王 勃，呂辰子，何美菁，薛非非，張朔生

（山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 晉中 030619）

地黃為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa（Gaertn.）Libosch.ex Fisch.et Mey.的塊根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，為我國(guó)四大懷藥之一，《中國(guó)藥典》（2015版）地黃項(xiàng)下共收載鮮地黃、生地黃、酒燉地黃、清蒸地黃四種炮制品。其中經(jīng)過生地黃炮制而成的熟地黃，其性由寒轉(zhuǎn)溫，其味由苦轉(zhuǎn)甘，功效由清轉(zhuǎn)補(bǔ)，以滋陰補(bǔ)血、益精填髓為主。在血虛萎黃、暈眩、失眠及月經(jīng)不調(diào)、崩漏等癥方面具有顯著療效；也可用于腎陰不足、骨蒸潮熱證及盜汗等癥。生熟之品藥性迥異，無論從化學(xué)成分的含量還是從種類來說都具有明顯差別，且從古至今熟地黃獨(dú)特藥效一直在中醫(yī)藥領(lǐng)域被眾多醫(yī)藥家所重視。

熟地黃一詞始見于唐孫思邈《備急千金要方》[1]，宋《證類本草》對(duì)熟地黃炮制品的質(zhì)量提出了“光黑如漆，味甘如飴”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，沿用至今。酒制熟地黃始見梁代《本草經(jīng)集注》[2]酒浸法，南北朝《雷公炮炙論》[3]始創(chuàng)以酒為輔料來拌蒸，宋代《普濟(jì)本事方》[4]、《史載之方》[5]記載熟地黃的酒制法：“蒸九遍用酒制造”和“灑酒九蒸九曝，焙干”，明清時(shí)期仍沿用酒九蒸的炮制方法，故歷代本草對(duì)熟地黃的加工炮制工藝記載及爭(zhēng)議頗多。熟地黃制法各異，然皆以“光黑如漆，味甘如飴”為質(zhì)量評(píng)價(jià)、以“九蒸九曬”為達(dá)到炮制時(shí)間較長(zhǎng)的制作要求，同時(shí)在傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)上還要求“太過則性味發(fā)酸”的準(zhǔn)則?；诖?，近年來眾多學(xué)者就熟地黃（清蒸、酒蒸、酒燉、古法（九蒸九曝）[6]炮制終點(diǎn)的判斷、化學(xué)指標(biāo)性成分的動(dòng)態(tài)變化以及熟地的藥理學(xué)作用等方面進(jìn)行了詳盡的探討。故本文就熟地黃炮制相關(guān)的研究成果進(jìn)行綜述，在查閱近十余年文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，統(tǒng)計(jì)、分析、總結(jié)，著重探討生地到熟地炮制過程中藥效指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化以及熟地黃不同炮制方法的差異性，同時(shí)針對(duì)熟地黃不同炮制品的炮制工藝現(xiàn)代客觀量化研究進(jìn)行總結(jié)。另外在現(xiàn)代技術(shù)下，掌握熟地黃各個(gè)方面的研究所采用的前沿技術(shù)，同時(shí)在藥理學(xué)方面，從多方面歸納其藥理作用，并且試著闡釋其發(fā)揮作用的機(jī)制，站在中藥材炮制發(fā)展的角度探討研究中的不足，并且提出發(fā)展方向，以期對(duì)熟地黃客觀標(biāo)準(zhǔn)的量化和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立作出總結(jié)，加速中藥材的深入發(fā)展。

1 熟地黃制備過程中常用的化學(xué)指標(biāo)性成分的動(dòng)態(tài)變化研究

熟地黃中的化學(xué)成分與地黃相似，現(xiàn)研究主要集中于環(huán)烯醚萜及其苷類、苯乙醇苷類、糖類、氨基酸類等化合物，在不同的炮制過程中，成分的含量和種類有明顯的差異。

1.1 環(huán)烯醚萜及其苷類、苯乙醇苷類和5-HMF等物質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化

梓醇（Catalpol，分子式C15H22O10），在多種環(huán)烯醚貼苷類有效成分中，含量最高，在由生地到熟地的炮制過程中基本變化趨勢(shì)為明顯下降，降低率為40%-80%。而熟地黃酒制品梓醇的含量為0.203%，水制品為0.182%，兩者無明顯差異[6]。

地黃苷A（RehmanniosideA，分子式C21H32O15），地黃苷D（Rehmannioside D，分子式C27H42O20），地黃苷A、D水溶性好、熱穩(wěn)定強(qiáng)，在生地和熟地中含量較高，同時(shí)在加工炮制過程中幾乎不分解，現(xiàn)在大多數(shù)學(xué)者都將其作為質(zhì)量控制的標(biāo)志物。孟祥龍[7]等研究地黃清蒸九制的過程，認(rèn)為隨著炮制程度加深，地黃苷A和地黃苷D含量略為增加。

益母草苷（Onuride，分子式C15H24O9）其含量量?jī)H次于梓醇、地黃苷A和地黃苷D。地黃中益母草苷和梓醇的極性較為接近，分離純化具有一定的難度，不易用化學(xué)試劑分離[6]。在熟地黃炮制的過程中，隨著蒸制次數(shù)的增加，其含量逐漸減少，最后甚至幾乎全部降解[8]。另外隨著加熱炮制時(shí)間的延長(zhǎng)，地黃苷D的含量逐漸增加，是否由單糖苷或多糖苷以及與其結(jié)構(gòu)相似的益母草苷轉(zhuǎn)化而來，有待進(jìn)一步研究[9]。

毛蕊花糖苷（Acteoside，分子式C29H36O15）又名麥角甾苷，是《中國(guó)藥典》（2015版）中熟地黃質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分[10]。在炮制成熟地的過程中毛蕊花糖苷的含量隨炮制時(shí)間的增加而降低，而異毛蕊花糖苷則正好相反。尚偉慶[11]等認(rèn)為生地黃中毛蕊花糖苷在炮制過程中可能部分轉(zhuǎn)化為異毛蕊花糖苷。然而李惠等認(rèn)為生地和熟地中毛蕊的含量不存在明顯差別，生地中含量為0.030%，熟地中含量為0.028%（P＞0.05），因此認(rèn)為麥角甾苷是地黃中較穩(wěn)定的化學(xué)成分，作為質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分具有一定意義。于文娜[12]認(rèn)為蒸制時(shí)間是地黃中異毛蕊花糖苷含量變化較大的主要影響因素；而鮮地黃在不同烘制時(shí)間段下其異毛蕊花糖苷的含量變化不明顯。毛蕊花糖苷與異毛蕊花糖苷在一定條件下可以相互轉(zhuǎn)化。

5-HMF是炮制成熟地的過程中新產(chǎn)生的一種物質(zhì)，在地黃炮制過程中，5-HMF含量增加20倍左右。5-HMF的變化在地黃炮制過程中有一定的蹤跡可尋，研究發(fā)現(xiàn)在達(dá)到傳統(tǒng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的前提下，常壓蒸制24 h或加壓蒸制4 h的熟地黃其5-HMF含量在0.2%～0.3%之間，另外它的含量隨著蒸制時(shí)間的增加而增加，在蒸制52 h左右時(shí)，其含量逐步下降。猜想可能是由于長(zhǎng)時(shí)間水蒸氣加熱而損失，或5-HMF進(jìn)一步分解之故，有待進(jìn)一步進(jìn)行研究[6]。同時(shí)梓醇的減少與5-HMF的增加呈現(xiàn)相關(guān)對(duì)應(yīng)趨勢(shì)，即梓醇的減少幅度越大，5-HMF的增加幅度越大[13]，二者是否有一定轉(zhuǎn)換關(guān)系，還未有定論。另外對(duì)5-HMF是毒性成分還是特殊的活性成分，一直有爭(zhēng)議[10]。5-HMF的增加也有人認(rèn)為是美拉德反應(yīng)中還原糖如葡萄糖和氨基酸或蛋白質(zhì)中的自由氨基縮合生成席夫堿，再經(jīng)過Amadori重排之后，產(chǎn)物根據(jù)pH值的不同發(fā)生降解，當(dāng)pH值等于或小于7時(shí)，Amadori產(chǎn)物主要發(fā)生1,2-烯醇化而形成糠醛（當(dāng)糖是戊糖時(shí)）或羥甲基糠醛（當(dāng)糖為己糖時(shí)）。在對(duì)5-HMF及其新分離衍生物5-（α-D-吡喃半乳糖基-（1→6）-α-D-吡喃半乳糖基氧基甲基）-2-呋喃甲醛的研究中認(rèn)為其濃度與5-HMF的濃度相當(dāng)，表明其有可能作為R.radix preparata中的標(biāo)記化合物[14]。

陶益[15]等運(yùn)用高分辨質(zhì)譜鑒定了地黃的8個(gè)主要差異化學(xué)成分，并發(fā)現(xiàn)蒸制品中的梓醇含量下降了57%，而連翹酯苷E含量增加了70%，其他環(huán)烯醚萜苷類成分含量都顯著降低，特別是連翹酯苷的含量下降最大，降低了78%。此外，毛蕊花糖苷和異麥角甾苷的含量分別下降64%和35%，另外，酒炙品中環(huán)烯醚萜類成分含量均顯著降低，猜想其可能與環(huán)烯醚萜苷類成分在酒制條件下發(fā)生斷裂之后進(jìn)一步降解有關(guān)。另外地黃隨酒燉程度加重，梓醇、毛蕊花糖苷在13 h前含有量逐漸下降，而后趨于平穩(wěn)；同時(shí)5-HMF含有量逐漸上升，酒燉11 h后含量上升明顯[16]。

九蒸九曬炮制熟地黃的過程中，從一蒸一曬到六蒸六曬，梓醇和益母草苷的含量逐漸減低；七蒸七曬后，梓醇和益母草苷均未檢出。這也許是由于梓醇、益母草苷分解、轉(zhuǎn)化或隨水蒸氣損失所導(dǎo)致的。地黃苷D的含量從一蒸一曬到三蒸三曬并沒有明顯差別；從四蒸四曬到九蒸九曬，地黃苷D的含量逐漸增加。這可能是由其它環(huán)烯醚萜苷類成分水解或轉(zhuǎn)化而來，其結(jié)果有待進(jìn)一步研究[6]。梓醇和毛蕊花糖苷在一蒸一曬到四蒸四曬這個(gè)過程中含量明顯下降，而后趨于平穩(wěn)。地黃九蒸九曬的過程中，隨著炮制程度加深，5-HMF含量呈明顯上升趨勢(shì)，同時(shí)可看出，從二蒸二曬到九蒸九曬的過程中其含量明顯増加[17]。

1.2 糖類的動(dòng)態(tài)變化

地黃中主要有水蘇糖、毛蕊糖、棉子糖、甘露三糖等寡糖，半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖等單糖和分子量不等的多糖[18]?，F(xiàn)分離和檢測(cè)的大多為地黃寡糖，生地寡糖中水蘇糖所占比例最高，達(dá)到64.9%，加工炮制過程中，水蘇糖含量大幅度下降，熟地黃中僅含0.0%-7.3%，而主要寡糖變成甘露三糖（11.5%-26.4%）[19]。研究認(rèn)為在鮮地黃烘焙過程中，水蘇糖以脫半乳糖為主，生成棉子糖，而在生地黃蒸制過程中，以脫果糖為主，生成甘露三糖[20]。另外隨著炮制時(shí)間蔗糖、棉子糖、水蘇糖和毛蕊花糖在炮制過程中呈下降趨勢(shì)，而果糖、葡萄糖、密二糖和甘露三糖明顯上升[21]。現(xiàn)代研究認(rèn)為糖類的變化與熟地黃功效的變化可能于美拉德反應(yīng)相關(guān)，糖的結(jié)構(gòu)和種類不同導(dǎo)致發(fā)生反應(yīng)的速率不同，反應(yīng)的速度為五碳糖＞己醛糖＞己酮糖雙糖，還原糖含量與褐變速度成正比[22]。

李軍等[23]認(rèn)為還原糖在清蒸22 h、酒燉48 h和反復(fù)蒸曬7次含量最高，隨后含量有所降低。地黃九蒸九曬過程中，隨著炮制程度加深，一蒸一曬之后葡萄糖明顯增多，而四蒸四曬之后果糖含量明顯增加[15]。

1.3 氨基酸類動(dòng)態(tài)變化

在加工成熟地黃的過程中氨基酸含量普遍下降，其中含量下降最多的四種氨基酸依次為賴氨酸、精氨酸（含量減少90%以上）和谷氨酸、絲氨酸（含量減少80%以上）[18]，下降的原因可能是加工過程中產(chǎn)生的5-HMF及果糖等單糖與氨基酸反應(yīng)生成蛋白黑素造成的[13]。

1.4 其他成分的動(dòng)態(tài)變化

含糖基的紫羅蘭酮類加工成熟地黃時(shí)會(huì)脫去糖基。而脂肪酸、芳香酸等有機(jī)酸類在地黃加工過程中變化較小[17]。熟地黃中Ca、Fe、A1、Zn、Cu等金屬元素的量較高，生地黃加工炮制為熟地黃后，Al、Ca、Cr、Fe等金屬元素的量變化較為明顯[24]。

2 熟地黃炮制終點(diǎn)的研究進(jìn)展

傳統(tǒng)關(guān)于中藥炮制終點(diǎn)的判斷一般基于基本感官經(jīng)驗(yàn)，即“眼看、手摸、鼻嗅、口嘗”等直觀感受或者最簡(jiǎn)單的統(tǒng)計(jì)方法，對(duì)于熟地黃，《中國(guó)藥典》（2015版）的炮制規(guī)定仍然是蒸制黑潤(rùn)，晾曬至八成干、切片、干燥，現(xiàn)今中藥炮制終點(diǎn)的衡量有了多種方式，對(duì)熟地黃的炮制有了可控的量化數(shù)據(jù)：

對(duì)于水制熟地黃，張浩等[25]采用HPLC，浸出物測(cè)定法和L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)得出熟地黃需先切片再蒸制且其較優(yōu)炮制工藝條件為浸潤(rùn)水量0.2 L·kg-1，浸潤(rùn)時(shí)間2 h，蒸制時(shí)間7 h；曹建軍[26]等通過標(biāo)準(zhǔn)熟地黃指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)生地黃在蒸制26 h后所制樣品與標(biāo)準(zhǔn)熟地黃相似性最大；屠萬倩[27]等：采用L9（34）正交試驗(yàn)優(yōu)化熟地黃的炮制工藝。熟地黃的最優(yōu)炮制工藝為在蒸制溫度125℃、蒸制壓力150 kPa下蒸制2次，每次2 h；馬曉嘉[28]確定了熟地黃的蒸制方法為：將生地黃藥材加水浸潤(rùn)1 h，再將處理好的生地黃置于不加水的蒸發(fā)皿中放在蒸鍋的蒸屜上蒸制5-10 h，蒸制過程中不能中斷蒸汽或減少蒸汽量。蒸制結(jié)束后，將蒸發(fā)皿中收集的液汁拌在熟地黃表面，晾至表面液汁不黏手，再置于烘箱中，以60℃烘至全干。

對(duì)于酒制熟地黃，李華堅(jiān)[29]采用高壓蒸汽滅菌器在0.12 MaP蒸制熟地黃，發(fā)現(xiàn)地黃在壓力0.12 MaP，黃酒用量為藥材的20%，蒸制時(shí)間7 h炮制效果最佳；趙丹等[30]發(fā)現(xiàn)隨著酒燉炮制時(shí)間的增加，5-羥甲基糠醛含量在酒燉28 h后大幅增加；還原糖含量逐漸升高，在酒燉20 h后相對(duì)穩(wěn)定；水溶性浸出物無明顯變化；外觀顏色逐漸加深，口感由苦轉(zhuǎn)甜再轉(zhuǎn)酸，且色澤參數(shù)值減小，優(yōu)選出酒燉24 h為最佳炮制時(shí)間；楊榮英[31]比較了酒制熟地黃改進(jìn)工藝和傳統(tǒng)工藝的輔料使用量、輔料制備時(shí)間、蒸制時(shí)間、蒸制時(shí)耗煤量、干燥時(shí)間和干燥時(shí)耗煤量，進(jìn)行了工藝的優(yōu)化。樊克鋒[32]等利用紅外光譜（FTIR）對(duì)酒燉熟地黃進(jìn)行炮制過程和炮制終點(diǎn)評(píng)價(jià)分析，認(rèn)為在酒燉熟地炮制變化過程中，10 h左右時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)特征開始出現(xiàn)復(fù)雜變化態(tài)，15 h時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)都趨于穩(wěn)定特征化。

以還原糖作為指標(biāo),李軍[33]采用還原糖測(cè)定儀發(fā)現(xiàn)當(dāng)清蒸至22 h和酒燉至48 h時(shí)，還原糖含量達(dá)到變化的峰值；張麗萍[34]等發(fā)現(xiàn)在地黃蒸制過程中清蒸22 h和反復(fù)蒸曬7次還原糖含量最高，隨后含量有所降低；

對(duì)于古法“九蒸九制”，鐘戀等采用機(jī)器視覺技術(shù)、電子鼻技術(shù)、電子舌技術(shù)對(duì)其炮制終點(diǎn)進(jìn)行客觀量化，發(fā)現(xiàn)清蒸第四次的熟地黃是顏色變化的主要階段，清蒸第六次的熟地黃是氣味明顯變化的階段。此外又結(jié)合“性狀”聚類分析結(jié)果及內(nèi)在成分聚類分析結(jié)果，認(rèn)為地黃潤(rùn)透后至于蒸鍋內(nèi)待圓氣后密閉蒸制4 h，取出曬至八成干，如此蒸曬四次至五次即達(dá)到清蒸九制炮制的“拐點(diǎn)”[16]；孟祥龍等研究認(rèn)為炮制輔料黃酒對(duì)炮制品的質(zhì)量存在顯著的影響，清蒸法與酒蒸法都以第3次、第4次和第6次蒸曬所得熟地黃的相關(guān)物質(zhì)的量呈較大的波動(dòng)性[7]；張靜等[35]采用綜合平衡法，多指標(biāo)進(jìn)行結(jié)果評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)最優(yōu)炮制工藝條件為加黃酒量40%，反復(fù)9次蒸制、每次蒸制6 h，70℃鼓風(fēng)干燥；胡志芳[36]考察認(rèn)為在熟地黃炆制過程中，輔料的使用會(huì)引入一些新的化學(xué)成分，這就使得已有成分的含量發(fā)生變化。中藥炮制現(xiàn)代化、客觀化是伴隨著現(xiàn)代儀器的發(fā)展實(shí)現(xiàn)的，因此需要應(yīng)用多方面的技術(shù)對(duì)藥效化學(xué)成分進(jìn)行定量表征。

3 熟地黃藥理作用的研究進(jìn)展

傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論均認(rèn)為熟地黃可滋陰、補(bǔ)血、益精填髓，被稱為“壯水之主，補(bǔ)血之君”?！端幤坊x》[46]中記載熟地黃可“安五臟，和血脈，潤(rùn)肌膚，養(yǎng)心神，寧魂魄，滋補(bǔ)真陰，封填骨髓，為圣藥也。”現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，熟地黃可增強(qiáng)免疫力和記憶力，在延緩細(xì)胞衰老和細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤、抗炎、降血糖血脂方面具有顯著效用[47]。

3.1 增強(qiáng)記憶力

GABA是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的抑制性神經(jīng)傳達(dá)物質(zhì)，以GABA為遞質(zhì)的中樞神經(jīng)突觸部位約占30%。NMDA受體（NRs）與突觸的可塑性和學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)。通過該受體本身、其共軛的離子通道及調(diào)節(jié)部位3者形成的復(fù)合體而形成自己獨(dú)特的作用機(jī)制。多數(shù)研究已經(jīng)表明熟地黃通過調(diào)節(jié)癡呆模型動(dòng)物腦Glu和GABA含量，提高NMDAR1、GABAR在海馬的表達(dá)，從而能延長(zhǎng)癡呆動(dòng)物跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期、減少錯(cuò)誤次數(shù)；縮短水迷宮實(shí)驗(yàn)尋臺(tái)時(shí)間。因此熟地黃有改善學(xué)習(xí)記憶的作用[48,49]；李龍宣等[50]發(fā)現(xiàn)毛蕊花糖苷中、高劑量組能夠顯著改善小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，能夠增加神經(jīng)元數(shù)量，減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡及β淀粉樣蛋白沉積。從而改善阿爾茨海默病小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力；李許[51]研究發(fā)現(xiàn)D-半乳糖致衰老大鼠大腦海馬區(qū)EPO的表達(dá)下降，與腦部氧化應(yīng)激損傷的增多有關(guān)，并受HIF-2α調(diào)控，并且熟地黃水提物可增加腦內(nèi)EPO的表達(dá)并改善衰老大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。崔瑛[49]等認(rèn)為熟地黃所具備的改善MSG大鼠學(xué)習(xí)記憶作用，可能是通過提高C-fos、NGF在海馬的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。

3.2 延緩細(xì)胞衰老

SOD（超氧化物岐化酶）具有特殊的生理活性，是生物體內(nèi)首要清除自由基的物質(zhì)。SOD是臨床藥理中衰老與死亡的直觀指標(biāo)，NOS（一氧化氮合酶）是一種同工酶，存在于神經(jīng)元中，在不同腦區(qū)呈選擇性分布。熟地黃在整體上具有對(duì)抗衰老變化的作用，研究發(fā)現(xiàn)其能明顯降低D-半乳糖衰老模型大鼠大腦皮層SA-β-gal陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)，同時(shí)提高衰老大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，這可能與其可以提高SOD、NOS活性，減少M(fèi)DA、LPO含量有關(guān)[52]；董靜[53]等觀察熟地黃多糖（RGP）對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子STAT活性的調(diào)控、對(duì)凋亡抑制基因生存素Survivin的影響；觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，探討其促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用及影響認(rèn)為RGP可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并有一定調(diào)節(jié)免疫的作用，其機(jī)制可能與RGP抑制STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路并進(jìn)一步抑制Survivin等下游靶基因的表達(dá)有關(guān)。

表1 熟地黃炮制相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段的應(yīng)用

3.3 減慢細(xì)胞凋亡

李龍宣[50]發(fā)現(xiàn)Aβ1-40能誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡，熟地黃對(duì)Aβ1-40誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元凋亡有保護(hù)作用，并認(rèn)為這是其改善AD樣大鼠學(xué)習(xí)記憶功能作用機(jī)制之一。

3.4 抗腫瘤

Caspase-3是一種蛋白酶，作為細(xì)胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶和CTL細(xì)胞殺傷機(jī)制的重要組成部分。Caspase-3在抗腫瘤方面具有明顯的研究意義。熟地黃多糖能上調(diào)H22荷瘤小鼠腫瘤內(nèi)細(xì)胞色素C和Caspase-3的表達(dá)，其機(jī)制可能是促進(jìn)線粒體釋放細(xì)胞色素C及其Caspase-3的激活，啟動(dòng)線粒體凋亡途徑，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來發(fā)揮抗腫瘤作用[54]。熟地黃多糖對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤組織中Bcl-2蛋白的表達(dá)有明顯的抑制作用，使凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯增多，熟地黃多糖能有效誘導(dǎo)LPOH22荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡[55]。

3.5 抗焦慮、抗疲勞

崔瑛[56]等發(fā)現(xiàn)熟地黃具有抗焦慮作用。觀察到小鼠在明暗箱模型和高架十字迷宮模型上熟地黃表現(xiàn)了顯著的抗焦慮現(xiàn)象。猜想其作用機(jī)制與提高中樞γ-氨基丁酸含量和GABAAR1表達(dá)；降低谷氨酸含量和N-甲基-D-天冬氨酸受體1表達(dá)有關(guān)。在對(duì)熟地黃多糖的抗疲勞作用的研究中認(rèn)為熟地黃抗疲勞作用機(jī)理可能與肝糖原貯積的增加和SUN和BLA積累的減少有關(guān)[57]。

3.6 抗炎

熟地黃的腸道茵群代謝研究發(fā)現(xiàn)藥物提取液口服后可促進(jìn)腸道中有益菌生長(zhǎng)并抑制有害菌的生長(zhǎng)，從而降低機(jī)體內(nèi)炎癥因子含量，減輕慢性腎炎患者炎癥癥狀[58]。李哲[59]等發(fā)現(xiàn)在同步放化療基礎(chǔ)上，對(duì)鼻咽癌患者給予熟地黃多糖的藥劑服用，可能對(duì)鼻咽癌患者STAT3通路存在顯著影響，從而顯著改善患者體內(nèi)促炎因子和相關(guān)蛋白的具體表達(dá)量。此外熟地黃中的DHAP是在在活化的巨噬細(xì)胞中通過阻斷ERK1/2和NF-kB信號(hào)傳導(dǎo)途徑來抑制激活的巨噬細(xì)胞中炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，從而揭示了其具有一定的抗炎活性[60]。梓醇可抑制肺內(nèi)異常嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，并抑制OVA誘導(dǎo)的嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子eotaxin及其受體CCR3的升高。在對(duì)地黃主要有效活性成分梓醇的研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過梓醇治療的哮喘小鼠的骨髓細(xì)胞中IL-5R對(duì)的表達(dá)低于未治療的哮喘小鼠,表明梓醇可減弱OVA誘導(dǎo)的哮喘癥同時(shí)抑制炎性細(xì)胞尤其是嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，進(jìn)入肺部。本研究進(jìn)一步將抗炎作用歸于其具體的藥效成分[61]。

3.7 降血糖、降血脂

經(jīng)不同炮制方法制備的地黃合劑有明顯的降血糖和血脂的作用，觀察到其可以明顯降低糖尿病小鼠的血糖血脂含量。并且熟地黃不同炮制方法對(duì)地黃合劑降血糖、降血脂效果影響較大[62]。高密度脂蛋白膽固醇（HDL-cholesterol；HDL-Ch）是指高密度脂蛋白分子所攜的膽固醇，是逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的內(nèi)源性膽固醇酯，可減少患冠狀動(dòng)脈心臟病的危險(xiǎn)。地黃對(duì)糖尿病的治療和預(yù)防作用，可能與其降低血清TC和TG水平并提高血清中HDL-C含量有關(guān)。在比較中發(fā)現(xiàn)，熟地黃降血糖及調(diào)脂的效果不如地黃明顯，其原因可能是由于地黃的炮制導(dǎo)致了降糖成分的損失[63]。此外還證實(shí)熟地黃具有顯著的抗糖尿病性骨質(zhì)疏松的作用[64]。

3.8 促進(jìn)造血

熟地黃多糖可促進(jìn)機(jī)體的造血機(jī)能，多糖劑量會(huì)導(dǎo)致效果有顯著差別，高、中劑量對(duì)造血有顯著改善作用，可以增加氣血雙虛小鼠外周血血細(xì)胞狀況和血清粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子水平，并且以中劑量下的造血提升作用最強(qiáng)[65]。

3.9 增強(qiáng)免疫

熟地黃增強(qiáng)免疫可能是通過增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞Th1和Th2細(xì)胞因子的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。鄭曉珂[66]發(fā)現(xiàn)熟地黃水提物和粗多糖有免疫增強(qiáng)作用，觀察到其顯著促進(jìn)了刀豆蛋白A刺激前后小鼠胸腺及脾的淋巴細(xì)胞的增殖，提高了上清液白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-5和干擾素-γ的水平，同時(shí)呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系。

4.0 對(duì)滋膩礙胃現(xiàn)象的影響

熟地黃在病人久服之后出現(xiàn)了滋膩礙胃的現(xiàn)象。李嫻等[67]比較4種不同炮制品引起大鼠滋膩礙胃現(xiàn)象的程度。發(fā)現(xiàn)清蒸熟地黃引起大鼠出現(xiàn)滋膩礙胃現(xiàn)象最為嚴(yán)重；而九蒸九曬熟地黃通過提高GAS、MTL、SP的含量以及降低胃內(nèi)容物殘留率，可以有效地消除對(duì)大鼠滋膩礙胃的影響。

4 結(jié)語(yǔ)和展望

中藥炮制終點(diǎn)的確認(rèn)與量化是近代中藥研究者的重要任務(wù)，中藥的多成分，多靶點(diǎn)，多來源一直是限制其發(fā)展的因素，就本文熟地黃而言，雖然眾多學(xué)者就指標(biāo)化學(xué)成分和應(yīng)用多種儀器技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了考量，取得了初步成果，但是仍有以下問題值得探討：①目前分離檢測(cè)的常用指標(biāo)性成分是否就是發(fā)揮療效的物質(zhì)并不明確；②各種成分在不同炮制品種的炮制過程中轉(zhuǎn)換、增減、轉(zhuǎn)運(yùn)等關(guān)系不清楚，以及其作用機(jī)制也有待研究；③現(xiàn)在大多學(xué)者認(rèn)為美拉德反應(yīng)[68-69]與熟地黃的炮制過程中化學(xué)成分的增減密切相關(guān)。生地黃含有的大量糖的水解產(chǎn)物如果糖、葡萄糖以及大量游離氨基酸均可參與美拉德反應(yīng)；梓醇等環(huán)烯醚帖苷類由于苷元具有半縮醛結(jié)構(gòu)，活性較高，水解后也可參與美拉德反應(yīng)；溫度對(duì)美拉德反應(yīng)速度的影響顯著，一般溫度相差10度，褐變速度就加快，而熟地黃炮制過程就是要不斷加熱。

另外現(xiàn)在科技技術(shù)的發(fā)展和學(xué)科間的融合交互，中藥的發(fā)展有更多的任務(wù)，如對(duì)于量效關(guān)系的把握，對(duì)各種成分的動(dòng)態(tài)比例關(guān)系的探討，分子水平和蛋白質(zhì)水平的研究，質(zhì)量標(biāo)志物和生物標(biāo)準(zhǔn)的建立，組方的聯(lián)系研究等等，這些都是我們衡量終點(diǎn)的依據(jù)，需要我們進(jìn)一步深入研究。