吳莎莎　何志旭　金皎　黃璟　袁軍

[摘要]目的 了解貴州地區(qū)孕期夫婦及胎兒的地值海貧血基因突變類型，為我省地中海貧血遺傳學(xué)咨詢提供參考資料。方法 收集2012年10月～2014年10月在貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院及貴州省人民醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心行地中海貧血產(chǎn)前診斷的患者資料，通過血常規(guī)及血紅蛋白電泳檢測篩查，再通過反向點(diǎn)雜交（RDB）和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法行地中海貧血的基因分型。結(jié)果 ①82例患者中，共檢出α-地中海貧血26例，占31.7%，檢測出中國人最常見的缺失型α地中海貧血（-SEA、α3.7、α4.2）；β地中海貧血患者56例，占68.3%，檢測出中國人常見的7種基因突變類型，以CD17（A→T）、CD41-42（-TCTT）、IVS-2-654（C→T）最常見。②雙方基因診斷為均攜帶α地中海貧血或攜帶有β地中海貧血的夫妻有51對，采用抽臍血或羊水的方式進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷，產(chǎn)前診斷為輕型地中海貧血的胎兒33例，地中海貧血陰性胎兒10例，中重型地中海貧血胎兒8例。其中，產(chǎn)前診斷檢測出患有重型β-地中海貧血的胎兒5例，1例胎兒為bart′s水腫胎，2例胎兒患有血紅蛋白H病，均采取終止妊娠的措施。結(jié)論 地中海貧血患者的發(fā)生率有較為顯著的差異，但其基因突變率有相似的趨勢，其中，β-地貧基因攜帶者的檢出率明顯要高于α-地貧基因攜帶者；通過產(chǎn)前篩查可以避免重型及中間型地中海貧血患兒的出生。

[關(guān)鍵詞]地中海貧血；基因型；遺傳篩查；產(chǎn)前診斷

[中圖分類號] R725.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）6（a）-0124-03

[Abstract]Objective To understand the types of thalassemia gene mutations in the couples during pregnancy and their fetuses in Guizhou Region and to provide reference data for the genetic consultation of thalassemia in our province.Methods Data were collected on the patients who were given prenatal diagnosis of thalassemia in the Prenatal Diagnosis Center of the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University and Guizhou People′s Hospital from October 2012 to October 2014.Screening was performed by routine blood test and hemoglobin electrophoresis test，and the genotyping of thalassemia was performed by RDB and PCR.Results ①In the data of 82 patients，26 cases of α-thalassemia were detected，accounting for 31.7%.The most common deletion type-α thalassemia in the Chinese people（-SEA，α3.7，α4.2） was detected；56 cases of β-thalassemia were detected，accounting for 68.3%.The seven genetic types of mutations that were common in the Chinese people were detected，with the most common types of CD17（A→T），CD41-42（-TCTT），and IVS-2-654（C→T）.②There were 51 couples who both carried α-thalassemia or β-thalassemia according to the genetic diagnosis.Prenatal genetic diagnosis was carried out by collecting cord blood or amniotic fluid.There were 33 cases of fetuses with prenatal diagnosis of mild thalassaemia，10 cases of fetuses with negative thalassemia，and 8 cases of fetuses with moderate to severe thalassemia.Among them，there were 5 cases of fetuses with severe β-thalassemia according to the prenatal diagnosis.One case of fetus was bart′s edema，and two cases of fetuses had hemoglobin H disease.All of them were given the measures to terminate the pregnancy.Conclusion There is a significant difference in the incidence rate of thalassemia.However，there are similar trends in the rates of gene mutation.Among them，the detection rate of β-thalassemia carriers is significantly higher than that of α-thalassemia carriers；through prenatal screening，the birth of the infants with severe and intermediate thalassaemia can be avoided.

[Key words]Thalassemia；Genotype；Genetic screening；Prenatal diagnosis

地中海貧血是由于珠蛋白肽鏈合成受到部分或完全抑制，造成肽鏈合成不平衡所引起的一組遺傳性溶血性貧血，分為α地中海貧血和β地中海貧血。α和β-地中海貧血是我國南方（廣東、廣西和海南）最常見、發(fā)病率最高、也是危害最大的人類單基因遺傳病之一[1]。貴州省也為地中海貧血高發(fā)地區(qū)之一。目前因?yàn)閷Φ刂泻Ｘ氀匦突颊呷狈μ貏e有效的治療辦法，因此提早檢查出該病攜帶者及對可疑孕婦進(jìn)行產(chǎn)前基因的診斷是防止重型、中間型地中海貧血患兒出生的唯一有效措施，從而可以很大程度提高這一地區(qū)的人口素質(zhì)。廣西、廣東等少數(shù)南方省份的β地中海貧血分子流行病學(xué)特征已有部分報(bào)道[2-3]。貴州省較鄰近省份對本地區(qū)地中海貧血的研究報(bào)道較少，這將不利于在本地區(qū)開展該病的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷工作。為此，對貴州地區(qū)的地中海貧血基因突變頻率進(jìn)行調(diào)查，可以為該省各地有效開展地中海貧血防治工作提供重要的參考依據(jù)。本研究對貴州地區(qū)地中海貧血孕婦進(jìn)行產(chǎn)前基因檢測，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2012年10月～2014年10月在貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院及貴州省人民醫(yī)院行地中海貧血產(chǎn)前診斷的患者，對82例地中海貧血基因檢測陽性者進(jìn)行研究。

1.2研究方法

1.2.1主要儀器、試劑 PCR擴(kuò)增儀為E-Cycler TM 96 PCR，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果用Syngene凝膠成像系統(tǒng)分析，由深圳益生堂生物企業(yè)有限公司提供DNA提取試劑、α-地中海貧血基因分型檢測試劑盒。

1.2.2檢測方法 ①臨床血液學(xué)檢查：血細(xì)胞自動分析儀測定血紅蛋白、平均紅細(xì)胞體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白，平行篩查Hb<110 g/L，MCV<80 fl，MCH<27 pg，如有異常，則疑診為地中海貧血，納入篩查檢查。②血紅蛋白電泳：經(jīng)過檢查，如HbA2值<2.5%時(shí)，高度懷疑為α地中海貧血攜帶者；如HbA2值>3.5%時(shí)，則高度懷疑為β地中海貧血基因攜帶者[4]，需行下一步的基因分析。③DNA提取：采集上述篩查后結(jié)果陽性患者，取其抗凝靜脈血（2～3 ml），再取其高風(fēng)險(xiǎn)胎兒臍帶血（1.5～2.0 ml）或羊水（5～20 ml），采用血液DNA提取試劑盒（深圳益生堂公司提供的全血基因組提取試劑盒和基因診斷試劑盒）提取。擬產(chǎn)前診斷胎兒均在B超引導(dǎo)下經(jīng)腹穿刺抽取臍靜脈血（1.5～2.0 ml）或羊水（5～20 ml）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1地中海貧血的基因診斷

α-地中海貧血26例，占31.7%，β-地中海貧血56例，占86.3%。26例α-地中海貧血中，檢出中國人常見的缺α地中海貧血（-SEA、α3.7、α4.2），所檢出基因類型及構(gòu)成比（表1）。56例β-地中海貧血陽性標(biāo)本中，檢出中國人常見的7種基因突變類型，未檢出基因突變位點(diǎn)的罕見基因類型，基因分析結(jié)果（表2）。

2.2產(chǎn)前診斷情況

對夫妻雙方均為同型地中海貧血攜帶者的51對夫婦抽臍血或羊水進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷，其中在妊娠中期（16～20周）經(jīng)羊膜腔穿刺抽取羊水44例，孕中晚期（18～26周）行經(jīng)腹臍靜脈穿刺術(shù)7例。產(chǎn)前診斷為輕型地中海貧血的胎兒有33例，地中海貧血陰性胎兒10例，中重型地中海貧血胎兒8例，其中產(chǎn)前診斷檢測出重型β-地中海貧血胎兒5例，1例bart′s水腫胎，2例血紅蛋白H病，均采取終止妊娠的干預(yù)措施。比較臍靜脈穿刺、羊膜腔穿刺這兩種方法（χ2=2.573，P=0.393），在地中海貧血的檢出率中這兩種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種產(chǎn)前診斷方法在地中海貧血中的檢測情況（表3）。

3討論

地中海貧血，又稱海洋性貧血，是海南、廣東、廣西省影響最大、發(fā)病率最高的一類疾病，為遺傳性血紅蛋白病。全球大約1.5%的人口為地中海貧血基因攜帶者，且每年有60萬重型地中海貧血患兒出生[5]。在這些地區(qū)的人群中，α型地中海貧血（包括HbH病）大概發(fā)生率為1.2‰～8.1‰，其中α重型地中海貧血發(fā)生率約為0.4‰[6-7]。而Hb Bart′s水腫胎兒常在患兒出生后數(shù)十分鐘內(nèi)死亡或于妊娠晚期死于母腹中。而患β型重型地中海貧血患兒，常依賴頻繁輸血得以生命的維持，對于地中海貧血目前國際國內(nèi)均無有效的治療方法，地中海貧血患兒的出生，尤其是中重型患兒的出生，給社會和家庭均帶來沉重負(fù)擔(dān)。因此，目前只有防止地中海貧血患兒的出生方能有效預(yù)防地中海貧血。目前α地中海貧血基因突變類型已知最少有77種，其中33種為缺失性突變，44種是點(diǎn)缺失[6]。在我國，α地中海貧血常見的主要有3種突變類型基因：一種為突變?nèi)笔б粭l染色體上兩個(gè)α珠蛋白基因，即α0突變；另一種為α+突變，包括-α4.2和-α3.7[8]。本研究中檢測出的26例α地中海貧血患兒以-SEA為主（占53.9%），其次是-α3.7，最后是-α4.2。

β型地中海貧血常是由于β珠蛋白基因點(diǎn)突變從而造成鏈mRNA生成減少，致使合成珠蛋白鏈減少，從而導(dǎo)致HbA全無或明顯缺乏[9-10]。據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，β珠蛋白基因突變類型大概有360種以上，在不同種族、不同地區(qū)人群其基因突變類型各有差異[10]。本研究中56例β型地中海貧血患兒共檢測到β珠蛋白突變位點(diǎn)共7種，其中CD41-42（-TCTT）21例，CD17（A→T）16例，IVS-Ⅱ-654（C→T）13例，-28（A→G）2例，-29（A→G）2例，CD71-72（+A）1例，分別占37.5%、28.6%、23.3%、3.5%、3.5%、1.8%。

目前，我國主要通過CMV來篩查地中海貧血基因攜帶者，但CMV降低，也常見于患缺鐵性貧血患者，其診斷缺乏特異性[4]。有研究表明MCV、MCH靈敏度較高，但是特異性不足，容易出現(xiàn)假陽性[11]。特別是在地中海貧血高發(fā)地區(qū)，采用MCV、MCH兩個(gè)指標(biāo)不能完全排除攜帶地中海貧血基因的風(fēng)險(xiǎn)[12]。雖血紅蛋白電泳檢查在該病診斷中意義相對較大，但對珠蛋白生成障礙性貧血中靜止型患者不能通過血紅蛋白電泳檢查進(jìn)行有效的診斷。目前國際上對地中海貧血基因診斷的有很多種方法[13-15]，PCR結(jié)合反向斑點(diǎn)雜交法和Gap-PCR法這兩種技術(shù)均比較成熟，檢測的特異性強(qiáng)，可在有條件基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。地中海貧血由于其基因譜的復(fù)雜性，使得該病利用傳統(tǒng)基因方法診斷仍可能存在技術(shù)漏檢，因此對于臨床來說，建立一個(gè)更加優(yōu)化、全面的地中海貧血疾病篩查及基因診斷技術(shù)平臺，將大大提高其基因缺陷檢出的水平，對檢出更多的缺陷基因攜帶者有很大的幫助，且可有效指導(dǎo)生育和婚配，從而對控制地中海貧血這一疾病的嬰兒出生缺陷具有重要的指導(dǎo)意義。

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（收稿日期：2018-02-05 本文編輯：崔建中）