陳盛文，周柱輝，柳小強，陳麗萍 ，王自強，張險朋★

（1.東莞市長安鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523846；2.東莞市橫瀝鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心；3.東莞市動物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起一種變態(tài)反應(yīng)性人畜共患傳染病，所有的哺乳動物都可感染，但牛、羊、豬等家畜和野生動物最易感。布魯氏菌是細胞內(nèi)寄生菌，可以引起哺乳動物和人類和致病，一般的抗生素難以治愈。家畜感染主要以流產(chǎn)、死胎、睪丸炎、不孕不育和關(guān)節(jié)炎為特征。人感染主要表現(xiàn)為持續(xù)性感染、間歇性流感樣癥狀又稱“波狀熱”，表現(xiàn)多汗、生殖系統(tǒng)疾病、關(guān)節(jié)炎、肝脾腫大以及肌肉-骨骼系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的并發(fā)癥等。布魯氏菌病會對畜牧業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失，對人類的健康和公共衛(wèi)生安全構(gòu)成嚴重的威脅。布魯氏菌病感染的高危人群主要是獸醫(yī)、畜牧科技人員、屠宰從業(yè)人員、農(nóng)牧場的人員。另外，普通市民食用了帶菌的乳品、生肉或接觸受污染的組織等也會引起感染。人類的傳染源主要還是患病的動物或受污染的動物產(chǎn)品，因此，要做好人的布魯氏菌病防控，必須從源頭抓起，控制好動物的布魯氏菌病，能大大降低人感染布魯氏菌的幾率，減少人的病例。為了掌握東莞市布魯氏菌病的流行情況，在2012～2016年，對采自東莞市動物的血清進行檢測，現(xiàn)將檢測結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清

2012～2016年間，采自東莞市的動物血清，共25500份，其中豬血清20221份，牛血清 203份，羊血清239份，犬血清4508份，馬血清329份。

1.1.2 試 劑

布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原、試管凝集抗原、標準陰性和陽性血清購自青島易邦生物工程有限公司。

1.1.3 儀器設(shè)備

生化培養(yǎng)箱購自三洋公司，移液器購自eppendorf公司。

1.2 方法

1.2.1 虎紅平板凝集試驗

用渦旋振蕩器混勻血清和虎紅平板凝集抗原，在玻璃板上標記待檢血清號，分別吸取30μL的血清和抗原加于玻璃板上。用滅菌牙簽快速混勻血清和抗原，涂成2cm直徑的圓形，混勻后4min，在自然光下觀察。試驗同時設(shè)陰、陽性血清對照。結(jié)果的判定，在陰性血清不出現(xiàn)凝集、陽性血清出現(xiàn)凝集時，試驗成立；出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判定為陽性(+)，無凝集現(xiàn)象且反應(yīng)混合液呈均勻粉紅色者判定為陰性（-）。

1.2.2 試管凝集方法

在96孔U型板的第1孔加184μL稀釋液；第2～4孔各加入100μL稀釋液；第1孔加入16μl待檢血清，混勻，倍比稀釋至第4孔；稀釋后，第1至第4孔的血清稀釋度分別 為 1：12.5、1：25、1：50 和 1：100； 牛 血 清 的 第 1 孔 加192μL稀釋液和8μL受檢血清,其稀釋度分別為1：25、1∶50、1∶100和1∶200。陰、陽標準血清按照待檢血清稀釋方法稀釋。加入抗原100μL至上述各孔稀釋好的血清中,振蕩混勻?？乖瓕φ湛准?00μL抗原和100μL稀釋液，觀察抗原是否有自凝現(xiàn)象。將加完樣的96孔U型反應(yīng)板，封板后放濕盒內(nèi)置溫箱（37℃±1℃）孵育18～24h,記錄結(jié)果。

當陽性血清出現(xiàn)完全凝集（++++），而陰性血清無凝集（-），抗原對照無自凝(-)現(xiàn)象時，試驗成立。受檢血清出現(xiàn)“++”及以上凝集現(xiàn)象時，判定為陽性；受檢血清出現(xiàn)“+”凝集現(xiàn)象時，判定為可疑；受檢血清出現(xiàn)“-”時，判定為陰性。試驗結(jié)果可疑牛、羊經(jīng)30d后采血重檢,如果仍為可疑,該家畜判為陽性。

2 結(jié)果

2.1 豬血清檢測結(jié)果

共檢測豬血清20221份，布魯氏菌抗體陽性7份，抗體陽性率為0.035%；其中養(yǎng)豬場檢測6756份，抗體陽性4份，抗體陽性率為0.06%，結(jié)果（見表1）；豬屠宰場檢測13465份，抗體陽性3份，抗體陽性率為0.02%，結(jié)果（見表2）。

2.2 牛血清檢測結(jié)果

表1 2012～2016年豬養(yǎng)殖場布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果

表2 2012～2016年豬屠宰場布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果

2012～2016年共檢測活牛交易市場牛血清275份，抗體陽性2份，抗體陽性率為0.73%，結(jié)果（見表3）。

2.3 羊血清檢測結(jié)果

表3 2012～2016年活牛交易市場布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果

共檢測羊血清5024，抗體陽性4份，抗體陽性率0.08%；其中本地羊養(yǎng)殖場羊血清192份，抗體陽性1份，抗體陽性率為0.52%，結(jié)果（見表4）；檢測羊批發(fā)市場羊血清4832，抗體陽性3份，抗體陽性率為0.06%，結(jié)果見（表5）。

2.4 犬血清檢測結(jié)果

表4 2012～2016年羊養(yǎng)殖場布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果

表5 2012～2016年羊批發(fā)場布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果

2012～2016年檢測本地養(yǎng)殖犬血清4508份，抗體陽性4份，抗體陽性率0.09%，結(jié)果（見表6）。

2.5 馬血清檢測結(jié)果

表6 2012～2016年犬布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果

2014～2016年檢測本地馬場馬血清329份，未檢出抗體陽性，結(jié)果（見表 7）。

3 討論

表7 2014-2016年馬布魯氏菌病抗體檢測結(jié)果

根據(jù)血清學檢測結(jié)果表明，豬、牛、羊、犬的布魯氏菌抗體陽性率分別為0.04%、0.73%、0.08%、0.09%，結(jié)果表明東莞市，豬、牛、羊、犬都可能存在布魯氏菌的感染；馬清霞等對青島萊西市布魯氏菌病血清學調(diào)查結(jié)果為場戶血清流行率為2.55%，個體血清流行率為0.38%；馬曉箐等在2012～2014年對新疆牛羊布魯氏菌抗體血清學調(diào)查結(jié)果為牛羊抗體陽性率為0.77%～2.87%；林元清在對青海省牛、羊布魯氏菌病血清學檢測抗體陽性率分別為1.23%、0.06%；項夫等在2008～2009年對1200只寵物犬，布魯氏菌抗體陽性率1.75%；于清磊等通過對2006～2015年甘肅省517172頭奶牛樣品的血清學檢測，抗體陽性率為0.26%。上述結(jié)果豬、牛、羊、犬的布魯氏菌抗體陽性率雖然有所差異，但結(jié)果都表明，豬、牛、羊、犬都存在布魯氏菌病不同程度的感染。

從1994年開始我國布魯氏菌病疫情開始回升，2000年以后呈迅速增長趨勢，衛(wèi)生部門統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示1994年新發(fā)病人數(shù)為815人，而到2008年新發(fā)病人數(shù)約為3萬人，2017年新發(fā)病例數(shù)為41241例。歷史上廣東省屬于布魯氏菌病低發(fā)省份，但近年來報告布病的地市數(shù)逐年增多，2017年廣東省新發(fā)人感染布魯氏菌病病例數(shù)為386例，顯示我省布病疫情有進一步擴散趨勢。由于布魯氏菌是細胞內(nèi)寄生菌，人感染布病后往往難以治愈，因此給人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來嚴重的危害。

對布魯氏菌病的防控，（1）要加強動物疫情的監(jiān)測，對病原陽性的家畜要及時淘汰進行無害化處理，對易感家畜進行免疫接種，引種時做好隔離措施。（2）做到非免區(qū)要禁止接種疫苗，在非免疫區(qū)發(fā)現(xiàn)血清抗體陽性的家畜及時淘汰。（3）做好從業(yè)人員的防護，實驗室人員要做好生物安全防護，為家畜接產(chǎn)的人員要做好防護措施，禁止徒手接產(chǎn)，及時處理流產(chǎn)物并做好消毒措施。（4）要加大宣傳力度，讓市民意識到布魯氏菌病的危害性，從業(yè)人員做好個人防護，做到群防群控，發(fā)現(xiàn)疫情及時上報，及時處理。（5）做好衛(wèi)生部門和農(nóng)業(yè)部門的聯(lián)防聯(lián)控，發(fā)現(xiàn)人的感染布魯氏菌病例，通知農(nóng)業(yè)部門，一起做好疫情的流行病學調(diào)查，做好病原的溯源。（6）加強布魯氏菌病科研力度，摸清布魯氏菌病的致病機理和傳播機制，掌握本地區(qū)布魯氏菌的流行情況和地區(qū)分布。