羅建平

近年來，由于國(guó)家政策的大力扶持，我國(guó)的養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)得到了空前的穩(wěn)步發(fā)展，豬的養(yǎng)殖業(yè)更是在大步躍近。但是，豬病的危害和影響不容忽視，尤其是仔豬斷奶后出現(xiàn)多系統(tǒng)衰竭綜合征等現(xiàn)象，該病癥與豬圓環(huán)病毒關(guān)系密切，是豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾?。≒CVAD）的重要病源，本文通過采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)en-zymelinkedimmunosorbentassay， ELISA）試劑的免疫檢測(cè)技術(shù)，進(jìn)行了檢測(cè)抗體水平分析與研究，以期有效評(píng)估和掌握的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗對(duì)豬場(chǎng)的作用，減少仔豬高死亡率，有效控制該病蔓延。

1 關(guān)于豬圓環(huán)病毒與免疫檢測(cè)技術(shù)介紹

1.1 豬圓環(huán)病毒是世界公認(rèn)的免疫抑制病之一，該病是由豬圓環(huán)病毒感染所引起的以免疫抑制為特征的一類病毒性傳染病，自1991年在加拿大豬群中首次暴發(fā)以后，已成為當(dāng)今危害世界養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的病毒之一，該病毒是引起仔豬斷奶后出現(xiàn)多系統(tǒng)衰竭綜合征、增生性壞死性間質(zhì)性肺炎、豬皮炎與腎病綜合癥、新生仔豬先天性震顫、懷孕母豬繁殖障礙等多種疾病的統(tǒng)稱，抑制豬體免疫功能，仔豬會(huì)伴有咳嗽、呼吸困難、逐漸消瘦等癥狀，隨著病程的增長(zhǎng)，容易繼發(fā)其他疾病，如：附紅細(xì)胞體病、弓形體病、喘氣病、豬瘟等，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

1.2 豬圓環(huán)病毒免疫檢測(cè)。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和酶免疫組化法，前者測(cè)定可溶性抗原或抗體，后者檢測(cè)組織或細(xì)胞表面抗原。將抗原一抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后的顯色反應(yīng)判定結(jié)果。可用目測(cè)定性，也可用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定光密度（OD）值反應(yīng)抗原含量，靈敏度可達(dá)每毫升納克（ng）水平甚至皮克（pg）水平，它常用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶（ horseradishperoxidase，HRP）、堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，AP）等。

2 豬圓環(huán)病毒2型抗體水平免疫檢測(cè)分析

2.1 操作方法。嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，取抗原包被板，加入已稀釋好的洗滌液200υL，倒掉，重復(fù)洗滌共計(jì)洗板2次，最后一次在吸水紙上拍干。將稀釋好的待測(cè)血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清各取lOOυL加入到抗原包被板孔中，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照各設(shè)2孔（輕輕搖勻孔中樣品，勿溢出），用封板膜覆蓋包被板，置37℃溫箱中溫浴30min。棄掉封板膜，甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200υL，棄取洗滌液.重復(fù)洗滌共計(jì)洗滌5次，最后一次在吸水紙上拍干。每孔加酶標(biāo)記物lOOυL，置37℃溫箱中溫浴30min。再次棄掉混合液并對(duì)抗原包被板進(jìn)行洗滌拍干。將洗滌并拍干好的抗原包被板中每孔加入底物A50υL、底物B50υL混勻，室溫（20至25℃）溫室避光顯色lOmin，最后每孔加入終止液50υL。lOmin內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)定并記錄各孔在630nm波長(zhǎng)處的吸光度（OD）值（測(cè)定前輕輕搖勻，勿溢出）。根據(jù)OD值的大小，進(jìn)行樣品抗體水平的判斷。

2.2 實(shí)驗(yàn)分析

2.2.1 隨著豬年齡的增長(zhǎng)，不同生長(zhǎng)階段的豬感染情況是有差異的，在仔豬（6至8周齡，發(fā)病率為20%至60%）和育肥豬生長(zhǎng)階段的豬感染機(jī)率高，豬體抗體水平較低，可引起仔豬淋巴系統(tǒng)疾病、漸進(jìn)性體重下降、呼吸道癥狀及黃疸，造成患豬免疫機(jī)能下降、生產(chǎn)性能降低。此時(shí)，應(yīng)及時(shí)加強(qiáng)免疫措施，積極做好疫病防控重點(diǎn)，有針對(duì)性地控制病情的流行。

2.2.2 基于豬圓環(huán)病毒2型免疫效果全年比較穩(wěn)定，與季節(jié)性因素的影響不大，因此，養(yǎng)殖人員應(yīng)做好日常管理工作，加強(qiáng)衛(wèi)生消毒意識(shí)，提高飼養(yǎng)管理水平和豬群機(jī)體自身免疫抗體水平，防患于未然。

2.3 結(jié)果判定。陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630nm≧1.O，陰性對(duì)照孔平均OD630nm≤0.3，于波長(zhǎng)630nm處測(cè)酶標(biāo)儀上各孔OD630nm的值，樣品OD630nm>0.42，判為陽(yáng)性，則證明實(shí)驗(yàn)成立。

3 注意事項(xiàng)

3.1 由于每個(gè)豬的健康情況不同，所以可能會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果有一定的影響。本文提到的試驗(yàn)方法雖常廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體的測(cè)定實(shí)驗(yàn)中。但除在檢測(cè)中，會(huì)受到標(biāo)本因素、試劑因素、操作因素等的影響，而導(dǎo)致ELISA試驗(yàn)測(cè)定出現(xiàn)結(jié)果錯(cuò)誤。

3.2 血清標(biāo)本在采集過程中應(yīng)避免標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血現(xiàn)象：冰凍保存的血清樣本應(yīng)防止反復(fù)凍融；樣本保存過程中若出現(xiàn)非細(xì)菌污染所致的渾濁或絮狀物質(zhì)，應(yīng)離心后取上清液進(jìn)行檢測(cè)：樣本的采集及血清分離過程中應(yīng)盡量避的免細(xì)菌污染。

4 結(jié)論

豬圓環(huán)病毒2型抗體為在控制豬群豬圓環(huán)病毒2型的疫情，以及制定合理的綜合防治措施奠定基礎(chǔ)。

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