錢龍梁，薛 源，李 檸，李 強，曹福亮，2* ，汪貴斌，2

嫁接是無性繁殖的一種方式，是將接穗通過某種方法嫁接到砧木上，通過砧木和接穗的親和力來形成愈傷組織從而達(dá)到成活，產(chǎn)生嫁接苗木。因嫁接能保持和發(fā)展優(yōu)良種性，實現(xiàn)早期豐產(chǎn)，促使樹木矮化，能充分利用野生樹種資源，能對現(xiàn)有的樹種改良換優(yōu)、提高樹種的適應(yīng)性，因此無性繁殖是商業(yè)種植極有效的方法之一。人們利用接穗、環(huán)境條件對砧木的影響，來選育合適的繁殖材料。前人研究認(rèn)為，砧木是原始繁殖材料極其重要的一部分，砧木影響嫁接成活、接穗后期的生長發(fā)育［1-4］、營養(yǎng)吸收［5-6］、光合［7-9］、抗性［10-13］，與此同時也對苗木產(chǎn)量和品質(zhì)等產(chǎn)生一定的影響。葉用林的大面積種植中更多采用播種繁殖，而嫁接繁殖現(xiàn)象尚未引起人們的足夠重視［14］，另外在嫁接時候，人們更多考慮砧木對嫁接成活的影響，而對于接穗、環(huán)境條件及二者互相影響對嫁接成活的影響關(guān)注度不多。環(huán)境條件與接穗相互作用是嫁接成活中的一個潛在的問題。因此，本研究采用4個品種接穗嫁接在南方3個地方來研究接穗品種、環(huán)境條件以及二者共同作用對銀杏嫁接成活和接穗后期生長的影響，以期篩選合適的接穗生長在合適的地方，為銀杏果葉兼用林大面積種植提供繁殖材料。

1 研究區(qū)概況

試驗地3個地點分別是廣東省云浮市前鋒鎮(zhèn)菜坑村、四川省達(dá)州市開江縣和云南省曲靖市沾益縣。前鋒鎮(zhèn)位于云浮市城區(qū)南面(112°05'E，22°49'N)，海拔754 m，屬南亞熱帶季風(fēng)氣候。累年平均氣溫21.3℃，降水量1 850 mm，霜日7 d。開江縣域介于107°42'－108°05'E、30°47'－31°15'N，平均海拔 700 m，屬于中亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候區(qū)，氣候溫和，熱量充足，四季分明，雨量豐沛，季風(fēng)氣候明顯，立體氣候突出，年均溫16.6℃，年降水 1 259.2 mm，年日照1 386.6 h，無霜期長達(dá) 282.6 d。云南省曲靖市沾益區(qū)沾益縣(103°58'E，25°52'N)，海拔 2 100 m，全年氣候溫和，降水充沛，干濕季分明，屬低緯度高原季風(fēng)氣候。年平均氣溫16.3～18.6℃，極端最高溫33.1℃，極端最低溫－9.2℃，年日照時數(shù) 2 098 h，日照率47%，全年無霜期 255 d左右，年均降雨量1 002 mm，5－10月降水量占全年降水的89%。

2 材料與方法

2.1 試驗設(shè)計

2017年3月18日，從江蘇省邳州市陳樓鎮(zhèn)銀杏種質(zhì)資源圃選取4個品種的接穗，分別是古銀杏(葉豐)、泰興大佛指、27#(南京林業(yè)大學(xué)一品種)、57#(大花穗)，每個試驗點都嫁接4個品種的接穗，同一個試驗地點的砧木都是相同品種的3年生實生苗，每個品種的接穗都采自同一樹齡的銀杏樹上，3個試驗點均由同一嫁接員采用劈接方法進(jìn)行嫁接，由于3個地點距離較遠(yuǎn)，故嫁接時間前后相差1～2 d，且同一品種的接穗長短、粗細(xì)基本一致，接穗長15 cm，直徑為5 mm，所有接穗均是雙芽。由于接穗數(shù)量有限，故在廣東嫁接古銀杏60株、泰興大佛指90株、27#和57#各120株;在云南嫁接古銀杏30株、泰興大佛指60株、27#和57#各120株;在四川嫁接古銀杏30株、泰興大佛指60株、27#和57#各120株。每個試驗點的每個品種均有3個重復(fù)，采用隨機區(qū)組試驗設(shè)計，嫁接后3個地方的水肥管理均按照嫁接員提供的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行實施。

2.2 指標(biāo)測定及方法

2.2.1 生長指標(biāo)測定 2017年5月份分別統(tǒng)計3個地方的嫁接存活率，8月和9月初分別測定在與砧木接合點上方10 cm處有效芽抽出來的接穗一級分枝的基徑D、新枝長H。并從測量的接穗一級分枝的上、中、下3個部位采取3～5葉，所有葉樣均采用干冰保存帶回后放入－193℃的超低溫冰箱保存，用于后期測可溶性糖和蛋白。

2.2.2 可容性蛋白質(zhì)測定 采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測定［15］。稱取鮮葉樣0.5 g，用 5 mL蒸餾水或者緩沖液研磨成勻漿后，10 000 r·min－1離心10 min，上清液即為粗酶提取液。吸取樣品1 mL(視蛋白質(zhì)含量適當(dāng)稀釋)，放入試管中(設(shè)3個重復(fù)管)，加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，充分混合，放置2 min后在595 nm下比色，記錄吸光度值，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得蛋白質(zhì)含量。帶入公式計算:

式中，C為查標(biāo)準(zhǔn)曲線值(μg·mL－1);VT為提取液總量(mL);WF為樣品鮮重(g);V為測定時加樣量(mL)。

2.3.3 可溶性糖的測定 采用蒽酮比色法測定［15］。采取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.10～0.30 g，共3 份，或干材料。分別放入3 支刻度試管中，加入5～10 mL蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min(提取2次)，提取液過濾入25 mL容量瓶中，反復(fù)漂洗試管及殘渣，定容至刻度。吸取樣品提取液0.5 mL于20 mL刻度試管中(重復(fù)3次)，加蒸餾水 1.5 mL，再向試管中加入 0.5 mL 蒽酮乙酸乙酯試劑和5 mL濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管均準(zhǔn)確保溫1 min，取出后自然冷卻至室溫，在630 nm波長下測其吸光度值，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得可溶性糖含量。帶入公式計算:

2.3 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，用SPSS 19.0軟件中Duncan法對差異顯著指標(biāo)進(jìn)行方差分析［16］。

3 結(jié)果與分析

3.1 接穗、試驗地點對嫁接存活的影響

同一品種在不同地方嫁接成活率差異顯著，而同一地點不同品種間差異不顯著?？傮w表現(xiàn)為4種接穗在四川的嫁接存活率最高(表1)，其中泰興大佛指、57#、27#在云南嫁接存活率均高達(dá)90%多，這3個品種在廣東接穗嫁接存活率均不高，分別為69.0%、59.7%、38.7%，古銀杏在云南的嫁接存活率為76.0%;四川為 85.0%;廣東最低為 44.7%，另外古銀杏、27#這2個品種接穗在云南、四川的嫁接存活率均超過50%，而在廣東嫁接存活率均不超過50%。4種接穗在云南、四川嫁接存活率幾乎一致，而在廣東則差距很大，這可能與廣東氣候、地理條件及砧木情況有關(guān)。

3.2 接穗、試驗地點對接穗一級分枝的影響

不同品種嫁接在同一地方接穗一級分枝的基莖在8月表現(xiàn)為品種間差異不顯著，新枝長在廣東、四川均表現(xiàn)為品種間差異不顯著，在云南，泰興大佛指、27#、57#間未出現(xiàn)顯著性差異，27#、57#均與古銀杏差異顯著，大佛指與古銀杏間差異不顯著。而9月則表現(xiàn)為，新枝長在云南、四川品種間差異不顯著，在廣東，泰興大佛指與古銀杏差異顯著，與其他2個品種差異不顯著，古銀杏、27#、57#這3個品種均未出現(xiàn)顯著差異。在廣東、四川嫁接后的4個品種間的基莖均未出現(xiàn)顯著性差異，而在云南，古銀杏、27#、57#這3個品種間的基莖無顯著差異，古銀杏與大佛指的基莖出現(xiàn)顯著差異，而27#、57#均與泰興大佛指的基莖差異不顯著(表2)。

表1 不同接穗、地方對銀杏嫁接存活率的影響Table 1 Survival rates of 4 Ginkgo varieties in 3 sites %

3.3 接穗、試驗地點對可溶性糖含量的影響

不同品種接穗嫁接在同一個地方對銀杏中可溶性糖含量的影響表現(xiàn)出顯著性差異。8月4種接穗在云南嫁接后表現(xiàn)為:27#、泰興大佛指均與古銀杏、57#呈顯著差異，兩者之間未出現(xiàn)顯著性差異，其中含量最高的是27#，為4.31%，含量最低的是古銀杏為2.70%。在廣東表現(xiàn)為:27#與其他3個品種的均呈顯著差異，古銀杏、泰興大佛指、57#三者之間無明顯差異，在該試驗點可溶性糖含量最高是27#為5.82%，含量最低的是57#為3.49%。在四川則表現(xiàn)為:57#與古銀杏、泰興大佛指呈顯著差異，與27#無明顯差異，27#與泰興大佛指無明顯差異，與古銀杏出現(xiàn)顯著性差異，泰興大佛指與古銀杏呈顯著性差異。9月4種接穗在云南嫁接后表現(xiàn)為:27#、57#兩者間無明顯差異，但均與古銀杏、泰興大佛指呈顯著差異，古銀杏與泰興大佛指也呈顯著差異。在廣東地區(qū)四者之間均未出現(xiàn)顯著性差異。在四川則表現(xiàn)為:57#與其他3個品種均呈顯著性差異，古銀杏、泰興大佛指、27#三者之間無明顯差異(表3)。

3.4 接穗、試驗地點對可溶性蛋白含量的影響

不同品種接穗嫁接在同一個地方對銀杏中可溶性蛋白含量的影響表現(xiàn)出顯著性差異。8月4種接穗在四川嫁接后表現(xiàn)為:57#、泰興大佛指、古銀杏均與27#呈顯著差異，但三者之間未出現(xiàn)顯著性差異，其中含量最高的是古銀杏為1.27 mg·g－1;含量最低的是 27#為 0.73 mg·g－1。在云南表現(xiàn)為:27#、泰興大佛指、古銀杏3個品種的均未出現(xiàn)顯著性差異，其中古銀杏、泰興大佛指與57#均出現(xiàn)顯著差異，但27#與57#兩者間未出現(xiàn)顯著性差異?？扇苄缘鞍缀孔罡叩氖枪陪y杏為0.86 mg·g－1，最低的是 57#為 0.37 mg·g－1。在廣東則表現(xiàn)為:古銀杏、泰興大佛指、57#三者間未呈顯著差異，泰興大佛指、57#均與27#無明顯差異，27#與古銀杏出現(xiàn)顯著性差異，其中含量最高的是古銀杏為1.59 mg·g－1，最低的是27#為1.01 mg·g－1。9 月4 種接穗在云南嫁接后銀杏中可溶性蛋白含量均為出現(xiàn)顯著性差異，4個品種的可溶性蛋白的含量幾乎接近。在四川地區(qū)古銀杏、27#、57#三者之間均未出現(xiàn)顯著性差異，但都與泰興大佛指之間呈顯著差異。可溶性蛋白含量最高的是古銀杏為 0.97 mg·g－1，最低的是 27#為 0.74 mg·g－1。在廣東則表現(xiàn)為:27#、57#與其他 2 個品種均呈顯著性差異，且27#與57#之間呈顯著差異，古銀杏、泰興大佛指二者之間無明顯差異(表4)。

表2 不同品種嫁接在同一地方對接穗一級分枝的影響Table 2 Impact of the site on the growth of primary shoot cm

表3 不同品種嫁接在同一地方對銀杏中可溶性糖含量的影響Table 3 Impacts of variety on the soluble sugar content

表4 不同品種嫁接在同一地方對銀杏中可溶性蛋白含量的影響Table 4 Impacts of variety on the soluble protein content

4 結(jié)論與討論

相同品種接穗在不同地方嫁接后對銀杏接穗的一級分枝的新枝長、基莖影響很大，相同地方不同品種接穗間差異也很大。合適的接穗嫁接在合適的地點對嫁接成活以及后期苗木生長十分重要。

此外，環(huán)境條件差(雨水、雜草過多，土壤輕度板結(jié))的地方嫁接成活后的銀杏中可溶性蛋白含量高，但其可溶性糖的含量則相對于環(huán)境條件好(雨水適中，沙壤土)的地方有所降低?？扇苄缘鞍椎暮恐苯佑绊懼参飳χ亟饘傥廴镜牡挚鼓芰Γ扇苄蕴堑暮繉χ参锬芰康男枨蠛痛x中間體方面有著直接影響，對苗木結(jié)構(gòu)發(fā)育也有著不同程度的間接影響。