丁釗 肖凌 龔元 陳科力

中圖分類號(hào) R282 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）09-1237-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.09.20

摘 要 目的：建立日本醫(yī)蛭（水蛭）凍干粉（簡稱“凍干粉”）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為控制其質(zhì)量提供參考。方法：取3批凍干粉，按照2015年版《中國藥典》（一部）（簡稱“藥典”）水蛭項(xiàng)下要求對(duì)凍干粉進(jìn)行鑒別、檢查和抗凝血霉素活性分析；通過最大耐受量（MTD）實(shí)驗(yàn)來考察其毒性；通過設(shè)計(jì)溫度、濕度和強(qiáng)光照射試驗(yàn)來考察其穩(wěn)定性。結(jié)果：供試品薄層色譜中，在與對(duì)照藥材色譜的相應(yīng)位置顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，紫外光燈（365 nm波長）下顯相同的橙紅色熒光斑點(diǎn)。3批樣品的平均水分含量為2.61%、總灰分含量為2.83%、酸不溶性灰分含量為0.38%、pH為6.92、黃曲霉毒素總量為0.28 ?g/kg、抗凝血酶活性為257.0 U/g，除汞元素含量略高于藥典水蛭項(xiàng)下限量外，鉛、鎘、砷、銅元素含量均符合藥典規(guī)定。MTD實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給予以生藥量計(jì)26.4 g/kg的凍干粉后小鼠未出現(xiàn)死亡及不良反應(yīng)，此劑量為藥典規(guī)定最大用量的58倍。在20、40 ℃和強(qiáng)光[（4 500±500） Lx]照射條件下，凍干粉的抗凝血酶活性隨著貯藏時(shí)間的延長均明顯下降，在4 ℃條件下保存6個(gè)月其抗凝血酶活性仍符合藥典要求；在高濕（相對(duì)濕度為90%、75%）條件下，凍干粉的吸濕性極強(qiáng)。結(jié)論：本研究按照藥典標(biāo)準(zhǔn)對(duì)日本水蛭凍干粉建立了一套系統(tǒng)的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，可用于其質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 日本醫(yī)蛭；凍干粉；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；最大耐受量實(shí)驗(yàn)；穩(wěn)定性試驗(yàn)

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish the quality standard of Hirudo nipponica freeze-dried powder （called “freeze-dried powder” for short）， and to provide reference for controlling its quality. METHODS： A total of 3 batches of freeze-dried powder were collected， identified and tested according to the requirements of H. nipponica stated in 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia （part Ⅰ） （shorted for pharmacopoeia）； the antithrombin activity was also analyzed. The maximum tolerated dose （MTD） was used to investigate the toxicity. The stability was determined by designing temperature， humidity and strong light exposure tests. RESULTS： In the TLC of test sample， the same red spots were found in the corresponding location of the control drug chromatogram， and the same orange-red fluorescence spots were shown under the UV light （365 nm）. Average content of moisture in 3 batches of samples was 2.61%， and the levels of total ash， acid-insoluble ash， pH aflatoxin and antithrombin activity were 2.83%， 0.38%， 6.92， 0.28 ?g/kg and 257.0 U/g， respectively. The content of Pb， Cd， As and Cu were in line with the requirements of pharmacopoeia except that the content of Hg was slightly higher than lower limit of H. nipponica in pharmacopoeia. Results of MTD showed that no death and ADR was found in mice after giving 26.4 g/kg freeze-dried powder by the amount of crude drug， which was 58 times as large as the maximum dosage that the pharmacopoeia described. Under the condition of 20， 40 ℃ and strong light exposure [（4 500±500） Lx]， the anticoagulase activity of freeze-dried powder decreased significantly over time， while the anticoagulase activity of freeze-dried powder stored at 40 ℃ for 6 months was in line with the requirements of pharmacopoeia. Under the condition of high humidity （relative humidity were 90%， 75%）， freeze-dried powder showed a strong hygroscopicity. CONCLUSIONS： Established quality evaluation standard for freeze-dried powder according to pharmacopoeia standard could be used to control its quality.

KEYWORDS Hirudo nipponica； Freeze-dried powder； Quality standard； Maximum tolerated dose； Stability test

水蛭是我國傳統(tǒng)的常用中藥材， 2015年版《中國藥典》（一部）（簡稱“藥典”）收載的水蛭藥材為水蛭科動(dòng)物水蛭（Hirudo nipponica Whitman）、螞蟥（Whitmania nipponica Whitman）或柳葉螞蟥（Whitmania acranulata Whitman）的干燥全體，捕捉后用沸水燙死，曬干或低溫干燥，具有破血通經(jīng)、逐瘀消癥的作用，用于血瘀經(jīng)閉、癥瘕痞塊、中風(fēng)偏癱、跌撲損傷等癥的治療[1]。其中，水蛭（Hirdo nipponica）又名日本醫(yī)蛭，為吸血水蛭。從日本醫(yī)蛭唾液腺中提取的水蛭素是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的天然凝血酶抑制劑，具有很強(qiáng)的抗凝和溶栓作用，是治療人類心腦血管疾病的天然特效物質(zhì)[2]。藥典中水蛭藥材的質(zhì)量依據(jù)其抗凝血酶的活性進(jìn)行測定[1]。然而筆者在前期試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，鮮品日本醫(yī)蛭用冷凍干燥技術(shù)干燥[3]，再經(jīng)超微粉碎[4]制得的日本醫(yī)蛭凍干粉（簡稱“凍干粉”）具有很強(qiáng)的抗凝血酶活性，均在200 U/g以上，外購的日本醫(yī)蛭藥材和自制的日本醫(yī)蛭藥材分別只有25、55 U/g，且凍干粉抗凝血酶活性遠(yuǎn)高于經(jīng)常規(guī)方法處理（經(jīng)沸水處理后曬干）的日本醫(yī)蛭藥材。為保證凍干粉的質(zhì)量和用藥安全，本研究參考藥典水蛭項(xiàng)下考察項(xiàng)目，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。

1 材料

1.1 儀器

HPP 260恒溫恒濕箱（德國Memmert公司）；MGC- 100光照試驗(yàn)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；C2000-4半自動(dòng)凝血分析儀（北京普利生儀器有限公司）；BP61S十萬分之一電子天平（德國Sartorius公司）；XB220A萬分之一分析天平（瑞士Precisa公司）；7310P pH計(jì)（德國WTW公司）；Scientific X Series2電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國Thermo Fisher公司）；Multiwave微波消解儀（奧地利Abton Paar公司）；LC-30A-4500 Qtrap液相質(zhì)譜儀（日本島津公司）；Lot J0224A1黃曲霉毒素總量（B1/B2/G1/G2）免疫親和柱（北京華安麥科生物技術(shù)有限公司）。

1.2 藥材與試劑

凍干粉（荊州市致強(qiáng)生物科技有限公司，批號(hào)：20160928、20161115、20161118）；日本醫(yī)蛭對(duì)照藥材（筆者按照藥典方法自制，原藥材由湖北中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室陳科力教授鑒定為真品）；黃曲霉毒素混合對(duì)照品、凝血酶、牛纖維蛋白原（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：610001-201301、140625-201411、140626-201310）；鉛（批號(hào)：GSB04-1742-2004）、鎘（批號(hào)：GSB04-1721- 2004）、砷（批號(hào)：GSB04-1714-2004）、汞（批號(hào)：GSB04- 1729-2004）、銅（批號(hào)：GSB04-1725-2004）標(biāo)準(zhǔn)溶液（國家有色金屬及電子材料分析測試中心，質(zhì)量濃度均為 1 000 mg/L）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠20只，♀♂各半，體質(zhì)量18～22 g，購自湖北省疾病預(yù)防控制中心，質(zhì)量合格證號(hào)：42000600020615。

2 方法與結(jié)果

根據(jù)藥典水蛭項(xiàng)下內(nèi)容，對(duì)凍干粉逐項(xiàng)進(jìn)行檢測，并制訂相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.1 性狀

取3批凍干粉樣品置于白色稱量紙上，觀察其狀態(tài)、顏色和氣味。結(jié)果，3批樣品均為細(xì)粉末，顏色為深棕色或紅棕色，具有腥味，結(jié)果見表1。

2.2 鑒別

薄層鑒別參照藥典藥材水蛭項(xiàng)下的【鑒別】項(xiàng)進(jìn)行[1]。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜的相應(yīng)位置上顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；紫外光燈（365 nm波長）下顯相同的橙紅色熒光斑點(diǎn)，3批日本醫(yī)蛭凍干粉的薄層鑒別結(jié)果見圖1。

2.3 檢查

2.3.1 水分 參照2015年版《中國藥典》（四部）通則0832第二法[5]測定。結(jié)果，批號(hào)為20160928、20161115、20161118的3批凍干粉中水分含量分別為3.74%、2.22%、1.87%，平均為2.61%。藥典中規(guī)定水蛭藥材中水分含量不得高于18%，結(jié)合測量結(jié)果，初步規(guī)定日本醫(yī)蛭凍干粉水分不得超過6%。

2.3.2 總灰分 參照2015年版《中國藥典》（四部）通則2302法[5]測定。結(jié)果，批號(hào)為20160928、20161115、20161118的3批凍干粉的總灰分含量分別為2.71%、2.21%、2.23%，平均為2.83%。藥典規(guī)定水蛭藥材中總灰分含量不得超過8%，結(jié)合測量結(jié)果，初步規(guī)定凍干粉總灰分含量不得超過5%。

2.3.3 酸不溶性灰分 參照2015年版《中國藥典》（四部）通則2302法[5]測定。結(jié)果，批號(hào)為20160928、20161115、20161118的3批凍干粉的酸不溶性灰分含量分別為0.32%、0.41%、0.42%，平均為0.83%。藥典規(guī)定水蛭藥材中酸不溶性灰分含量不得超過2%，結(jié)合測量結(jié)果，規(guī)定凍干粉酸的不溶性灰分含量不得超過1%。

2.3.4 酸堿度 參照2015年版《中國藥典》（四部）通則0631“pH值測定法”[5]測定。結(jié)果，批號(hào)為20160928、20161115、20161118的3批凍干粉的pH值分別為6.74、6.98、7.05，平均為6.92。由于凍干粉的處理過程未添加任何物質(zhì)，pH值不發(fā)生顯著變化，此項(xiàng)與藥典中水蛭藥材要求保持一致，規(guī)定其pH范圍為5.0～7.5。

2.3.5 重金屬及有害元素 參照2015年版《中國藥典》（四部）通則2321“鉛、鎘、砷、汞、銅測定法”[5]，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定，結(jié)果見表2。

按藥典“水蛭”項(xiàng)下規(guī)定，藥材中鉛含量不得超過10 mg/kg、鎘含量不得超過1 mg/kg、砷含量不得超過5 mg/kg、汞含量不得超過1 mg/kg，對(duì)銅含量未作規(guī)定。3批樣品測定結(jié)果顯示，汞含量稍微偏高，可能與加工過程中和金屬物件接觸有關(guān)；其余重金屬元素的含量均在藥典水蛭藥材規(guī)定范圍內(nèi)。建議凍干粉中收載重金屬及有害元素含量檢查，限度參考藥典擬定。

2.3.6 黃曲霉毒素含量 參照2015年版《中國藥典》（四部）通則2351“黃曲霉毒素測定法”[5]，采用柱后衍生法（光化學(xué)衍生法）檢測3批凍干粉中黃曲霉毒素含量，結(jié)果見表3。

按藥典 “水蛭”項(xiàng)下規(guī)定，每1 000 g藥材中含黃曲霉毒素B1不得過5 ?g，含黃曲霉毒素G2、G1、B2 和B1的總量不得過10 ?g。3批凍干粉檢測結(jié)果顯示，其中黃曲霉毒素總量（3批平均為0.28 ?g/kg）均未超過規(guī)定。動(dòng)物類中藥材雖易感染黃曲霉毒素，但凍干粉經(jīng)冷凍處理后密封保存，此條件下不易感染黃曲霉毒素。然而凍干粉易吸潮，吸潮后較易感染，因此需要按藥典“水蛭”規(guī)定收載黃曲霉毒素檢查項(xiàng)。結(jié)合本研究結(jié)果，初步限定每1 000 g凍干粉中含黃曲霉毒素B1不得超1 ?g，含黃曲霉毒素G1、G2、B1、B2的總量不得超過3 ?g。

2.4 含量測定

參照藥典“水蛭”項(xiàng)下的【含量測定】方法測定[1]。結(jié)果，批號(hào)分別為20160928、20161115、20161118的3批凍干粉的活性分別為277.0、245.0、248.0 U/g（平均為257.0 U/g），均為藥典規(guī)定的16.0 U/g的15倍以上，制成凍干粉后大大提高了藥材的生物活性?？紤]大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)藥材質(zhì)量將有所下降，在保存過程中活性也會(huì)緩慢降低，故取樣品最低實(shí)測值的1/2左右作為凍干粉的活性標(biāo)準(zhǔn)，即規(guī)定本品每1 g含抗凝血酶活性應(yīng)不低于120.0 U。

2.5 急性毒性實(shí)驗(yàn)

根據(jù)祝曉雯等[6]研究結(jié)果，本研究采用最大耐受量法（MTD）[7]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將20只小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與空白組，先適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，每天喂食換水。凍干粉灌胃的最大質(zhì)量濃度為0.33 g/mL（生理鹽水為溶劑）。給藥前禁食12 h，實(shí)驗(yàn)組小鼠單次按最大灌胃體積40 mL/kg給藥（13.2 g/kg），空白組小鼠給與相應(yīng)量的生理鹽水，同日內(nèi)連續(xù)給藥2次，每次給藥間隔2 h，從給藥當(dāng)天開始連續(xù)觀察7 d，每天喂食換水。結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組小鼠除因灌胃死亡1只（對(duì)照組同號(hào)小鼠給藥補(bǔ)進(jìn)實(shí)驗(yàn)組）外，其它小鼠灌胃后均無不良反應(yīng)發(fā)生，未出現(xiàn)死亡，并且皮毛光滑，呼吸、進(jìn)食及大小便也均正常。給藥結(jié)束后，解剖兩組小鼠，其肝、腎組織均無明顯區(qū)別。采用SPASS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)血常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行t檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，兩組小鼠血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.6 穩(wěn)定性考察

2.6.1 溫度對(duì)抗凝血酶活性的影響 將試驗(yàn)分為3組，分別為20 ℃容器密閉（20 ℃-B）組、20 ℃容器敞開（20 ℃-K）組和40 ℃容器敞開（40 ℃-K）組，分別取3批樣品進(jìn)行試驗(yàn)。由于設(shè)備原因，20 ℃環(huán)境下相對(duì)濕度無法歸零，為40%；40 ℃環(huán)境下可以歸零，每隔5 d取樣觀察，參照藥典水蛭項(xiàng)下的【含量測定】項(xiàng)下方法[1]測量樣品在不同溫度下的抗凝血酶活性，用繪圖軟件Origin 9.0以時(shí)間為橫坐標(biāo)、抗凝血酶活性為縱坐標(biāo)繪制酶-時(shí)間變化圖，見圖2。同時(shí)，觀察于冰箱（4 ℃）中密封儲(chǔ)存3、6個(gè)月后3批凍干粉（取樣量為1 g）抗凝血酶活性變化，結(jié)果見表4。

根據(jù)圖2和表4結(jié)果可知，凍干粉的抗凝血酶活性對(duì)溫度較為敏感，考慮到運(yùn)輸、能源消耗等因素，建議凍干粉置于1～4 ℃環(huán)境下冷藏保存，根據(jù)目前數(shù)據(jù)來看，在此條件下保存6個(gè)月含量仍符合要求。

2.6.2 高濕試驗(yàn) 分別取3批樣品適量，置于稱量瓶中，平鋪，然后置于穩(wěn)定性試驗(yàn)箱中，設(shè)置試驗(yàn)箱溫度為25 ℃、濕度為90%，放置10 d。分別于放置第5天和第10 天時(shí)取樣觀察，測量其增質(zhì)量情況。結(jié)果，3批樣品在相對(duì)濕度為90%的高濕條件下，放置5 d的平均增質(zhì)量就超過了30%，說明樣品的吸濕性極強(qiáng)。因吸濕增重超過5%，保持溫度不變，在相對(duì)濕度為75%的條件下重復(fù)試驗(yàn)。結(jié)果，在相對(duì)濕度為75%的條件下，3批樣品放置5 d的平均增質(zhì)量均超過了15%，同樣遠(yuǎn)超過了吸濕增質(zhì)量不超過5%的規(guī)定[5]，結(jié)果見表5。建議日本醫(yī)蛭凍干粉密封保存。

2.6.3 強(qiáng)光照射試驗(yàn) 分別取3批樣品適量，置于表面皿中，平鋪，置于可調(diào)光照箱中，設(shè)置光照度為（4 500±500） Lx，放置10 d。分別于第5天和第10天取樣觀察，測量抗凝血酶活性。結(jié)果，強(qiáng)光照射對(duì)樣品有一定的影響，隨著時(shí)間推移，3批樣品的抗凝血酶活性均有一定下降，但相比高溫因素影響下降幅度小，結(jié)果見表6。建議避光儲(chǔ)存，但在短期日常操作中影響不大。

3 討論

關(guān)于水蛭的毒性和用量歷代有頗多異議，《神農(nóng)本草經(jīng)》中未記載其有毒，但張仲景在《傷寒論》抵當(dāng)湯中水蛭用量達(dá)到30枚[8]，用量極大?，F(xiàn)行版藥典規(guī)定用量（入煎劑）為1～3 g， 且多用經(jīng)炮炙后的滑石粉燙水蛭[1]，意在去其毒性和減其峻猛之性。但是，水蛭經(jīng)炮制后功效大減，加之用量輕微，實(shí)難以發(fā)揮其活血化瘀的功效[9]。祝曉雯等[6]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠口服19.2 g/kg生藥量水蛭超細(xì)粉混懸液后，未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)，無小鼠死亡，并且皮毛光滑、進(jìn)食及大小便正常；但發(fā)現(xiàn)水蛭水煎液有輕微毒性，其半數(shù)致死劑量（LD50）以生藥計(jì)為19.9 g/kg，安全范圍較大。本研究在MTD實(shí)驗(yàn)中采用質(zhì)量濃度為0.33 g/mL的凍干粉混懸液分2次給藥，此劑量（26.4 g/kg）是藥典規(guī)定最大用量的58倍，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，實(shí)驗(yàn)組小鼠并未出現(xiàn)不良反應(yīng)和死亡情況，說明日本醫(yī)蛭凍干粉的使用是比較安全的。考慮日本醫(yī)蛭凍干粉的抗凝血酶活性較強(qiáng)，參考藥典用量，建議用量每天為0.5～1 g，入丸、散或兌入湯藥。實(shí)際使用劑量可控制活性單位每天在80～100 U，約相當(dāng)于普通日本醫(yī)蛭藥材活性的5～6倍，是安全合理的。日本醫(yī)蛭是動(dòng)物藥，在儲(chǔ)存中處理不當(dāng)極其容易感染黃曲霉素而產(chǎn)生毒性，這也是大部分動(dòng)物藥出現(xiàn)毒性的重要原因之一。日本醫(yī)蛭凍干粉在無菌規(guī)范的條件下操作，防潮密封、冷藏保存，有效規(guī)避了這一誘因。

根據(jù)本研究結(jié)果可知，無論是在20 ℃還是40 ℃環(huán)境下，凍干粉的抗凝血酶活性均隨保存時(shí)間的延長而下降，前10 d下降得相對(duì)明顯，后15 d下降得相對(duì)平緩。但是，在40 ℃的環(huán)境下，活性下降要比20 ℃的環(huán)境快。凍干粉的抗凝血酶活性在相同的濕度下在敞開和密閉的條件下在短時(shí)間內(nèi)（如25 d）相差不大。由表4可以看出，于4 ℃冰箱中儲(chǔ)存抗凝血酶活性下降緩慢，批號(hào)為20160928的樣品在6個(gè)月內(nèi)每1 g凍干粉抗凝血酶活性下降了30 U，這可能由人為過多操作引起的；批號(hào)為20161115、20161118的樣品則在5個(gè)月內(nèi)基本穩(wěn)定，說明在4 ℃條件下，日本醫(yī)蛭凍干粉的抗凝血酶活性相對(duì)穩(wěn)定。

凍干粉是一種物種來源明確、加工方法較為先進(jìn)的水蛭商品和制劑中間體[10-11]，相較于日本醫(yī)蛭藥材及其炮制品，保留了更強(qiáng)的抗凝血酶活性，這對(duì)于充分利用寶貴的日本醫(yī)蛭資源，發(fā)揮藥物的療效有較大的促進(jìn)作用。凍干粉混懸液在26.4 g/kg的劑量下沒有發(fā)現(xiàn)其毒性，其加工和儲(chǔ)存方式有效地避免了黃曲霉菌的感染，提升了這一新藥材商品的品質(zhì)和安全性，且藥材為粉末狀更便于制劑和服用，是一種具有較好發(fā)展前景和巨大市場的水蛭藥材炮制品。通過性狀和薄層色譜可對(duì)日本醫(yī)蛭凍干粉的真?zhèn)芜M(jìn)行辨別，通過檢查水分、酸堿度、總灰分、酸不溶性灰分和重金屬及有害元素可以控制藥材質(zhì)量，通過含量測定可以判斷藥材的優(yōu)劣，從而達(dá)到控制藥材質(zhì)量的目的。且凍干粉在某些檢查項(xiàng)的限量和含量測定的限量上與原藥材和傳統(tǒng)炮制品相比，都有了極大提升，更能保證用藥的質(zhì)量和安全。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：83-84.

[ 2 ] 姜海波，竹艷剛，劉繼忠，等.水蛭素抑制凝血作用探討[J].河北中醫(yī)，2011，33（8）：1236-1237.

[ 3 ] 肖國鑫，朱琳，周亮，等.真空冷凍干燥炮制法對(duì)藏天麻活性成分提取的影響[J].經(jīng)濟(jì)林研究，2016，34（1）：164-167.

[ 4 ] 孫源源，杜光.超微粉碎技術(shù)在中藥中的應(yīng)用進(jìn)展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，33（1）：69-71.

[ 5 ] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：四部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：77-78、104、203- 206、224-225.

[ 6 ] 祝曉雯，宋嬿，金若敏，等.水蛭超細(xì)粉及水煎液活血化瘀作用的比較研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（1）：33-37.

[ 7 ] 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991：28.

[ 8 ] 酈永平，唐德才，呂春英.關(guān)于水蛭的毒性與用量[J].中醫(yī)雜志，1997，35（10）：635.

[ 9 ] 鮮光亞.水蛭毒性、用量、用法小議[J].中醫(yī)雜志，1993，31（2）：69-70.

[10] 畢肖林，倪斌，祖強(qiáng)，等.中藥制劑中間體制備中的中藥分離技術(shù)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2013，27（4）：79-83.

[11] 黃再芳，欒連軍，邵青，等.氣血并治方制劑中間體的質(zhì)量控制[J].中國中藥雜志，2005，30（8）：580-583.

（收稿日期：2017-10-16 修回日期：2018-02-01）

（編輯：林 靜）