李明風(fēng)

(恩平市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東 恩平 529400)

宮頸癌作為一種女性較為常見的生殖道惡性腫瘤之一[1]，具有癌前病變期較長的特點(diǎn)，且可逆轉(zhuǎn)。宮頸癌的癌前病變表現(xiàn)為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)，對CIN的早期診斷能夠有效預(yù)防并降低宮頸癌病發(fā)[2]。宮頸細(xì)胞學(xué)檢測、陰道鏡檢及高危型人乳頭瘤病毒(HPV)-DNA檢測是市場常用的檢測方法。高危型HPV可使細(xì)胞惡性增生，與女性腫瘤的形成有關(guān)。熒光定量PCR可有效檢測HPV，且特異性強(qiáng)、靈敏度高。目前，我國采用細(xì)胞學(xué)-陰道鏡檢-組織學(xué)檢查進(jìn)行診斷。本次研究，恩平市婦幼保健院采用聯(lián)合檢測的方法，與液基圖片細(xì)胞學(xué)(TCT)檢測、HPV-NDA檢測作比較，分析診斷結(jié)果，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年3月在本院接受治療的40例宮頸病變患者作為研究對象。患者年齡20～60歲，平均(39.2±2.8)歲。所有患者均符合以下條件：1)有性生活史；2)無物理治療史；3)未進(jìn)行過子宮切除手術(shù)或?qū)m頸手術(shù)；4)未妊娠或產(chǎn)后1個(gè)月及以上；5)經(jīng)TCT檢查后結(jié)果異常。

1.2 檢測方法

對所有患者均進(jìn)行TCT檢測、HPV-DNA檢測及兩者聯(lián)合檢測。

1)TCT檢測：檢測前，3 d內(nèi)不進(jìn)行陰道沖洗放藥，且24 h內(nèi)進(jìn)行性生活，同時(shí)要避開月經(jīng)期。將宮頸內(nèi)外的脫落細(xì)胞采用專用的取材器取置于盛有特殊固定緩沖液的容器中，送入細(xì)胞室后，用自動制片機(jī)進(jìn)行處理。振蕩混勻后解聚細(xì)胞團(tuán)，固定液經(jīng)高精度過濾膜過濾，使宮頸上皮細(xì)胞與其他細(xì)胞碎片、黏液及血液等雜質(zhì)分離，得到純凈的宮頸上皮細(xì)胞。將得到的宮頸上皮細(xì)胞收集到可調(diào)控細(xì)胞重疊密度的過濾器，轉(zhuǎn)移至玻片并固定染色。

2)HPV-DNA檢測：將無菌棉拭子擦掉宮頸口表面黏液，插入采樣刷均勻用力旋轉(zhuǎn)3周停留10 s后取出，將其置于無菌試管中，折斷多余部分保留采樣刷。用PCR結(jié)合熒光偏振檢測對標(biāo)本中的HR-HPV進(jìn)行檢測。按試劑盒手冊進(jìn)行操作，將200 μL細(xì)胞懸液置于微量離心(EP)管離心13 000 r·min-1(10 min)，棄去離心后的上清液，吸取50 μL細(xì)胞處理液于微量離心管中振蕩使其和沉淀充分混合后，將EP管置于100 ℃加熱器中10 min，將加熱后的EP管迅速放入4 ℃冰箱冷卻，然后再次離心13 000 r·min-1(10 min)，吸取2 μL所得上清液與配制的酶、引物及23 μL混合。

3)宮頸搔刮術(shù)或陰道鏡下活檢術(shù)：由專業(yè)醫(yī)師操作對所有患者進(jìn)行陰道鏡檢查，并對病灶進(jìn)行鏡下活檢，鏡下病灶不明顯在轉(zhuǎn)化區(qū)3、6、9、12 4點(diǎn)取材，頸管病變者進(jìn)行宮頸管搔刮。將所有標(biāo)本送至病理科閱片，閱片結(jié)果根據(jù)宮頸病變及程度分為：無宮頸上皮內(nèi)瘤變(NILM)、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和浸潤癌。實(shí)驗(yàn)涉及到的儀器及試劑：梯度PCR儀(上海啟步生物科技有限公司，型號：BSW-2T)，HPV分型偏振檢測試劑盒(廣東凱譜生物科技股份有限公司)，HPV-DNA檢測儀(成都愛生科技有限公司)。電子陰道鏡(深圳金科威公司，型號：SLC22000)

1.3 觀察指標(biāo)

比較三種方法與組織學(xué)診斷結(jié)果的符合率。比較其相互之間的靈敏度和特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 TCT單獨(dú)檢測的組織學(xué)診斷結(jié)果

TCT檢測后，有25例診斷為ACS-US之上，其中有21例組織學(xué)診斷結(jié)果為陽性(陽性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。TCT檢測與組織學(xué)診斷符合率為84.00%。具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 TCT單獨(dú)檢測的組織學(xué)診斷結(jié)果例

2.2 HPV-DNA單獨(dú)檢測的組織學(xué)診斷結(jié)果

HPV-DNA檢測后，有21例診斷為ACS-US之上，其中有16例組織學(xué)診斷結(jié)果為陽性(陽性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。TCT檢測與組織學(xué)診斷符合率為76.19%。具體數(shù)據(jù)見表2。

表2 HPV-DNA單獨(dú)檢測的組織學(xué)診斷結(jié)果例

2.3 聯(lián)合檢測的組織學(xué)診斷結(jié)果

聯(lián)合檢測后，有20例診斷為ACS-US之上，其中有18例組織學(xué)診斷結(jié)果為陽性(陽性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。聯(lián)合檢測與組織學(xué)診斷符合率為90.00%。其與TCT單獨(dú)檢測結(jié)果比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與HPV-DNA單獨(dú)檢測結(jié)果比較差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 三種檢測方法的靈敏度和特異度比較

TCT檢測的特異度為74.8%，靈敏度為92.6%；HPV-DNA檢測的特異度為75.4%，靈敏度為82.9%；聯(lián)合檢測的特異度為88.7%，靈敏度為96.5%。聯(lián)合檢測的特異度、靈敏度與單獨(dú)TCT或HPV-DNA檢測比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

調(diào)查顯示[3]，宮頸癌癌前病變期較長，且早期宮頸癌的治療效果較好，生存率可達(dá)90%。其癌前病變表現(xiàn)為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變，CIN的早期診斷能夠有效預(yù)防并降低宮頸癌病發(fā)[4-5]。因此，對宮頸癌的早期診斷尤為重要。

診斷宮頸病變的第一步是細(xì)胞學(xué)檢測，但其存在許多不足之處。如涂片不均勻、黏液過多遮蓋異常細(xì)胞、丟失細(xì)胞過多等影響診斷結(jié)果。膜式液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)(TCT)的出現(xiàn)彌補(bǔ)了這些不足[6]，按規(guī)定手法進(jìn)行操作，并且使用固定樣式的掃帚式刷子，刷頭全部進(jìn)入采集管中，保證標(biāo)本量，且涂片均勻，可提高閱片的準(zhǔn)確率。此外，膜式液基細(xì)胞學(xué)制片還可重復(fù)，有效提高了檢出率[7]。

大量研究表明[8]，HPV感染與宮頸癌的病變過程有很大關(guān)系。無HPV感染的患者的CIN發(fā)生逆轉(zhuǎn)的概率是HPV持續(xù)感染患者的4倍。因此，宮頸病變的早期檢測中HPV檢測也是一項(xiàng)重要指標(biāo)。且HPV-DNA檢測可排除可疑低度病變，提高診斷準(zhǔn)確率。此外，還可根據(jù)術(shù)后HPV檢測的結(jié)果推測是否有復(fù)發(fā)的可能。但這兩種方法仍存在各自的不足[9]，TCT檢測容易受操作者主觀因素影響，HPV-DNA檢測受病變程度大小的影響，且特異性低。因此，本院進(jìn)行聯(lián)合檢測，與TCT檢測、HPV-NDA檢測結(jié)果做對比。

對比結(jié)果表明，聯(lián)合檢測法與組織學(xué)診斷符合率(90.00%)明顯高于TCT檢測(84.00%)、HPV-NDA檢測(76.19%)；且特異度和靈敏度較高，分別為88.7%、96.5%。

綜上所述，聯(lián)合診斷的結(jié)果與組織學(xué)診斷結(jié)果的符合率較高，且特異度和靈敏度也較高，更有臨床使用價(jià)值。