劉立山 郎俠 王彩蓮 周瑞 宋淑珍 宮旭胤 王斐 吳建平

摘要：聯(lián)合使用PGF2α和GnRH對荷斯坦奶牛進行不同的同期發(fā)情定時輸精程序處理，結(jié)果表明：4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理后，奶牛子宮黏液評分和直腸檢測評分分別較試驗前提高了0.55分（P < 0.05）和0.45分（P < 0.05），2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理后，奶牛子宮黏液評分和直腸檢測評分分別較試驗前分別提高了0.30分（P < 0.05）和0.45分（P < 0.05）。4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理和2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理后的奶牛同期發(fā)情率分別為80%、90%，第1個情期受胎率分別為65%、70%，比對照自然發(fā)情牛分別高25、30百分點。說明利用外源激素PGF2α和GnRH處理能促進奶牛卵巢和子宮復舊，達到同期發(fā)情的效果，并提高奶牛受胎率。

關鍵詞：奶牛;激素;PGF2α;GnRH;同期發(fā)情;定時輸精;受胎率

中圖分類號：S663? ? ? ? ? 文獻標志碼：A? ? ? ? ?文章編號：1001-1463（2018）12-0076-04

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2018.12.023

近年來，中國的畜牧業(yè)比重不斷增加，乳品行業(yè)已發(fā)展迅速，總產(chǎn)奶量也不斷提高。但在快速發(fā)展的過程中，奶牛養(yǎng)殖業(yè)也出現(xiàn)了很多問題，比如產(chǎn)后奶牛疾病過多，影響奶牛生殖機能的恢復，受胎率低、產(chǎn)犢間隔過長等，都影響和制約著我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)代化的發(fā)展[1 - 2 ]。奶牛產(chǎn)后的子宮機能恢復程度與早期卵巢機能的恢復及活動密切相關。在卵巢活動周期正常的前提下，子宮機能的恢復程度決定了受胎率[3 - 5 ]。對產(chǎn)后奶牛的保健治療，加強機體免疫力，是加快子宮機能復舊的重要措施。目前，對奶牛產(chǎn)后疾病的治療基本是采用化學和激素類藥物，通過對產(chǎn)后奶牛早期的激素分泌進行調(diào)控，促進奶牛產(chǎn)后子宮復舊，達到同期發(fā)情的效果，提高奶牛繁殖率[6 - 8 ]。因此同期發(fā)情定時輸精技術在養(yǎng)殖場的應用對家畜繁殖率的提高具有重要意義[9 ]。同期發(fā)情可以實現(xiàn)難孕母牛以及繁殖有障礙的母牛集中發(fā)情和配種，達到正常受孕和產(chǎn)犢。定時輸精可以使牛的發(fā)情時間集中，防止隱性發(fā)情造成的漏配現(xiàn)象，有利于集中輸精，降低了勞動強度，不需要觀察發(fā)情就能定時進行人工授精[10 ]。因此，同期發(fā)情定時輸精技術是提高養(yǎng)殖場母牛繁殖效率以及經(jīng)濟效益的重要保證。

我們使用不同的同期發(fā)情定時輸精程序，對荷斯坦奶牛進行同期發(fā)情處理，以探討聯(lián)合使用PGF2α和GnRH的定時輸精效果，完善同期發(fā)情定時輸精技術，為奶牛的同期發(fā)情定時輸精技術提供參考。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗材料

指示奶牛為荷斯坦奶牛，由甘肅省臨洮縣華加牧業(yè)科技有限責任公司提供。

試劑①PGF2α，為PGF2α類似物氯前列醇鈉注射液（Cloprostenol Sodium Injection，蘇州市蘇牧動物藥業(yè)有限公司，規(guī)格為0.2 mg×10支）。②GnRH為人工合成促性腺素釋放激素（Gonadotropin-releasing hormone，蘇州市蘇牧動物藥業(yè)有限公司，規(guī)格為20 μg×10支，凍干粉針）。

試驗儀器包括：CS101-A型電熱鼓風干燥箱（重慶實驗設備廠）、BCD-539WF海爾電冰箱（青島海爾股份有限公司）、5mL注射器（宣城市江南醫(yī)療器械有限公司）、愛德士測孕試劑盒（美國愛德士生物科技有限公司）。

1.2? ?試驗方法

試驗于2015年9月在甘肅省臨洮縣華加牧業(yè)科技有限責任公司養(yǎng)殖基地進行。試驗共設3個處理，分別為處理A，“4+2法”（4次PGF2α、2次GnRH法）同期發(fā)情定時輸精程序處理;處理B，“2+4法”（2次PGF2α、4次GnRH法）同期發(fā)情定時輸精程序處理;處理C，自然發(fā)情，不進行同期發(fā)情定時輸精程序處理（CK）。處理A和處理B各選取產(chǎn)后90 d以上不發(fā)情、以及2次配種仍然不孕且體況評分在2.5～4.0分的有繁殖障礙的荷斯坦經(jīng)產(chǎn)奶牛20頭，處理C選取自然發(fā)情的奶牛20頭。

試驗采用2種不同的同期發(fā)情定時輸精程序，即試驗組Ⅰ程序（4次PGF2α、2次GnRH法，簡稱“4+2法”）和試驗組Ⅱ程序（2次PGF2α、4次GnRH法，簡稱“2+4法”）。

處理A 同期發(fā)情定時輸精程序：試驗開始的當天記為0 d，并且在當天10：00時注射1次PGF2α，14 d后的10：00時注射1次PGF2α，25 d后的10：00時注射1次GnRH，30 d后的10：00時注射1次PGF2α，31 d后的10：00時注射1次PGF2α，33 d后的10：00時注射GnRH同時進行人工授精。 處理B同期發(fā)情定時輸精程序：試驗開始的當天10：00時注射1次GnRH，7 d后的? ? ?10：00時注射1次PGF，10 d后的10：00時注射1次GnRH，17 d后的10：00時注射1次GnRH，24 d后的10：00時注射1次PGF，26 d后的午16：00時注射GnRH，27 d后的10：00時進行人工授精。

試驗每次注射激素均為10：00時和16：00時，PGF2α每次注射劑量為0.6 mg，GnRH每次注射劑量為60 μg。嚴格按照牛場的飼養(yǎng)管理進行試驗。對實施不同的同期發(fā)情定時輸精程序處理的奶牛進行子宮黏液評分和直腸檢測評分，統(tǒng)計比較不同處理的同期發(fā)情率、受胎率。

1.3? ?測定指標及方法

1.3.1? ? 發(fā)情統(tǒng)計? ? 試驗期間對不同試驗的奶牛進行發(fā)情觀察，及時記錄發(fā)情時間及次數(shù)，計算同期發(fā)情率。

1.3.2? ? 評分記錄? ? 以試驗當天記為0 d，并在試驗前進行1次子宮粘液評分和直腸檢測評分，試驗期間每隔7 d進行子宮粘液評分和直腸檢測評分，并記錄統(tǒng)計。子宮粘液評分和直腸檢測評分均參照宮艷斌[11 ]的方法。

1.3.3? ? 受胎率? ? 定時對配種后的母牛進行仔細的返情觀察，對未返情的母牛使用愛德士測孕試劑盒嚴格按照試劑盒標明的步驟進行檢測，確定受孕母牛數(shù)，計算受胎率（配種后受孕母牛數(shù)和參配母牛數(shù)的比值）。

1.4? ?數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)使用Excel 2010統(tǒng)計數(shù)據(jù)，通過SPSS 19.0 軟件中的單因素方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析和顯著性檢驗，結(jié)果以平均值與標準差表示。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?不同處理的發(fā)情率

由表1可以看出，2組試驗奶牛發(fā)情均主要集中在第5次注射激素后，說明第5次注射激素后奶牛均會出現(xiàn)發(fā)情高峰期。處理A的奶牛5次肌肉注射激素后發(fā)情率分別為 25%、35%、5%、15%、80%，處理B的奶牛5次肌肉注射激素后發(fā)情率分別為 0%、30%、15%、5%、90%，兩處理的奶牛均以第5次肌肉注射激素后發(fā)情率最高，分別為80%和90%。

2.2? ?不同處理下子宮粘液和直腸檢測

由表2可以看出，處理A試驗后比試驗前子宮黏液評分高0.55（P < 0.05），直腸檢測評分高0.45（P < 0.05），處理B試驗后比試驗前子宮黏液評分高0.30（P? < 0.05），直腸檢測評分高0.45（P? < 0.05）。從子宮黏液評分和直腸檢測評分可以看出，兩處理的奶牛卵巢和子宮生理功能均有顯著改善。

2.3? ?受胎率統(tǒng)計

由表3可以看出，處理A、處理B和對照的第1個情期受胎率分別為65%、70%、40%，第2個情期受胎率分別為57%、66%、42%，總受胎率分別為85%、90%、65%，處理A、處理B第1個情期受胎率分別比對照高25、30百分點，總受胎率分別比對照高20、35百分點，可以看出經(jīng)同期發(fā)情定時輸精方案處理的奶牛受胎率要遠高于自然發(fā)情奶牛的受胎率。

3? ?小結(jié)與討論

同期發(fā)情主要是通過調(diào)節(jié)生殖激素的水平，調(diào)控卵泡的發(fā)育和排卵。定時輸精技術是目前國內(nèi)外應用較為廣泛的一種同期發(fā)情技術，主要使用GnRH與PGH2α 2種激素， 通過調(diào)控卵巢的發(fā)育，使處于不同發(fā)育階段的卵泡達到同時排卵的作用。這種技術不需要觀察發(fā)情，即可直接進行人工授精，其受胎率一般在50% ～60%[12 ]。PGF2α的合成類似物氯前列醇鈉等，對母畜繁殖疾病具有治療的作用[13 ]，是同期發(fā)情廣泛使用的一種激素，尤其對黃體囊腫、持久黃體、子宮內(nèi)膜炎等的治療有較好的效果。本試驗也充分說明了這一點：4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理、2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理的子宮黏液評分和直腸檢測評分均顯著提高（P < 0.05）。子宮黏液評分和直腸檢測評分是對母畜繁殖機能以及子宮健康與否的最直觀的評判依據(jù)，評分顯著提高也說明了同期發(fā)情定時輸精對不發(fā)情以及多次配種不孕的具有繁殖障礙的母畜有一定的治療效果。

本試驗顯示，2個同期發(fā)情定時輸精程序處理的受胎率均比對照自然發(fā)情牛的受胎率高，且2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理的第1個情期受胎率最高到達70%，4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理的第1個情期受胎率為65%，同時兩組試驗的奶牛同期發(fā)情率也達到80%以上，激素處理后明顯提高了同期發(fā)情率和受胎率，這些結(jié)果與李啟業(yè)等[14 ]、姚國良[15 ]、劉念銳等[16 ]研究結(jié)果一致?！?+4法”（2次PGF2α、4次GnRH法）同期發(fā)情定時輸精程序處理第5次肌肉注射激素后奶牛的發(fā)情率高達90%。PGF2α處理主要作用是將卵巢中的功能性黃體退化，由于牛的個體差別，有些牛發(fā)情后5～6 d肌肉注射PGF2α就會對溶解黃體起作用，但大多數(shù)牛需要在發(fā)情后7～8 d才會有相同的效果，因此在母畜發(fā)情晚期處理時，卵巢中黃體就會被溶解[17 - 18 ]。母牛在注射激素（GnRH）時容易啟動生殖周期的開始，如果母畜正處于黃體期或卵泡期，再利用激素調(diào)整到生殖周期的開始狀態(tài)，要比處于卵巢靜止的母牛要困難。余長林等[19 ]研究發(fā)現(xiàn)，利用OVS（GnRH+PG+GnRH） 同期發(fā)情程序的荷斯坦奶牛比自然發(fā)情的奶牛繁殖效率著提高了18.86%，且21 d 妊娠率也顯著提高。曹曉云等[20 ]對黃牛采用OVS程序進行同期發(fā)情試驗，得到了80%以上的受胎率，通過同期發(fā)情處理后任然不孕，推測可能是母畜生殖機能未具備完好的生殖條件所致[21 ]。因此，對于不發(fā)情、多次配種不孕以及生殖有障礙的奶牛，需要用藥物適量多次調(diào)控奶牛的生殖周期，以便啟動生殖周期的開始，使奶牛達到同期發(fā)情的目的。

本試驗2種同期發(fā)情定時輸精程序處理使用的PGF2α和GnRH均可以促進子宮復舊，恢復其正常功能。4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理后奶牛的子宮黏液評分和直腸檢測評分分別較試驗前提高了0.55分（P < 0.05）和0.45分（P < 0.05），2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理后的奶牛分別較試驗前提高了0.30分和0.45分（P < 0.05）;4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理和2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時輸精程序處理后奶牛的同期發(fā)情率分別為80%、90%，總受胎率分別比對照自然發(fā)情牛提高了20、25百分點。以上數(shù)據(jù)均表明，聯(lián)合使用PGF2α和GnRH，通過2種同期發(fā)情定時輸精程序均能有效的調(diào)節(jié)卵巢的功能與活性，尤其對于不發(fā)情、多次配種不孕以及生殖有障礙的奶牛，有效地控制了奶牛的繁殖障礙以及子宮炎癥，且大大提高了奶牛受胎率。

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（本文責編：鄭立龍）