曹素芳，王 瑋，趙明新，曹 剛，李紅旭

（甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果花卉研究所，甘肅 蘭州 730070）

梨是世界和我國的重要水果之一，在我國的栽培面積僅次于蘋果[1-2]。由互隔交鏈孢（Alternaria alternata）引起的梨黑斑病是梨主產(chǎn)區(qū)危害嚴重的主要病害之一[3-4]，導(dǎo)致梨葉與果實產(chǎn)生黑斑癥狀及早期落葉，對梨樹體健康構(gòu)成嚴重威脅。該病在甘肅省各地均有發(fā)生，尤其在天水秦州區(qū)普遍發(fā)生，嚴重影響了梨的產(chǎn)量與品質(zhì)，已成為制約當(dāng)?shù)乩娈a(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一。

目前，生產(chǎn)上防治梨黑斑病主要依靠化學(xué)藥劑。為了減少果農(nóng)在農(nóng)田用藥時的盲目性，有效降低梨黑斑病菌的侵染概率，減少因該病害造成的經(jīng)濟損失，我們對近年來生產(chǎn)上應(yīng)用比較多的11種殺菌劑在室內(nèi)采用菌絲生長速率法對梨黑斑病菌進行了毒力測定，以期篩選出對黑斑病菌高效低毒的殺菌劑，為生產(chǎn)上科學(xué)合理用藥和病害的有效控制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

病菌分離自天水市秦州區(qū)梨園發(fā)病嚴重且癥狀典型的梨樹黑斑病病斑，根據(jù)菌落特征和病菌顯微鏡檢確認為梨樹黑斑病菌，試驗前將菌種轉(zhuǎn)接到PDA平板進行培養(yǎng)待用。

1.2 供試藥劑

10%苯醚甲環(huán)唑乳油（中國農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠），20%丙環(huán)唑乳油（中國農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠），40%氟硅唑乳油（美國杜邦公司產(chǎn)品），25%戊唑醇乳油（浙江永農(nóng)化工有限公司），1.5%噻霉酮乳油（陜西西大華特科技有限公司），50%多菌靈可濕性粉劑（山東華陽科技股份有限公司），70%代森錳鋅可濕性粉劑（利民化工股份有限公司），25%嘧菌酯懸浮劑（英國先正達有限公司），12.5%腈菌唑乳油（華北制藥集團愛諾有限公司），75%百菌清可濕性粉劑（江陰蘇利化學(xué)有限公司），12.5%烯唑醇可濕性粉劑（江蘇劍牌農(nóng)藥化工有限公司）。

1.3 供試培養(yǎng)基

培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA），采用常規(guī)方法制備，分裝入150 mL三角瓶（每瓶49 mL），高壓蒸汽滅菌后備用。

1.4 供試藥劑母液的配制及保存

根據(jù)預(yù)試驗的測定結(jié)果，在無菌環(huán)境下配制各供試藥劑的母液，置于消毒的三角瓶中在4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 毒力測定方法

采用菌絲生長速率法[5]。將供試藥劑母液分別稀釋5個系列濃度（表1），各取1 mL加入49 mL定量滅菌冷卻至50～55℃的PDA培養(yǎng)基中，搖勻，制成不同濃度帶藥平板，以加入1 mL無菌水的培養(yǎng)基平板為對照，4次重復(fù)。在無菌條件下，用滅菌打孔器自菌落邊緣切取直徑5 mm菌餅，接入帶藥和對照培養(yǎng)基平板中央，菌絲面朝下。

表1 11種殺菌劑對梨樹黑斑病菌的抑制率

表2 11種殺菌劑對病原菌的毒力測定結(jié)果

各處理培養(yǎng)皿置于25℃恒溫培養(yǎng)，對照菌落直徑長到培養(yǎng)皿直徑的90%時，用十字交叉法測量各處理的菌落直徑，計算各藥劑處理對病菌菌絲生長的抑制率。采用唐啟義和馮明光[6]的實用統(tǒng)計分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件，用生物測定-數(shù)量型數(shù)據(jù)機率值分析模型計算各種藥劑的毒力回歸方程（y=bx+a）、EC50和相關(guān)系數(shù)r。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑對病原菌的抑制效果

從表1看出，11種藥劑在設(shè)計濃度下均對梨樹黑斑病病原菌有抑制作用。隨著藥劑濃度的升高，其對病原菌的抑制率增加。70%代森錳鋅可濕性粉劑800.00 μg/mL、12.5%烯唑醇可濕性粉劑160.00μg/mL、10%苯醚甲環(huán)唑乳油40.0000μg/mL、25%戊唑醇乳油40.000 0 μg/mL、20%丙環(huán)唑乳油40.000 0 μg/mL 和 40%氟硅唑乳油 2.000 0 μg/mL對病原菌的抑制率均在91%以上，表明這6種藥劑在該濃度下對病原菌的抑制效果較好。

2.2 不同殺菌劑對病原菌的毒力測定

各藥劑對梨樹黑斑病菌的毒力大小不同（表2）。40%氟硅唑乳油EC50值最低，為0.401 6 μg/mL，表明40%氟硅唑乳油對病原菌的毒力作用最強；其次是10%苯醚甲環(huán)唑乳油、20%丙環(huán)唑乳油和25%戊唑醇乳油，EC50值分別為 1.4780 μg/mL、2.018 5 μg/mL和 4.101 0 μg/mL；而 1.5%噻霉酮乳油和75%百菌清可濕性粉劑EC50較高，分別達886.520 0 μg/mL 和 759.468 0 μg/mL，表明這兩種藥劑對病原菌的毒力作用最弱。相關(guān)性（r）分析表明，75%百菌清可濕性粉劑對病原菌的相關(guān)性系數(shù)為0.876 1，沒有達到顯著水平，其它10種供試藥劑均達到極顯著水平。

2.3 病原菌對不同藥劑的敏感性

從毒力回歸方程看出，不同藥劑處理的斜率（b值）不同（表2）。40%氟硅唑乳油、50%多菌靈可濕性粉劑和70%代森錳鋅可濕性粉劑的b值較大，分別達到1.465 7、1.430 4和1.528 9，表明病原菌對40%氟硅唑乳油、50%多菌靈可濕性粉劑和70%代森錳鋅可濕性粉劑較敏感。而75%百菌清可濕性粉劑和25%嘧菌酯懸浮劑的b值較小，分別為0.530 7和0.611 2，表明病原菌對75%百菌清可濕性粉劑和25%嘧菌酯懸浮劑不敏感。

3 小結(jié)與討論

選用11種殺菌劑測定了對梨黑斑病菌菌絲生長抑制作用，結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑乳油、25%戊唑醇乳油、40%氟硅唑、12.5%烯唑醇可濕性粉劑、20%丙環(huán)唑乳油及70%代森錳鋅可濕性粉劑對梨黑斑病菌菌絲生長抑制率均能達到90%以上。在供試的11種殺菌劑中，對病原菌菌絲生長毒力最強的是40%氟硅唑乳油；EC50為0.401 6 μg/mL；其次為10%苯醚甲環(huán)唑乳油、20%丙環(huán)唑乳油和25%戊唑醇乳油；1.5%噻霉酮乳油的毒力最弱，為886.520 0 μg/mL，從毒力回歸方程的b值分析看出，梨樹黑斑病病菌對70%代森錳鋅可濕性粉劑、40%氟硅唑乳油和50%多菌靈可濕性粉劑敏感性較高。綜合比較分析，40%氟硅唑乳油、10%苯醚甲環(huán)唑乳油、20%丙環(huán)唑乳油及25%戊唑醇乳油這4個處理可以作為防治梨黑斑病的首選藥劑和劑量。

化學(xué)殺菌劑是防治梨黑斑病的主要手段。本研究通過對梨黑斑病菌的藥劑篩選，初步明確了對病菌有較高毒力的殺菌劑，結(jié)果與付余波[7]和崔建潮[8]的報道基本一致。本試驗所測的藥劑EC50值相對較高，這可能與菌株地理來源不同有關(guān)。朱紅艷[9]研究表明，苯醚甲環(huán)唑?qū)婧诎卟【甑腅C50分布在0.719 0～1.488 6 μg/mL范圍內(nèi)，菌株表現(xiàn)為敏感，但存在敏感性降低的菌株。本研究測得的苯醚甲環(huán)唑的EC50值為1.478 0 μg/mL，也可能與病原菌對藥劑的敏感性降低有關(guān)。黑斑病菌分生孢子產(chǎn)生在病害循環(huán)中是非常關(guān)鍵的一環(huán)，本研究僅測定了供試藥劑對病原菌菌絲的毒力大小，對分生孢子的毒力大小還需進一步研究。

在長期的農(nóng)藥使用過程中，梨樹病害對常規(guī)性的殺菌劑勢必會產(chǎn)生一定的抗藥性，還易造成農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染。在生產(chǎn)實際中，還應(yīng)根據(jù)根據(jù)梨黑斑病的發(fā)病規(guī)律，交替使用藥劑，以有效控制梨黑斑病的發(fā)生。還應(yīng)通過整形修剪改善田間通風(fēng)透光條件及溫濕度變化等其它農(nóng)業(yè)措施，降低發(fā)病條件，減少農(nóng)藥的使用量，以延緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生，延長這些殺菌劑的使用壽命。本試驗只供田間病害防治時選藥提供參考，為了更進一步明確藥效，還應(yīng)對這些殺菌劑進行系統(tǒng)的田間防效試驗。