mg/mL）

2.2 最大吸收波長的確定

取氯化膽堿對照品溶液加入適量5%雷氏銨鹽甲醇溶液，利用膽堿可與雷氏銨鹽生成紅色復鹽的原理，進行比色測定，靜置析晶，濾取結(jié)晶，丙酮溶解，UV-2501分光光度計作全波長掃描，確定最大吸收峰及波長。

2.3 標準曲線的制作

分別取氯化膽堿標準液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，18.0ml，分別加水至20.0 mL，再加入5%雷氏銨鹽甲醇夜各5 mL，冰箱放置生成膽堿雷氏鹽結(jié)晶。濾取結(jié)晶，用正丙醇洗三次，丙酮溶出，定容至25.0 mL，在520 nm波長處測定吸光度，以含量（mg/mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。

2.4 樣品溶液中膽堿的測定

稱取60℃干燥的小樣10g，硝酸加熱回流分解提取，濾液用40%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至9～10，加入過量甲醇，冰箱放置1夜，濾液濃縮加入雷氏銨鹽甲醇溶液，生成粉紅色片狀結(jié)晶，用正丙醇清洗，丙酮溶解結(jié)晶后定容至25 mL容量瓶中，吸取5 mL用丙酮定容至25 mL容量瓶，在520 nm處測定吸光度，由氯化膽堿標準曲線方程計算氯化膽堿的濃度C，并計算樣品中膽堿的百分含量：膽堿含量（mg/100 g）=C×0.746×稀釋倍數(shù)/稱樣量×100，式中：0.746為膽堿系數(shù)

3 結(jié)果及分析

3.1 標準曲線及線性范圍

根據(jù)2.5的方法測得各個濃度下吸光度的值，見表1。以含量（mg/mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制的標準曲線如圖1所示，回歸方程式為：A=0.0098+1.2393C，r=0.9986，說明氯化膽堿標準品溶液在0.08～0.72 mg/mL范圍內(nèi)與其吸光度成線性相關。

表1 氯化膽堿標準品溶液的濃度和吸光度值

圖1 氯化膽堿標準品溶液的標準曲線圖譜

3.2 精密度實驗

精密吸取氯化膽堿標準品溶液6.0 mL，按照樣品測定的條件檢測5次，結(jié)果其精密度RSD為0.08%，說明精密度較好。

3.3 重新性實驗

稱取明黨參小樣藥材粉末10 g，精密稱定5份，按樣品溶液制備方法操作，測定膽堿的含量，經(jīng)計算得出其RSD為4.5%，說明重現(xiàn)性較好。

3.4 穩(wěn)定性實驗

精密吸取氯化膽堿標準品溶液6.0 mL，按照以上條件進行檢測，結(jié)果見表2，由結(jié)果可見在2 h內(nèi)，其RSD為0.3%，說明溶液吸光度值在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 氯化膽堿標準品溶液穩(wěn)定性實驗結(jié)果

3.5 回收率實驗

稱取明黨參粉末5份，每份10 g，按照樣品提取方法進行處理后用標準曲線項下的方法測定其中的膽堿含量，見表3，由結(jié)果可見，其加樣回收率在98.6%～101.7%，RSD為2.0%，說明回收效率較好，且精確度較高。

表3 氯化膽堿標準品溶液回收率的實驗結(jié)果

3.6 不同產(chǎn)地野生明黨參藥材中膽堿的相對含量測定

按照2.6樣品測定的方法測定，見表4。

表4 不同產(chǎn)地野生明黨參藥材中膽堿的相對含量

3 討 論

明黨參藥材中膽堿的相對含量采用雷氏鹽-紫外分光光度法測定，經(jīng)過方法學考察，精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的RSD均在3.0%以內(nèi)，測得的回收率在98.6%～101.7%之間，均值為100.6%，RSD為2.0%，說明該方法可行。

應用考察后的方法學測定不同產(chǎn)地野生藥材中膽堿的相對含量，分別為江蘇南京幕府山37.78%，句容天王鎮(zhèn)虎山57.03%，句容茅山41.98%，南京青龍山60.74%，南京紫金山38.20%，南京老山33.99%，安徽滁州32.79%，安徽安慶57.38%，安徽青陽36.16%，浙江杭州38.96%?？煽闯霾煌a(chǎn)地野生明黨參藥材中膽堿的含量在32.79%～60.74%之間，其中以江蘇南京青龍山、安徽安慶、江蘇句容天王鎮(zhèn)虎山中膽堿的含量較高。