郭英 王斌 楊起東 司馬義江·阿布都熱西提

【摘 要】 目的：建立HPLC-DAD測定西帕依麥孜彼子口服液中梔子苷含量的方法。方法：采用Sepax HP-C18色譜柱，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液，流速1.0mL/min，DAD檢測器，檢測波長238nm，進樣體積10μL。結(jié)果：梔子苷在2.26～56.60μg/mL（r=0.99999）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；精密度的RSD為0.11%，重復(fù)性試驗的RSD為0.30%，穩(wěn)定性試驗的RSD為1.14%，平均回收率為98.21%（RSD為1.12%，n=9）。結(jié)論：該方法簡便、靈敏、重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法；西帕依麥孜彼子口服液；梔子苷；含量測定

【中圖分類號】R284.2 【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2018）15-0027-03

Abstract：Objective To establish an method for content determination of geniposide in Xipayimaizibizi Oral Liquid. Method The HPLC method was adopted on the column of Sepax HP-C18 column with mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric（14∶86）at a flow rate of 1.0m L/min， the detection wavelength was 238nm，the column temperature was 30℃，the injection volume was 10μL.Results The linear range was 2.26～56.60μg/mL for geniposide（r=0.99999）.The average recoveries were 98.21%（RSD=1.12%，n=9）.The content RSD of the precision was 0.11%.The content RSD of reproducibility was 0.30%. The content RSD of stability was 1.14%.Conclusion The method is easy to operate，accurate，sensitive and reproducible for the content determination of geniposide in Xipayimaizibizi oral liquid.

Keywords：HPLC；Xipayimaizibizi Oral Liquid；Geniposide；Content Determination

西帕依麥孜彼子口服液，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（維吾爾藥分冊），標(biāo)準(zhǔn)編號：WS3-BW-0122-98，具有增強機體營養(yǎng)力、攝住力及排泄力，清濁利尿的功效[1]。用于前列腺炎和前列腺增生所致小便頻數(shù)、余瀝不盡、腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦?、寐差耳鳴、早泄夢遺等。西帕依麥孜彼子口服液為傳統(tǒng)維藥合劑，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)過于落后，僅有鑒別項和檢查項，未確定主要成分含量測定指標(biāo)，難以保證制劑質(zhì)量的均一、穩(wěn)定。本研究參照相關(guān)文獻[2-6]，首次采用高效液相色譜法[7-11]（HPLC法），對西帕依麥孜彼子口服液中梔子苷的含量進行了測定，為維藥西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

島津LC-2030C 3D高效液相色譜儀（島津公司）；Sepax HP-C18（250mm×4.6mm，5μm；填料：十八烷基硅烷鍵合硅膠）。

西帕依麥孜彼子口服液，規(guī)格：10mL，批號：170328、160838、160439，由新疆齊康哈博維藥股份有限公司生產(chǎn)。對照品梔子苷（批號110749-201316，含量97.5%，中國食品藥品檢定研究院），乙腈為色譜純，供貨商：賽默飛世爾科技（中國）有限公司，水為超純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Sepax HP-C18；流動相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；流速：1mL·min-1 檢測波長：238nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品儲備液：精密稱取梔子苷對照品11.32mg，置100mL量瓶中，加甲醇適量，超聲至充分溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，制成含梔子苷0.1132mg·mL-1）的對照品儲備液。

2.2.2 對照品溶液：精密量取梔子苷對照品儲備液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得梔子苷的質(zhì)量濃度為22.64μg/mL的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液：精密量取西帕依麥孜彼子口服液0.5mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 空白溶液：取制備供試品溶液的溶劑，同供試品溶液步驟方法制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察 專屬性實驗：精密吸取2.2項下的空白溶液、對照品溶液、供試品溶液各10μL，按上述色譜條件測定，記錄HPLC圖譜如圖1所示。

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.2.1項下梔子苷對照品儲備液各1.0、2.0、5.0、10.0、25.0mL，分別置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制得梔子苷濃度分別為2.26、4.53、11.32、22.64、56.60μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。按擬定色譜條件進行測定，計算峰面積積分值。以梔子苷質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程，梔子苷為Y=14199.00X-855.28，r=0.99999（n=5）。結(jié)果表明，梔子苷質(zhì)量濃度在2.26～56.60μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取2.2.2項下對照品溶液，按擬定色譜條件進行測定，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為0.11%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取2.2.3項下的同一供試品（批號為160838）溶液，置室溫下，分別于0、2、4、8、12、24h按擬定色譜條件進行測定，記錄峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為1.14%（n=6），表明供試品溶液在室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取西帕依麥孜彼子口服液（批號為160838），按供試品溶液制備項下的方法制備6份供試品溶液，按擬定色譜條件進行測定，記錄梔子苷峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為0.30%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。結(jié)果見表1。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的西帕依麥孜彼子口服液（批號為160838）0.25mL 9份，置25mL量瓶中，分別加入濃度為113.20μg/mL梔子苷對照品2、2.5、3mL各三份，按供試品溶液制備方法制備9份待測溶液，按擬定色譜條件進行測定，記錄溶液中梔子苷峰面積，并計算加樣回收率。結(jié)果見表2。

2.4 樣品含量測定 用3批西帕依麥孜彼子口服液，按2.2.2項下的方法制備供試品溶液，按擬定色譜條件進行測定，記錄峰面積，并用梔子苷回歸方程計算含量。結(jié)果見表3。

3 討論

本實驗選用不同比例的流動相系統(tǒng)，乙腈-0.1%磷酸（10∶90、12∶88、14∶86、15∶85、16∶84、18∶82、20∶80）。結(jié)果表明，流動相為乙腈-0.1%磷酸（14∶86）時柱效高，分離效果好。

實驗中比較了純水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇為提取溶媒，結(jié)果表明甲醇提取效率最高，因此選用甲醇作為提取溶劑。

西帕依麥孜彼子口服液臨床應(yīng)用廣泛，但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)落后，本研究根據(jù)制劑組成，選擇有效成分梔子苷作為測試指標(biāo)，對西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量進行控制。本方法操作簡單，線性關(guān)系良好，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，加樣回收率符合要求，為西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量控制提供了良好的依據(jù)。

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