范文成 王 棚 馮 霞 劉旭明艷 何小艷 陳素瓊

血站實(shí)驗(yàn)室對于不同血液檢測設(shè)備性能進(jìn)行對比是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與控制的基本要求。我國《血站技術(shù)操作規(guī)程(2015年版)》[1]及《美國實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)法案修正案》[2]均明確規(guī)定:在血站實(shí)驗(yàn)室使用多臺儀器對同個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行檢測前，需對儀器分析性能進(jìn)行確認(rèn)比較，以確保不同檢測設(shè)備檢測結(jié)果的可比性與溯源性。對于新購入的儀器設(shè)備應(yīng)根據(jù)其分析類型，確定性能參數(shù)后與原有儀器性能進(jìn)行對比分析。國外要求對血液檢測設(shè)備性能檢測每半年進(jìn)行一次，國內(nèi)則要求一年一次[3-5]。本研究遵循上述要求，對綿陽市紅十字中心血站實(shí)驗(yàn)室的全自動(dòng)酶免分析儀及全自動(dòng)生化儀檢測設(shè)備進(jìn)行對比，旨在為血站血液檢測設(shè)備性能對比提供參考。

1 材料與方法

1.1 FAME全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)比對試驗(yàn)

1.1.1 儀器設(shè)備

Xantus150型全自動(dòng)加樣儀(深圳愛康)；2臺全自動(dòng)酶免分析后處理系統(tǒng)(FAME1620簡稱FAME1、FAME2420，簡稱FAME2，瑞士HAMILTON)。

1.1.2 試劑

(1)HBsAg ELISA試劑:①試劑1，北京萬泰，批號為B20160408，質(zhì)控品為0.2 IU/ml，北京康徹斯坦，批號為201610025；②試劑2，BIO，批號為6B0209，質(zhì)控品為0.1 IU/ml，北京康徹斯坦，批號為201612009。

(2)抗-HCV ELISA試劑:①試劑1，北京萬泰，批號為CS20160302，質(zhì)控品為0.05 NCU/ml，北京康徹斯坦，批號為201601103；②試劑2，Murex，批號為V929020，質(zhì)控品為2 NCU/ml，北京康徹斯坦，批號為201612021。

(3)抗-TP ELISA試劑:①試劑1，北京萬泰，批號為N20160311，質(zhì)控品為6 mIU/ml，北京康徹斯坦，批號為201612016；②試劑2，珠海麗珠，批號為2016040508，質(zhì)控品為6 mIU/ml，北京康徹斯坦，批號為201611017。

(4)抗-HIV ELISA試劑:①試劑1，北京萬泰，批號為H20160101，質(zhì)控品為0.5 NCU/ml，北京康徹斯坦，批號為201511025；②試劑2，BIO，批號為6B0351，質(zhì)控品為4 NCU/ml，北京康徹斯坦，批號為201511013。

1.1.3 試驗(yàn)標(biāo)本

室內(nèi)質(zhì)控22份，2015年室間質(zhì)評標(biāo)本16份，獻(xiàn)血者血液標(biāo)本50份。

1.1.4 試驗(yàn)方法

參照試劑說明書及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，采用同一臺全自動(dòng)加樣儀(Xantus 150)加樣，分別用2臺FAME、8種ELISA試劑檢測同樣的標(biāo)本88份，其中包括室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本22份，2015年室間質(zhì)評標(biāo)本16份，獻(xiàn)血者標(biāo)本50份。計(jì)算22份室內(nèi)質(zhì)控的均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)。室間質(zhì)評和獻(xiàn)血者標(biāo)本結(jié)果應(yīng)用Kappa檢驗(yàn)，比較2臺全自動(dòng)酶免分析后處理系統(tǒng)檢測結(jié)果的一致性。

1.2 全自動(dòng)生化分析儀比對試驗(yàn)

1.2.1 儀器與試劑

(1)儀器設(shè)備。C311全自動(dòng)生化分析儀(德國羅氏)；B-480全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞)。

(2)ALT測定試劑盒(批號621149)及其質(zhì)控(低值質(zhì)控品批號、高值質(zhì)控品批號174794)(德國羅氏診斷有限公司)。

1.2.2 試驗(yàn)標(biāo)本

低值和高值室內(nèi)質(zhì)控品以及24份獻(xiàn)血者血液標(biāo)本。

1.2.3 試驗(yàn)方法

(1)選用ALT低值和高值質(zhì)控進(jìn)行常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控檢測，計(jì)算6個(gè)月的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，計(jì)算比對方差，確定檢測系統(tǒng)的不精密度，驗(yàn)證兩套全自動(dòng)生化分析儀的可比性[7]。

(2)常規(guī)使用羅氏C311檢測，每周使用邁瑞B(yǎng)-480檢測1次，檢測標(biāo)本8個(gè)，分析連續(xù)3周24個(gè)標(biāo)本的檢測結(jié)果，采用回歸分析2臺全自動(dòng)生化分析儀的檢測結(jié)果。

1.2.4 質(zhì)控方法

實(shí)驗(yàn)室室溫控制在18～25 ℃，濕度30%～70%，所有試劑在使用前均經(jīng)過30 min的平衡；抽取血液標(biāo)本后采用EDTA-K2進(jìn)行抗凝處理，以3000 r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心15 min。設(shè)備均在校準(zhǔn)期內(nèi)，且運(yùn)行無異常。

2 結(jié)果

2.1 全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)檢測性能比對

(1)2臺全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)檢測室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果。2臺全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)使用8種ELISA試劑檢測室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本22份，2臺儀器批內(nèi)CV值均在15%以內(nèi)，其各試劑檢測值均無顯著性差異，見表1。

(2)選取無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本50份、室間質(zhì)量評價(jià)標(biāo)本16份，使用2臺FAME全自動(dòng)酶免分析后系統(tǒng)檢測結(jié)果對比，2臺儀器檢測結(jié)果均一致，見表2。

2.2 全自動(dòng)生化分析儀比對

2.2.1 質(zhì)控品檢測結(jié)果可比性分析

(1)收集2臺儀器近6個(gè)月的質(zhì)控品檢測數(shù)據(jù)，計(jì)算出m總和CV合并，分析不精密度，見表3。

表1 兩臺全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)8種ELISA試劑檢測22份室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果

表2 兩臺全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)檢測獻(xiàn)血者血液標(biāo)本以及室間質(zhì)量評價(jià)標(biāo)本比較

表5 兩臺全自動(dòng)生化分析儀樣本檢測結(jié)果分析

表3 兩臺全自動(dòng)生化分析儀不精密度分析

(2)以每個(gè)質(zhì)控品濃度水平的總均值m總×(1+20%)作為樣品濃度的選擇范圍，得到低值質(zhì)控濃度范圍為39.3～59.0 U/L，高值質(zhì)控濃度范圍為99.6～149.3 U/L。依照醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)定量檢驗(yàn)結(jié)果的可比性驗(yàn)證指南[8]確定低值質(zhì)控、高值質(zhì)控檢測重復(fù)次數(shù)各為3次，見表4。

表4 兩臺全自動(dòng)生化分析儀樣本檢測結(jié)果

(3)根據(jù)低值、高值質(zhì)控均值得出極差和比對偏差，ALT的個(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異為18%，故實(shí)驗(yàn)室將CV1的1/3，即6%作為分析質(zhì)量要求，小于分析質(zhì)量要求，結(jié)論為通過，見表5[9]。

通過計(jì)算，兩個(gè)濃度樣本的比對偏差分別為2.4%和1.74%，均在6%以內(nèi)，故認(rèn)為2臺設(shè)備檢測結(jié)果符合檢測系統(tǒng)要求。

2.2.2 獻(xiàn)血者血液標(biāo)本檢測結(jié)果對比

每周同時(shí)使用2臺全自動(dòng)生化分析儀檢測8個(gè)標(biāo)本，連續(xù)3周共24個(gè)標(biāo)本的檢測結(jié)果，分析2臺設(shè)備的一致性，見表6。

以羅氏C311檢測結(jié)果為y，邁瑞B(yǎng)480檢測結(jié)果為x，做線性回歸計(jì)算，得出回歸方程 ，如圖1所示。

圖1 兩臺全自動(dòng)生化分析儀檢測24份獻(xiàn)血者ALT結(jié)果的回歸線性圖

3 討論

目前，全國大部分的血站實(shí)驗(yàn)室仍使用多套設(shè)備對輸血相關(guān)傳染病血清學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行檢測，且不同設(shè)備間?；閭溆肹10]。血站實(shí)驗(yàn)室工作強(qiáng)度大，設(shè)備長時(shí)間的運(yùn)行其各部件老化程度不同，設(shè)備之間可能會(huì)出現(xiàn)差別，而導(dǎo)致不同設(shè)備之間檢測一致性不高，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[11]。因此，在校準(zhǔn)周期內(nèi)對設(shè)備性能進(jìn)行確認(rèn)，同時(shí)進(jìn)行設(shè)備間性能對比是血站血液檢測質(zhì)量管理的重點(diǎn)。保證并保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測作用相同的自動(dòng)化設(shè)備性能的一致，是提高血液檢測實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量的重要手段。

表6 兩臺全自動(dòng)生化分析儀檢測24份獻(xiàn)血者標(biāo)本的結(jié)果

根據(jù)上述質(zhì)控要求結(jié)合自身情況，本研究對2臺全自動(dòng)酶免分析后處理系統(tǒng)與2臺全自動(dòng)生化分析儀設(shè)計(jì)了定性與定量對比分析。設(shè)備性能是否一致主要通過檢測結(jié)果的一致性分析結(jié)果來體現(xiàn)，檢測結(jié)果的一致性主要受檢測設(shè)備、試劑、質(zhì)控品、試驗(yàn)標(biāo)本等的影響。全自動(dòng)酶免分析后處理系統(tǒng)性能對比，選取室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本22份，結(jié)果顯示:2臺設(shè)備用室內(nèi)質(zhì)控做重復(fù)性檢測，均值接近，批內(nèi)變異系數(shù)均在15%以內(nèi)，經(jīng)x2檢驗(yàn)，8種ELISA試劑的t值分別為:1.746、-1.903、2.113、0.816、2.273、-2.538、1.793以及1.442，P值均＞0.05，2臺FAME檢測的精密度好。16份已知檢測結(jié)果的室間質(zhì)評標(biāo)本，正確率均100%，做常規(guī)已知獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的檢測時(shí)，2臺FAME的檢測結(jié)果一致，表明2臺設(shè)備用同一試劑的檢測性能一致。對于全自動(dòng)生化分析儀選擇6個(gè)月以上的室內(nèi)質(zhì)控品檢測結(jié)果對不精密度和檢測均值進(jìn)行分析，結(jié)果分別為2.4%和1.74%，均低于分析質(zhì)量要求(6%)，2臺全自動(dòng)生化分析儀均通過，24份獻(xiàn)血者標(biāo)本在2臺全自動(dòng)生化分析儀上的檢測結(jié)果經(jīng)回歸分析，兩者一致性為優(yōu)，可以認(rèn)為2臺全自動(dòng)生化分析儀檢測ALT的結(jié)果符合檢測系統(tǒng)要求。

血站血液檢測設(shè)備性能對比應(yīng)注意的問題:①設(shè)備應(yīng)處于校準(zhǔn)期內(nèi)且可正常運(yùn)行，試驗(yàn)過程中需要使用的器具應(yīng)保持清潔；②有適宜的質(zhì)控品。本研究所涉及的設(shè)備各2臺，故采用室間質(zhì)評標(biāo)本，若設(shè)備較多標(biāo)本量不夠時(shí)可選擇血清盤標(biāo)本作為質(zhì)控品[12]。

4 結(jié)語

設(shè)備間性能對比是一項(xiàng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ?，在試?yàn)方案設(shè)計(jì)、結(jié)果判斷及結(jié)論定論方面均需要有足夠的理論依據(jù)與數(shù)據(jù)支撐。通過對全自動(dòng)檢測設(shè)備性能對比，可有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，維護(hù)獻(xiàn)血者利益，保證患者用血安全，同時(shí)也為實(shí)驗(yàn)室間檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)提供了可靠依據(jù)[13]。然而，本次開展的設(shè)備間性能比對研究還有許多需要完善的地方。