張 方，王小燕，胡曉藝

(西部戰(zhàn)區(qū)空軍醫(yī)院，四川 成都 610021)

[作者簡(jiǎn)介] 張方，女，主管藥師，從事醫(yī)院藥學(xué)工作。

正常人體的免疫功能處于平衡狀態(tài)，機(jī)體免疫力降低會(huì)對(duì)身心健康產(chǎn)生不利影響。免疫促進(jìn)劑則是一種用于提高機(jī)體免疫力，輔佐疾病治療的藥物。匹多莫德屬于臨床一種全新合成的胸腺二肽類(lèi)免疫促進(jìn)劑，其可促進(jìn)機(jī)體免疫功能提高，輔助治療病毒、細(xì)菌感染等疾病效果較好[1-3]。本研究通過(guò)觀察匹多莫德干預(yù)后免疫功能缺陷小鼠脾組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)與白細(xì)胞介素-4(IL-4)表達(dá)情況，進(jìn)一步探討了匹多莫德治療免疫功能缺陷疾病的機(jī)制，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1動(dòng)物 清潔級(jí)雄性昆明種小鼠45只，體質(zhì)量21～38 g，由解放軍第452醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(京)2002-0001。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)在SPF環(huán)境中，飲用水及飼料均符合國(guó)家有關(guān)SPF動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。

1.2藥品、試劑與儀器 匹多莫德(深圳卓越生物科技有限公司)，環(huán)孢菌素A(上海聯(lián)碩生物科技有限公司),生理鹽水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司)，10%中性福爾馬林液(南昌雨露實(shí)驗(yàn)器材有限公司)，免疫組織化學(xué)相關(guān)試劑盒(上海哈靈生物科技有限公司)，免疫組織化學(xué)方法相關(guān)設(shè)備及技術(shù)均由解放軍第452醫(yī)院病理科提供。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 將45只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、匹多莫德組，每組15只。模型組、匹多莫德組均參照文獻(xiàn)[4-5]的方法，給予環(huán)孢菌素A 30 mg/(kg·d)腹腔注射造模，正常組則腹腔注射生理鹽水，均隔日1次，共注射3次。造模后，匹多莫德組每日尾靜脈注射匹多莫德10 mL/kg，正常組、模型組給予注射生理鹽水，共注射11 d。

1.4觀察指標(biāo) 分別于造模后的第1，6，11天，每組隨機(jī)處死5只小鼠，取小鼠脾組織，采用10%的中性福爾馬林液進(jìn)行保存。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠脾組織中TNF-α與IL-4表達(dá)情況，經(jīng)計(jì)算機(jī)圖像處理軟件進(jìn)行分析，運(yùn)用灰度值表示TNF-α與IL-4的活性。

2 結(jié) 果

2.1各組脾組織中TNF-α表達(dá)情況比較 鏡下發(fā)現(xiàn)TNF-α蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜上，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)亦有少量表達(dá)，造模后的第11天，模型組細(xì)胞膜上有大量TNF-α蛋白表達(dá)，匹多莫德組表達(dá)明顯少于模型組，見(jiàn)圖1。造模后的第1，6，11天，匹多莫德組和模型組脾組織中TNF-α灰度值均明顯高于正常組(P均<0.05)，但匹多莫德組明顯低于模型組(P均<0.05)，見(jiàn)表1。

圖1 造模后第11天各組小鼠脾組織中TNF-α蛋白表達(dá)染色表現(xiàn)(×400)

組別n造模后第1天造模后第6天造模后第11天FP正常組572.43±1.36①73.02±1.71①73.15±1.64①426.920.00模型組586.25±1.8492.48±2.06105.94±2.17446.540.00匹多莫德組580.05±1.72①②78.36±2.14①②75.67±3.03①②501.840.00F178.33248.16277.75P0.000.000.00

注：①與模型組比較，P<0.05；②與正常組比較，P<0.05。

2.2各組脾組織中IL-4表達(dá)情況比較 鏡下發(fā)現(xiàn)IL-4蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜上，造模后的第11天，模型組細(xì)胞膜上有大量IL-4蛋白表達(dá)，匹多莫德組表達(dá)明顯少于模型組，見(jiàn)圖2。造模后的第1，6，11天，造模后的第1，6，11天，匹多莫德組和模型組脾組織中IL-4灰度值均明顯高于正常組(P均<0.05)，但匹多莫德組明顯低于模型組(P均<0.05)，見(jiàn)表2。

3 討 論

環(huán)孢菌素A可以對(duì)機(jī)體中的T細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)及其識(shí)別功能產(chǎn)生直接影響，阻礙T細(xì)胞發(fā)生活化，故環(huán)孢菌素A廣泛用于細(xì)胞免疫缺陷型動(dòng)物模型的構(gòu)建[4-5]。本研究對(duì)小鼠經(jīng)腹腔注射30 mg/(kg·d)的環(huán)孢菌素A，成功構(gòu)建了免疫缺陷型小鼠模型。

表2 各組小鼠脾組織中IL-4表達(dá)灰度值比較

注：①與模型組比較，P<0.05；②與正常組比較，P<0.05。

圖2 造模后第11天各組小鼠脾組織中IL-4蛋白表達(dá)染色表現(xiàn)(×400)

相關(guān)資料顯示，脾臟內(nèi)含有豐富的淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，與機(jī)體的體液免疫密切相關(guān)[6-7]。巨噬細(xì)胞是吞噬細(xì)胞的一種，吞噬細(xì)胞為一種消化異物能力比較強(qiáng)的細(xì)胞，可防御機(jī)體不受到外界外源性異物等的侵襲。TNF-α及IL-4屬于吞噬細(xì)胞發(fā)生活化之后所釋放出來(lái)的細(xì)胞因子,在機(jī)體炎癥反應(yīng)中扮演著很重要的角色[8-10]。故檢測(cè)脾組織中TNF-α和IL-4的表達(dá)情況可反映機(jī)體的免疫功能情況。

匹多莫德為一種人工合成的二肽類(lèi)免疫調(diào)節(jié)劑，臨床上多被用于呼吸道感染、局部或全身免疫功能低下患者的治療[11]。動(dòng)物研究顯示，匹多莫德可以提高正常和免疫功能低下小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力[12]。謝榮華[13]報(bào)道，匹多莫德能輔助GRA1蛋白刺激宿主產(chǎn)生較高的細(xì)胞免疫和體液免疫，具有增強(qiáng)免疫應(yīng)答和提高GRA1蛋白抗原的免疫原性作用。Liu等[14]研究發(fā)現(xiàn)，匹多莫德注射劑能夠強(qiáng)化機(jī)體T、B細(xì)胞功能，以改善機(jī)體特異性免疫反應(yīng)。臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，匹多莫德可提高反復(fù)呼吸道感染患者的免疫功能，且不良反應(yīng)少，不存在致畸及生殖毒性，使用后體內(nèi)不存在蓄積[15-16]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組細(xì)胞膜上有大量TNF-α和IL-4蛋白表達(dá)，匹多莫德組表達(dá)明顯少于模型組；造模后的第1，6，11天，匹多莫德組和模型組脾組織中TNF-α和IL-4灰度值均明顯高于正常組，但匹多莫德組TNF-α和IL-4灰度值均明顯低于模型組。提示匹多莫德能夠抑制脾組織中TNF-α和IL-4的表達(dá)，從而減輕由炎性遞質(zhì)大量釋放所誘發(fā)的免疫功能缺陷導(dǎo)致的病理?yè)p傷，推斷匹多莫德可能是通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能以改善免疫功能缺陷的癥狀。