席玉梅，吳繼周，李國堅，彭金林

(廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，南寧530021)

原發(fā)性肝細胞癌(HCC)的發(fā)病率和病死率居高不下。我國HCC發(fā)病率居世界前列。HCC位居我國癌癥死亡原因的第二位。研究[1]結(jié)果表明，我國肝癌的發(fā)生具有明顯的地域差異，廣西是我國肝癌高發(fā)區(qū)之一。本研究前期研究發(fā)現(xiàn)，在廣西少數(shù)民族聚集地區(qū)的肝癌發(fā)病具有明顯的家族聚集現(xiàn)象，并與遺傳存在一定的關(guān)系[2]。近年來，肝癌的發(fā)生與患者體內(nèi)免疫失衡的關(guān)系越來越受到關(guān)注,肝癌的家族聚集性可能與體內(nèi)免疫微環(huán)境有關(guān)。白細胞介素24(IL-24)是一種細胞因子，是目前發(fā)現(xiàn)的唯一一種具有腫瘤抑制和免疫刺激作用的雙重因子。IL-24作為一個重要因子參與了肝臟免疫調(diào)節(jié)的過程，但目前關(guān)于IL-24在肝癌的家族聚集現(xiàn)象中的作用相關(guān)報道罕見。2010年1月～2012年12月，我們觀察了133例肝癌高發(fā)家族中非肝癌成員血清IL-24的表達變化，分析血清IL-24表達與肝癌家族聚集性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 在廣西肝癌高發(fā)家族(發(fā)生2例或2例以上原發(fā)性肝癌)中選取133例未患肝癌成員為觀察組，以相同生活環(huán)境、相同性別、相同民族、相同HBsAg表達、年齡±5歲作為配對條件，選取133例無癌家族(家族中未發(fā)生任何惡性腫瘤)成員為對照組。兩組均為男67例、女66例，年齡2～80(31.8±17.9)歲，其中年齡≤25歲者52例、>25歲者81例；瑤族30例、壯族103例，HBsAg陽性25 例、HBsAg陰性108例。所有研究對象均排除甲肝、丙肝、丁肝、戊肝等其他類型肝炎。觀察組中一級親屬(親緣系數(shù)為1/2：父母、子女、同父母的兄弟姐妹)47例，二級親屬(親緣系數(shù)為1/4:祖父母、外祖父母、叔、伯、姑、舅、姨)38例，三級親屬(親緣系數(shù)為1/8:表兄妹、堂兄妹)48例。高發(fā)家族中發(fā)生2～3例肝癌的家族成員有63例，發(fā)生4例及以上肝癌的家族成員有70例。本研究獲得本院倫理委員會批準同意，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 血清IL-24檢測方法 抽取兩組研究對象空腹外周靜脈血5 mL,采用ELISA試劑盒測定兩組血清IL-24，試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行操作，使用美國的BIO-RAD的iMark全自動酶標儀進行檢測。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。對各組血清IL-24 水平進行正態(tài)性檢驗,偏態(tài)分布的資料用M(P25 ,P75)表示，配對資料比較采用Wilcoxon符號秩檢驗，非配對資料兩兩比較采用獨立樣本Mann-Whitney U秩和檢驗，進一步多組比較采用KrusKal-Wallis H 檢驗，高發(fā)組血清IL-24水平的影響因素采用多元線性回歸進行分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

觀察組、對照組血清IL-24水平分別為304.875 1(203.908 9,456.241 4)、378.332 7(268.792 1,633.006 8)ng/L，二者比較，Z=3.967，P<0.05。觀察組中男、女血清IL-24水平分別為306.129 8(208.428 8,404.476 8)、299.369 1(189.882 5,470.963 8)ng/L，壯族、瑤族血清IL-24水平分別為287.287 8(208.428 8,434.125 2)、401.184 7(188.951 6,585.411 5)ng/L，≤25歲、>25歲者血清IL-24水平分別為301.424 0(181.250 4,452.213 6)、304.875 1(220.060 5，458.063 5)ng/L，HBsAg陽性、陰性者血清IL-24水平分別為315.126 5(240.875 6,462.772 5)184.220 2(151.079 5,421.479 5)ng/L。對照組中男、女血清IL-24水平分別為411.806 5(283.338 3,609.952 7)、372.716 0(237.865 8,692.771 9)ng/L，壯族、瑤族血清IL-24水平分別為355.563 5(245.259 4,568.375 5)、489.615 6(384.906 8,854.101 1)ng/L，≤25歲、>25歲者血清IL-24水平分別為397.096 4(274.562 6,646.321 5)、378.103 3(265.210 0,605.560 4)ng/L，HBsAg陽性、陰性者血清IL-24水平分別為360.593 6(190.418 8,676.086 0)、385.672 0(281.057 9,609.579 0)ng/L。不同性別、年齡、民族、HBsAg表達情況的觀察組血清IL-24水平均低于對照組(P均<0.05)。觀察組中，不同性別、年齡間血清IL-24水平比較差異無統(tǒng)計學意義(Z=-0.115，-0.284；P均>0.05)，不同民族、HBsAg表達情況間血清IL-24水平比較差異具有統(tǒng)計學意義(Z=-2.048，-2.519；P均<0.05)。

肝癌高發(fā)家族成員中一級親屬、二級親屬、三級親屬血清IL-24水平分別為252.096 5(161.310 5，450.262 1)、320.620 6(251.409 5,548.999 4)、309.269 0(240.875 6,463.838 2)ng/L,一級親屬、二級親屬、三級親屬血清IL-24水平有顯著差異(P均<0.05)。進一步兩兩比較，一級親屬與二級親屬、三級親屬相比血清IL-24水平有顯著性差異(P均< 0.05)，二級親屬與三級親屬血清IL-24比較無明顯差異(P>0.05)。

肝癌高發(fā)家族中患有2～3例肝癌的家族與患有4例及以上肝癌的家族成員血清IL-24水平分別為404.476 8(184.220 2,605.155 4)、277.163 0(206.168 8,338.022 5)ng/L，二者比較，P<0.05。

將血清IL-24的對數(shù)值設為因變量，將性別、年齡、民族、HBsAg感染、先證者、親屬級別設為自變量進行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示，民族、HBsAg感染、先證者、親屬級別對高發(fā)家族成員血清IL-24水平有影響(P均<0.05)。見表1。

表1 肝癌高發(fā)家族成員血清IL-24表達的影響因素分析結(jié)果

3 討論

IL-24又稱為黑色素瘤分化相關(guān)基因-7(MDA-7)，是一種新發(fā)現(xiàn)的分泌型細胞因子[3]。IL-24基因位于人1號染色體1q32.2-1q41位點，由7 025個堿基組成，有7個外顯子和6個內(nèi)含子，cDNA全長為1 718 000，其主要閱讀框架編碼了一種由206個氨基酸組成的新蛋白質(zhì)[4]。IL-24表達于人體免疫器官(胸腺、脾臟等)、免疫細胞(T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞、單核細胞、巨噬細胞等)及正常的黑色素細胞和早期黑色素瘤細胞中。MDA-7/IL-24是一種新型細胞因子類抑癌基因，具有抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤新生血管生成，增強放化療敏感性、誘導細胞自噬、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學活性[5,6]。IL-24是至今為止發(fā)現(xiàn)的唯一一個既具有多種抗腫瘤生物活性又能調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境的細胞因子。Bhutia等[7]用IL-24注射乳腺癌裸鼠的一側(cè)進行治療，發(fā)現(xiàn)不僅抑制了注射部位的乳腺癌干細胞，而且對另一側(cè)的乳腺癌細胞也有抑制作用。Ma等[8]在小鼠結(jié)腸癌模型中發(fā)現(xiàn)IL-24可以促進CD4+T細胞和CD8+T細胞分泌IFN-γ，改變腫瘤免疫微環(huán)境，激活體內(nèi)免疫反應，從而發(fā)揮抗腫瘤效應。 Chada等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，IL-24的抗腫瘤“旁觀者效應”與體內(nèi)的免疫刺激、抗血管生成和受體介導的細胞毒性等有關(guān)，mda-7/IL-24是一種獨特的多功能細胞因子。輔助性T細胞(Th細胞)主要分為Th1細胞和Th2細胞。Th1細胞主要分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ，負責細胞免疫反應，具有抗腫瘤作用。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10，負責體液免疫反應。Th1/Th2細胞平衡在調(diào)節(jié)腫瘤免疫環(huán)境中發(fā)揮重要作用[10]。如果Th1/Th2細胞平衡遭到破壞，向Th2方向發(fā)生漂移，則腫瘤細胞會發(fā)生免疫逃逸，促進腫瘤的發(fā)生。盧庭婷等[11]研究發(fā)現(xiàn)，廣西肝癌高發(fā)家族成員中Th2 型細胞反應占優(yōu)勢狀態(tài)，Th1/Th2 細胞平衡遭到破壞，機體抗腫瘤及清除自身癌變細胞的能力下降，從而使癌細胞得以生存發(fā)展。推測在IL-24的作用下機體免疫系統(tǒng)被激活，Th1細胞因子表達水平增高，Th1/Th2平衡遭到破壞，向Th1方向發(fā)生了漂移，從而發(fā)揮抗腫瘤效應。本研究顯示，肝癌高發(fā)家族成員的總體血清IL-24水平低于無癌家族成員，進一步從不同人口結(jié)構(gòu)分層比較，肝癌高發(fā)家族成員的血清IL-24水平仍低于無癌家族成員。說明肝癌高發(fā)家族成員的血清IL-24水平低于正常水平，推測肝癌高發(fā)家族成員的免疫微環(huán)境發(fā)生了微弱變化，IL-24表達減少，Th1細胞因子減少，Th1/Th2平衡向Th2方向發(fā)生漂移，使高發(fā)家族成員的抗腫瘤能力下降，發(fā)生肝癌的機會增加。

HBsAg感染是肝癌發(fā)生最重要的誘發(fā)因素，HBV患者被列為肝癌的高危人群[12]。本研究對肝癌高發(fā)家族成員中HBsAg感染與肝癌易感性的關(guān)系進行分析，比較結(jié)果顯示高發(fā)家族成員中HBsAg陽性與HBsAg陰性成員的血清IL-24水平存在差異，差異有統(tǒng)計學意義。為排除其他因素的干擾進一步的多元線性回歸分析結(jié)果也證明HBsAg是高發(fā)家族成員血清IL-24水平發(fā)生變化的影響因素之一。這提示HBV感染成員體內(nèi)的免疫微環(huán)境發(fā)生了微弱變化，Th1/Th2細胞平衡受到破壞。但是HBV感染與免疫微環(huán)境的變化之間的相互影響機制還不清楚，到底是HBV感染導致高發(fā)家族成員的免疫微環(huán)境發(fā)生變化，還是高發(fā)家族成員的免疫微環(huán)境發(fā)生變化之后導致了HBV的易感性需要進行深入研究。本研究還發(fā)現(xiàn)，不同的民族對肝癌高發(fā)家族成員血清IL-24水平的影響不同，壯族成員血清IL-24水平顯著低于瑤族成員，與進一步的多元線性回歸分析結(jié)果相一致。推測壯族人群中更容易發(fā)生免疫逃逸而發(fā)生肝癌，具體的免疫微環(huán)境調(diào)節(jié)機制需要更深入的研究。但是本研究中壯族成員明顯多于瑤族成員，所以也不排除樣本量的影響。另外，性別和年齡對高發(fā)家族血清IL-24水平?jīng)]有顯著性影響，推測IL-24水平與肝癌家族聚集的關(guān)系與性別和年齡不存在密切相關(guān)性。

此外，本研究對高發(fā)家族成員的親屬級別和家族史進行分析發(fā)現(xiàn)，一級親屬的血清IL-24表達水平低于二級親屬、三級親屬。但是二級親屬的血清IL-24表達水平與三級親屬沒有呈現(xiàn)出差異，推測可能是由樣本量不足導致的。多因素分析結(jié)果也顯示肝癌高發(fā)家族血清IL-24水平受到親屬級別的影響。與此同時，本研究還發(fā)現(xiàn)隨著先證者例數(shù)的增多，高發(fā)家族成員血清IL-24表達水平呈現(xiàn)減少的趨勢，提示肝癌家族聚集現(xiàn)象與家族史和親緣關(guān)系密切相關(guān)，表明遺傳因素在其中起重要作用。

綜上所述，肝癌高發(fā)家族中非肝癌成員血清IL-24水平降低，且受到民族，HBsAg感染、先證者例數(shù)及親屬級別的影響，說明IL-24水平與肝癌家族聚集可能呈負相關(guān)，且受到遺傳因素的影響。