霍新新，馬永強(qiáng)，劉 霞，施青青，袁 毅

(中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，天津 300162)

心肌肥厚是心肌在長(zhǎng)期的高血壓狀態(tài)下為適應(yīng)心臟高負(fù)荷而逐漸肥大變厚的病理過程，長(zhǎng)期心肌肥厚會(huì)導(dǎo)致心肌重構(gòu)，造成心力衰竭，嚴(yán)重影響人類的健康和生存[1]。目前心肌肥厚的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，有研究表明，氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)是心肌肥厚的發(fā)病機(jī)制之一[2]。心肌肥厚狀態(tài)下，心肌細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過氧化[3]，同時(shí)炎性因子如白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等表達(dá)增多[4]，影響心肌細(xì)胞的正常功能[5]。復(fù)方丹參滴丸是一種傳統(tǒng)中藥，具有活血化瘀的功效，臨床上通常用于治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病心絞痛等疾病。近年來研究發(fā)現(xiàn)，其具有提高冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者機(jī)體抗氧化應(yīng)激的作用，且能夠顯著降低炎癥反應(yīng)[6]，但復(fù)方丹參滴丸在心肌肥厚治療中對(duì)心肌抗氧化和抗炎的作用尚未見系統(tǒng)報(bào)道，本研究旨在探討復(fù)方丹參滴丸對(duì)心肌肥厚大鼠心肌氧化應(yīng)激指標(biāo)和炎性因子的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性Sprague Dawley大鼠36只，體質(zhì)量200～220 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXX(京)2007-0001。所有大鼠飼養(yǎng)于12 h光亮/12 h黑暗、18～25 ℃屏障系統(tǒng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房?jī)?nèi)，自由進(jìn)食、水，飼以全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料，每2 d更換1次墊料。

1.2主要試劑與儀器異丙腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31021344；0.5 g·L-1)，復(fù)方丹參滴丸(天津天士力制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10950111)，卡托普利片(中美上海施貴寶制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31022986；12.5 mg)，生理鹽水(中國(guó)大冢制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20043271)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒(碧云天生物科技有限公司)，TNF-α 試劑盒(上海銳聰科技發(fā)展有限公司)，IL-6酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒、IL-10 ELISA試劑盒、腦鈉肽(brain natriuretic peptide，BNP)ELISA試劑盒、血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ) ELISA 試劑盒(上海百蕊生物科技有限公司)；MK3型酶標(biāo)儀(美國(guó)賽默飛世爾科技公司)，ZS83-1型內(nèi)切式組織勻漿器(浙江浙西機(jī)械廠)，賽多利斯 BS224S型電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，TD5A高速離心機(jī)(湖南赫西儀器有限公司)。

1.3大鼠分組及模型制備將36只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、卡托普利組及復(fù)方丹參滴丸200、400、800 mg·kg-1組(實(shí)驗(yàn)1、2、3組)，每組6只。模型組、卡托普利組及實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠背部皮下多點(diǎn)注射0.5 g·L-1異丙腎上腺素注射液(3 mg·kg-1)[7-8]，對(duì)照組大鼠背部皮下多點(diǎn)注射等體積的無菌生理鹽水；每日1次，共7 d。7 d后，對(duì)大鼠進(jìn)行心電圖檢測(cè)，以T波明顯抬升為造模成功，然后對(duì)照組、模型組大鼠按照每100 g體質(zhì)量給予生理鹽水1 mL灌胃，每日1次；實(shí)驗(yàn)1、2、3組和卡托普利組大鼠給藥前先將復(fù)方丹參滴丸和卡托普利片研磨，稱取復(fù)方丹參滴丸0.2、0.4、0.8 g以及卡托普利60 mg，分別加入10 mL生理鹽水，混合搖勻迅速吸取藥物溶液灌胃，每只大鼠每100 g體質(zhì)量給予藥物溶液1 mL，連續(xù)給藥12 周。

1.4大鼠心臟標(biāo)本的采集末次給藥后12 h測(cè)大鼠體質(zhì)量，腹腔注射100 g·L-1水合氯醛1 mL麻醉大鼠，打開胸腔，剝離心臟周圍的結(jié)締組織，分離心臟，用預(yù)冷的生理鹽水將心臟沖洗干凈。

1.5大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)測(cè)定取完整大鼠心臟，測(cè)質(zhì)量，計(jì)算心臟質(zhì)量指數(shù)(心臟質(zhì)量指數(shù)=大鼠心臟質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量)，仔細(xì)剝離左心室，測(cè)左心室質(zhì)量，計(jì)算心肌肥厚指數(shù)(心肌肥厚指數(shù)=大鼠左心室質(zhì)量/大鼠心臟質(zhì)量)。

1.6大鼠心肌組織中SOD、MDA、TNF-α、IL-6、IL-10、BNP和AngⅡ水平測(cè)定取大鼠左心室心肌組織 0.5 g 置于5 mL生理鹽水中，勻漿，3 000 r·min-1離心5 min，取上清液，采用ELISA法測(cè)定心肌組織中SOD、MDA、BNP、AngⅡ、IL-6、IL-10、TNF-α水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)比較結(jié)果見表1。各組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=10.102、4.173，P<0.05)。模型組、卡托普利組和實(shí)驗(yàn)1、2組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)3組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。卡托普利組及實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)均顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)1組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)顯著高于卡托普利組，實(shí)驗(yàn)3組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)顯著低于卡托普利組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)2組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)與卡托普利組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。隨著復(fù)方丹參滴丸給藥劑量的增加，實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)逐漸下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 各組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和心肌肥厚指數(shù)比較Tab.1 Comparison of cardiac mass index and myocardial hypertrophy index of rats among the groups

2.2各組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平比較結(jié)果見表2。各組大鼠心肌組織中BNP、AngⅡ水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=10.631、12.317，P<0.05)。模型組、卡托普利組和實(shí)驗(yàn)1、2 組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)3組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?？ㄍ衅绽M及實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)1組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平顯著高于卡托普利組，實(shí)驗(yàn)3組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平顯著低于卡托普利組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)2組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平與卡托普利組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。隨著復(fù)方丹參滴丸給藥劑量的增加，實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠心肌BNP和AngⅡ水平逐漸下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 各組大鼠心肌組織中BNP和AngⅡ水平的比較Tab.2 Comparison of the levels of BNP and AngⅡin myocardial tissues among the groups

2.3各組大鼠心肌組織中SOD、MDA、IL-6、IL-10和TNF-α水平的比較結(jié)果見表3。各組大鼠心肌組織中SOD、MDA、IL-6、IL-10、TNF-α水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=31.355、5.003、17.931、14.110、9.992，P<0.05)。模型組和實(shí)驗(yàn)1、2 組大鼠心肌組織中MDA、IL-6、IL-10和TNF-α水平顯著高于對(duì)照組，SOD水平顯著低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；卡托普利組大鼠心肌組織中MDA、IL-6和IL-10水平顯著高于對(duì)照組，SOD和TNF-α水平顯著低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)3組大鼠心肌組織中SOD、MDA、IL- 6和TNF-α水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，IL-10水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。卡托普利組及實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠心肌組織中MDA、IL-6、IL-10和TNF-α水平顯著低于模型組，SOD水平顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)1組大鼠心肌組織中MDA、IL-6、IL-10和TNF-α水平顯著高于卡托普利組，SOD水平顯著低于卡托普利組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)3組大鼠心肌組織中MDA、IL-6水平顯著低于卡托普利組，SOD、TNF-α水平顯著高于卡托普利組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IL-10水平與卡托普利組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)2組大鼠心肌組織中IL-6水平顯著低于卡托普利組，IL-10、TNF-α水平顯著高于卡托普利組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，SOD、MDA水平與卡托普利組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)2、3組大鼠心肌組織中MDA、IL-6和TNF-α水平顯著低于實(shí)驗(yàn)1組，SOD水平顯著高于實(shí)驗(yàn)1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)2組大鼠心肌組織中IL-10水平與實(shí)驗(yàn)1組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)3組大鼠心肌組織中IL-10水平顯著低于實(shí)驗(yàn)1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)3組大鼠心肌組織中MDA、IL-6、IL-10和TNF-α水平顯著低于實(shí)驗(yàn)2組，SOD水平顯著高于實(shí)驗(yàn)2組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 各組大鼠心肌組織中SOD，MDA、IL-6、IL-10和TNF-α水平的比較Tab.3 Comparison of the levels of SOD，MDA，IL-6，IL-10 and TNF-α in myocardial tissues among the groups

3 討論

心肌肥厚是心臟在長(zhǎng)期高血壓狀態(tài)下，心肌細(xì)胞負(fù)荷過大而產(chǎn)生的一種代償性反應(yīng)，是造成心力衰竭的主要原因之一。心肌肥厚是一個(gè)多因素、多機(jī)制的長(zhǎng)期的心臟病理變化過程，發(fā)生機(jī)制極其復(fù)雜，目前認(rèn)為其發(fā)生機(jī)制主要包括氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)[9]，氧化應(yīng)激參與了心肌肥厚的發(fā)生、發(fā)展過程。生理情況下，機(jī)體氧自由基產(chǎn)生與抗氧化系統(tǒng)維持動(dòng)態(tài)平衡[10]。心肌肥大時(shí)，心肌毛細(xì)血管密度降低，造成心肌能量供應(yīng)相對(duì)不足，心肌氧自由基生成增加和清除減少。同時(shí)，氧自由基可激活基質(zhì)金屬蛋白酶，導(dǎo)致各種生長(zhǎng)因子的表達(dá)，引起心肌膠原重建，間質(zhì)重塑，從而促進(jìn)心肌肥厚[11]。而炎癥反應(yīng)會(huì)趨化大量的炎性因子[12]，TNF-α等炎性因子會(huì)引起心肌細(xì)胞壞死并啟動(dòng)心肌細(xì)胞凋亡，IL-6、IL-10等炎性因子會(huì)對(duì)心肌細(xì)胞的完整性造成破壞[13-14]，破壞心肌血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，導(dǎo)致心肌功能嚴(yán)重下降，加速心力衰竭的發(fā)展[15]。在心肌肥厚狀態(tài)下，心肌細(xì)胞增生變大，心肌細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的BNP和Ang Ⅱ也顯著升高[16-17]，因此心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)、心肌組織中BNP和Ang Ⅱ水平是衡量心肌肥厚的指標(biāo)之一。

復(fù)方丹參滴丸是目前臨床上用于治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的一線中成藥，具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管、增加冠狀動(dòng)脈血流、降低心肌耗氧量、改善心肌缺血的作用[18]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，其具有抗炎、抗氧化作用[19-20]。有文獻(xiàn)報(bào)道，復(fù)方丹參滴丸能降低冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者IL-6、IL-10和TNF-α的產(chǎn)生，抑制炎癥反應(yīng)[21-22]，同時(shí)可以降低心肌氧自由基的產(chǎn)生，下調(diào)C-反應(yīng)蛋白和BNP的表達(dá)水平[23]。但目前復(fù)方丹參滴丸治療心肌肥厚的系統(tǒng)性研究資料較少，因此本研究就復(fù)方丹參滴丸對(duì)心肌肥厚的作用進(jìn)行探討。

本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)、心肌組織中BNP、Ang Ⅱ水平等衡量心肌肥厚的指標(biāo)顯著高于對(duì)照組，說明造模成功；同時(shí)大鼠心肌組織中MDA、IL-6、IL-10和TNF-α水平顯著高于對(duì)照組，SOD水平顯著降低，表明心肌肥厚狀態(tài)下心肌抗氧化應(yīng)激能力下降，炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，說明氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在心肌肥厚中起著重要作用?？ㄍ衅绽M大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)和心肌組織中BNP、Ang Ⅱ水平顯著低于模型組，表明卡托普利對(duì)心肌肥厚大鼠有一定的治療作用，且卡托普利組大鼠心肌組織中MDA、IL-6、IL-10、TNF-α水平顯著低于模型組，SOD水平顯著高于模型組，表明卡托普利可以降低心肌肥厚大鼠心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平和炎癥反應(yīng)，對(duì)心肌肥厚大鼠有一定的治療作用。但卡托普利組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)、心肌組織中BNP和Ang Ⅱ水平、氧化應(yīng)激指標(biāo)水平和炎性因子水平與對(duì)照組比較差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明卡托普利并不能完全逆轉(zhuǎn)大鼠心肌肥厚狀態(tài)。經(jīng)過復(fù)方丹參滴丸干預(yù)后，實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)及心肌組織中BNP、Ang Ⅱ水平顯著低于模型組，且隨著復(fù)方丹參滴丸劑量的增大而逐漸下降，表明復(fù)方丹參滴丸對(duì)心肌肥厚大鼠有一定的治療作用；同時(shí)實(shí)驗(yàn)1、2、3組大鼠心肌組織中SOD水平逐漸升高，MDA、IL-6和TNF-α水平逐漸下降，表明復(fù)方丹參滴丸對(duì)心肌肥厚大鼠的治療作用與降低心肌氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)有關(guān)。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)3組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)及心肌組織中BNP、Ang Ⅱ、MDA、IL-6水平顯著低于卡托普利組，心肌組織中SOD和TNF-α水平顯著高于卡托普利組，且大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)及心肌組織中BNP、Ang Ⅱ、SOD、MDA、IL-6、TNF-α水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而實(shí)驗(yàn)2組心臟質(zhì)量指數(shù)、心肌肥厚指數(shù)、心肌組織中BNP、Ang Ⅱ、SOD、MDA水平與卡托普利組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)1組各項(xiàng)指標(biāo)的治療效果不如卡托普利組，說明在本實(shí)驗(yàn)條件下，復(fù)方丹參滴丸對(duì)心肌肥厚大鼠的治療作用與劑量有關(guān)。

綜上所述，復(fù)方丹參滴丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌肥厚大鼠有一定的治療作用，其保護(hù)作用與降低心肌肥厚過程中心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)水平有關(guān)，且復(fù)方丹參滴丸對(duì)心肌肥厚大鼠的治療作用與劑量有關(guān)，在一定條件下其治療作用隨劑量的增大而增強(qiáng)。