王 欣，高聰芬，何翠娟，楊銀娟，黃 儉，李雅珍

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院農(nóng)藥科學(xué)系/農(nóng)業(yè)部作物病蟲害監(jiān)測與防控重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京210095;2.上海農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海201103;3.上海市奉賢區(qū)蔬菜技術(shù)推廣站，上海201499;4.上海市金山區(qū)蔬菜技術(shù)推廣中心，上海201599;5.上海市寶山區(qū)蔬菜科學(xué)技術(shù)推廣站，上海200433)

甜菜夜蛾Spodoptera.exigua Hübner屬鱗翅目，夜蛾科，是一種廣泛性分布的多食性重要農(nóng)業(yè)害蟲，在我國南北各地均有發(fā)生，以幼蟲為害［1，2］。蟲螨腈是由美國氰胺公司上世紀(jì)80年代后期開發(fā)的一種新型殺蟲劑，對(duì)作物安全，有效施用量低。該農(nóng)藥可防治包括鱗翅目、鞘翅目、半翅目和雙翅目在內(nèi)的多種害蟲，還可防治多種害螨 (包括葉螨)，所以它被廣泛使用在蔬菜、水果及作物上［3］。隨著蟲螨腈連續(xù)多年的使用，并且由于其使用范圍比較廣，其抗性的發(fā)展也成為人們逐漸關(guān)注的問題［4－7］。2010年前由于上海地區(qū)大量使用蟲螨腈防治甜菜夜蛾，導(dǎo)致本地區(qū)甜菜夜蛾田間種群對(duì)蟲螨腈的抗藥性顯著升高，田間防效差，因此自2010年之后逐漸停用，取而代之使用氯蟲苯甲酰胺、甲氨基阿維菌素等藥劑。但自2015年起部分地區(qū)在田間使用蟲螨腈時(shí)發(fā)現(xiàn)其田間的防效又可達(dá)90%以上，故為進(jìn)一步摸清上海地區(qū)甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗藥性水平，為蟲螨腈的合理使用和甜菜夜蛾的抗藥性治理提供依據(jù)。本研究通過浸葉法監(jiān)測了上海4個(gè)地區(qū) (崇明、松江、奉賢及浦東新區(qū))甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗藥性并進(jìn)行了蟲螨腈防治甜菜夜蛾的大田藥效試驗(yàn)。在室內(nèi)抗性篩選的基礎(chǔ)上，研究了上海甜菜夜蛾田間種群對(duì)蟲螨腈的抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力。

1 材料與方法

1.1 供試甜菜夜蛾 田間監(jiān)測種群:2016或2017年采自上海崇明、松江、奉賢及浦東新區(qū)，在室內(nèi)用人工飼料飼養(yǎng)至3齡中期時(shí)供測定。

室內(nèi)篩選起始種群:2015年8月采自上海的甜菜夜蛾田間種群在室內(nèi)飼養(yǎng)9代后，采用人工飼料感染法在室內(nèi)用蟲螨腈對(duì)其進(jìn)行抗性篩選。

1.2 供試藥劑 94.5%蟲螨腈原藥，由巴斯夫歐洲公司提供;10%蟲螨腈懸浮劑，巴斯夫歐洲公司生產(chǎn)，市售

1.3 室內(nèi)毒力測定 采用中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺蟲劑第14部分:浸葉法》［8］進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，根據(jù)藥劑的作用特點(diǎn)，蟲螨腈處理48 h后檢查死蟲數(shù)，計(jì)算死亡率。

1.4 田間藥效試驗(yàn) 按照農(nóng)藥田間試驗(yàn)準(zhǔn)則(GB/T17980.13－2000)進(jìn)行田間試驗(yàn)。試驗(yàn)作物為甘藍(lán)，制劑用量為50g/667m2，以低齡幼蟲為主時(shí)進(jìn)行噴霧防治，采用定點(diǎn)定株法，施藥前調(diào)查蟲口基數(shù)，施藥后3 d和7 d查殘蟲數(shù)。

1.5 抗性篩選方法 甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗性篩選采用人工飼料感染法，以初孵幼蟲測定的LC50值為參考，設(shè)定一定的篩選濃度，該濃度使甜菜夜蛾初孵幼蟲48h后的死亡率保持在60%～70%左右。每個(gè)指形管內(nèi)置混藥飼料接初孵幼蟲5～8頭，每代的篩選量為800～1 000頭左右 (根據(jù)蟲量情況而定)。48h后將存活幼蟲挑出轉(zhuǎn)入到裝有正常人工飼料的試管內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng)，直到化蛹。

1.6 抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 根據(jù)閾值分析法［9］，抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力 (h2)可用公式h2=R/S計(jì)算:

式 (1)中R為選擇反應(yīng)(response to selection)，終LC50值為篩選n代后下一代的LC50值，始LC50值為篩選前親代的LC50值;

式 (2)中σp為表現(xiàn)型標(biāo)準(zhǔn)差 (phenotypic standard deviation)，是由篩選各代毒力回歸線的斜率值bi求得。

式 (3)中S為選擇差異 (selection differential)，i為選擇強(qiáng)度 (intensity of selection)，i可根據(jù)公式i﹦1.583–0.019 333 6P+0.000 042 8P2+3.651 94/P(10＜P＜80)(P=100－平均校正死亡率)計(jì)算求得。

2 結(jié)果與分析

2.1 甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗藥性 用浸葉法監(jiān)測了上海崇明、松江、奉賢及浦東新區(qū)4個(gè)地區(qū)甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗藥性，結(jié)果表明:各種群對(duì)蟲螨腈的抗性倍數(shù)為0.9～5.2，處于敏感至低水平抗性 (表1)。

表1 甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗藥性監(jiān)測

防治甜菜夜蛾田間效果表明 (表2)，蟲螨腈對(duì)甜菜夜蛾具有良好的防治效果，2016年(2017年)藥后3d的防效為80.1% ～100.0%(85.4% ～94.3%)，藥后7d的防效為89.9% ～100.0%(90.2% ～95.3%)。

2.2 甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗性篩選 2015年8月采自上海的甜菜夜蛾田間種群在室內(nèi)飼養(yǎng)9代后，用蟲螨腈在室內(nèi)連續(xù)篩選10代。在開始篩選的前4代，抗性水平呈下降趨勢，F(xiàn)5代后抗性水平開始上升，至F8代時(shí)抗性倍數(shù)上升0.4倍，但由于F9代測定時(shí)天氣突然變冷，并且有一部分感染病毒，導(dǎo)致活力下降，試蟲受藥劑影響的敏感性上升，抗性水平又有所回落。LC50值由篩選前的18.823 mg/L下降到篩選后的12.965 mg/L，篩選后抗性下降了30%，與敏感種群相比的抗性倍數(shù)為2.1倍，為敏感性水平(表3)。

表2 蟲螨腈防治甜菜夜蛾的田間試驗(yàn)結(jié)果

表3 上海甜菜夜蛾種群對(duì)蟲螨腈的室內(nèi)抗性篩選

2.3 甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力估算 經(jīng)過連續(xù)10代的抗性篩選，甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力 (h2)為－0.041 4。由此推斷連續(xù)篩選或田間連續(xù)幾代用蟲螨腈防治甜菜夜蛾，蟲螨腈抗性發(fā)展緩慢，甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈具有較低的抗性風(fēng)險(xiǎn) (表4)。

表4 甜菜夜蛾室內(nèi)篩選種群對(duì)蟲螨腈的現(xiàn)實(shí)遺傳力估算

3 討論

從室內(nèi)抗藥性監(jiān)測結(jié)果看，各監(jiān)測地區(qū)甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈的抗性倍數(shù)為0.9～5.2，處于敏感至低水平抗性。在田間推薦用藥量50 g/667m2下，藥后7d的防效也達(dá)到85%以上。其原因可能為近8年來上海市幾乎停用蟲螨腈防治甜菜夜蛾，使得甜菜夜蛾田間種群對(duì)蟲螨腈的抗性下降所致。

從室內(nèi)抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果來看，上海甜菜夜蛾種群對(duì)蟲螨腈的抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力為－0.041 4，由此可見，甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈具有較低的抗性風(fēng)險(xiǎn)，這與張文成研究結(jié)果一致［3］。綜合以上結(jié)果可知，蟲螨腈目前可作為上海地區(qū)防治甜菜夜蛾的優(yōu)選藥劑之一。

抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一般用于特定環(huán)境中藥劑使用后出現(xiàn)抗性可能性的預(yù)測，就是害蟲對(duì)某一殺蟲劑的產(chǎn)生抗性的能力作評(píng)估［11］。室內(nèi)抗性篩選的結(jié)果用來評(píng)價(jià)田間的抗性風(fēng)險(xiǎn)具有一定局限性。一方面，為使篩選能夠進(jìn)行，室內(nèi)篩選死亡率一般控制較低，并且室內(nèi)僅限于3齡幼蟲，每代次僅被篩選1次。而田間防效一般在90%左右，并且種群被施藥時(shí)齡期并不一致，且被受藥的次數(shù)因防效影響可能會(huì)增加，因此田間的h2可能更大［12］。另一方面，由于室內(nèi)溫度、濕度及光照周期等是相對(duì)穩(wěn)定和可控的，而田間環(huán)境具有多樣性，所以室內(nèi)的遺傳方差和環(huán)境方差相對(duì)田間的較小。同時(shí)，由于田間條件下敏感個(gè)體的遷入和抗性個(gè)體的遷出以及環(huán)境和選擇壓力、交替或輪換用藥、基因突變等因素的影響，表現(xiàn)型變異的遺傳方差和環(huán)境方差波動(dòng)較大。因此，室內(nèi)估算的h2值會(huì)偏高［13，14］。雖然室內(nèi)研究結(jié)果不能直接用于田間，但此結(jié)果可以預(yù)示甜菜夜蛾對(duì)蟲螨腈抗性發(fā)展的趨勢，仍可作為田間防治的參考。