李紅紅 ，陳朋朋 ，付傳香 ，吳澤宇 ，惠愛玲 ，許 坤 ，張文成

（1.合肥工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009；2.安徽德信佳生物醫(yī)藥有限公司，安徽阜陽(yáng)236000）

洋金花為茄科植物白曼陀羅（Datura meteI L.）或毛曼陀羅（D.innoxia MiII）的干燥花，具有平喘止咳、鎮(zhèn)痛、解痙等功效[1]，其有效成分主要有東莨菪堿、莨菪堿、山莨菪堿及少量的樟柳堿?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，東莨菪堿及莨菪堿具有較高的藥用價(jià)值[2]，測(cè)定東莨菪堿和莨菪堿的含量對(duì)更好地控制藥材質(zhì)量、確保臨床療效等具有重要意義。

目前的測(cè)定方法主要有高效液相色譜法[3-5]、薄層色譜法[6]、氣相色譜法[7]、毛細(xì)管電泳法[8]、離子對(duì)色譜法[9]等。液相色譜法以其較高的靈敏度和選擇性而被廣泛使用。周軍等[3]對(duì)華山參滴丸中生物堿的測(cè)定采用乙腈－甲醇－磷酸氫二鈉緩沖液（15∶4∶81）為流動(dòng)相，磷酸氫二鈉緩沖液（含30 mmol·L-1磷酸氫二鈉、0.08%三乙胺，用磷酸調(diào)pH至6.0），結(jié)果顯示，樣品色譜中東莨菪堿、阿托品色譜峰與雜質(zhì)峰分離較好，但流動(dòng)相過(guò)于復(fù)雜。康輝等[6]的研究中，采用甲醇-磷酸水體系，雖然山莨菪堿的分離效果較好，但對(duì)于東莨菪堿的分離較差，而且阿托品峰嚴(yán)重拖尾。本研究采用HPLC法同時(shí)測(cè)定洋金花中東莨菪堿和莨菪堿的含量，為洋金花質(zhì)量控制及利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；ML-800型中藥粉碎機(jī)；SC2201型超聲波處理器；RE52CS-1型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

東莨菪堿標(biāo)品、莨菪堿標(biāo)品（純度≥98%，上海源葉生物科技有限公司）；洋金花（安徽德信佳生物醫(yī)藥有限公司）；除乙腈為色譜純外，其余試劑均為分析純，水為純凈水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱：SGE protecol C18 （5μm，4.6 mm×250 mm），流動(dòng)相為乙腈-30 mmol/L醋酸銨溶液（含0.02%三乙胺、0.3%四氫呋喃，冰醋酸調(diào)pH至6.0）（10∶90，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為216 nm，流速 1.0 mL/min，柱溫 30℃，進(jìn)樣量20μL。

圖1 東莨菪堿和莨菪堿標(biāo)品色譜圖

在上述色譜條件下，東莨菪堿和莨菪堿的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如圖1所示，東莨菪堿的色譜峰保留時(shí)間為21.846 min，莨菪堿的色譜峰保留時(shí)間為33.273 min，東莨菪堿的拖尾因子T=0.659，莨菪堿的拖尾因子T=0.989，兩者峰型良好，分離效果也較好，符合液相色譜分析的要求。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品東莨菪堿9.1 mg和莨菪堿12.1 mg，用流動(dòng)相定容于10 mL容量瓶中，配制成含有0.91 mg/mL東莨菪堿和1.21 mg/mL莨菪堿的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取干燥的洋金花粉末1 g，加氨水潤(rùn)濕，然后按1∶10比例加入二氯甲烷進(jìn)行超聲波提?。üβ?80 W），提取時(shí)間為30 min，過(guò)濾得提取液，減壓回收二氯甲烷，用流動(dòng)相復(fù)溶，過(guò)0.45μm濾膜，即得供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考查

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

以2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液為母液，梯度稀釋后，得到東莨菪堿濃度分別為 910、455、227.5、113.75和56.875 μg/mL，莨菪堿濃度分別為 1210、605、302.5、151.25和75.625μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

依照2.1項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣，以峰面積值Y為縱坐標(biāo)，以各有效成分的濃度值X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得：東莨菪堿的線性回歸方程為：Y=9.4904X-145.83，R=0.9998；莨菪堿的線性回歸方程為：Y=12.407X-298.09，R=0.9998。

2.4.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.4.1項(xiàng)下東莨菪堿為227.5μg/mL、莨菪堿為302.5μg/mL的對(duì)照品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20μL。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.3中供試品溶液，分別在室溫下放置0、2、4、8、16、24 h后，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣20μL。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取5份干燥的洋金花粉末各1.0 g，按2.3制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣20μL。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn)

取6份干燥的洋金花粉末各1.0 g，按2.3制備供試品溶液，測(cè)定每份中東莨菪堿及莨菪堿的含量，然后在各樣品中分別加入一定量的東莨菪堿和莨菪堿標(biāo)品，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，每次進(jìn)樣20μL。

2.5 樣品的測(cè)定

精密吸取2.3項(xiàng)下供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量。

3 結(jié)果與討論

3.1 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

精密度試驗(yàn)中東莨菪堿峰面積的RSD=0.35%，莨菪堿峰面積的RSD=0.51%，精密度良好；穩(wěn)定性試驗(yàn)中東莨菪堿峰面積的RSD=1.56%，莨菪堿峰面積的RSD=1.83%，表明供試品溶液在24 h穩(wěn)定；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中氫溴酸東莨菪堿峰面積的RSD=1.77%，莨菪堿峰面積的RSD=1.81%，重復(fù)性良好。加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 東莨菪堿和莨菪堿的加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2 樣品測(cè)定結(jié)果

由圖2可知，供試品溶液中東莨菪堿與莨菪堿得到較好分離，根據(jù)峰面積值，按外標(biāo)法分別計(jì)算供試品溶液中的東莨菪堿和莨菪堿含量，由線性回歸方程計(jì)算出1.0 g樣品中含東莨菪堿453μg，莨菪堿379μg。

4 結(jié)論

圖2 供試品溶液色譜圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用HPLC法同時(shí)測(cè)定洋金花中東莨菪堿和莨菪堿的含量，目標(biāo)物質(zhì)分離良好，檢測(cè)結(jié)果的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和回收率均符合要求。本方法結(jié)果準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便易行，可以為洋金花的質(zhì)量控制、產(chǎn)品開發(fā)等提供參考。