劉春朋，付 晶*

（1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，廣州 510225；2.廣東省水禽健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510225）

溫度應(yīng)激是制約畜牧生產(chǎn)的一個(gè)主要因素，尤其是在北方地區(qū)，冷應(yīng)激是一個(gè)影響畜禽健康的普遍應(yīng)激源。冷應(yīng)激可以引起畜禽尤其是幼畜或仔畜的能量代謝紊亂、免疫機(jī)能下降、抗氧化功能受損、生產(chǎn)性能下降甚至死亡[1]。鵪鶉代謝旺盛，繁殖周期短，是一種高產(chǎn)高效的特禽，但其生物學(xué)特性比較特殊，鵪鶉在飼養(yǎng)過(guò)程中對(duì)環(huán)境溫度的要求是相對(duì)嚴(yán)格的，尤其是育雛期的溫度要比雞高，因此更容易受到冷應(yīng)激的影響[2]。

胸腺是禽類(lèi)免疫系統(tǒng)中重要的淋巴器官，參與細(xì)胞免疫的過(guò)程，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、產(chǎn)生的場(chǎng)所，在整個(gè)免疫系統(tǒng)中起著中樞作用。胸腺如果受到損失，則會(huì)引起機(jī)體免疫機(jī)能發(fā)生障礙[3]。已有研究表明，熱應(yīng)激可以引起雛雞胸腺組織形態(tài)損傷，發(fā)生細(xì)胞凋亡[4]。此外也有研究表明，冷應(yīng)激可以引起畜禽機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激損傷[5]。而目前關(guān)于冷應(yīng)激對(duì)雛鵪鶉胸腺組織抗氧化功能的影響未見(jiàn)報(bào)道。因此，文章研究以1日齡雛鵪鶉為研究對(duì)象，通過(guò)對(duì)雛鵪鶉胸腺組織抗氧化能力的檢測(cè)，探討冷應(yīng)激導(dǎo)致禽類(lèi)免疫功能下降的作用機(jī)制，以期為更好地研究鵪鶉內(nèi)環(huán)境打下基礎(chǔ)，也為探索促進(jìn)禽類(lèi)冷適應(yīng)的方法，提高禽類(lèi)的抗寒能力提供理論依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

1日齡健康沙維瑪特肉用公鵪鶉360只，購(gòu)自哈爾濱萬(wàn)家特禽養(yǎng)殖合作社。

1.2 主要試劑

考馬斯亮藍(lán)、MDA含量檢測(cè)試劑盒、SOD活性檢測(cè)試劑盒、GSH-Px活性檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 主要儀器

日立研究型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（型號(hào)為U-3900&3900H），購(gòu)自?xún)x德科學(xué)儀器有限公司。

2 方法

2.1 冷應(yīng)激模型的建立

2.1.1 急性冷應(yīng)激試驗(yàn)

急性冷應(yīng)激試驗(yàn)將180只1日齡沙威瑪特肉用鵪鶉飼養(yǎng)至15日齡，隨機(jī)分為6組，每組30只。對(duì)照組冷應(yīng)激0 h（即放在鵪鶉正常育雛期所需溫度34±1℃的舍內(nèi)飼養(yǎng)），其余5組分別進(jìn)行冷應(yīng)激處理，即把鵪鶉置于（12±1）℃的舍內(nèi)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)時(shí)間分別為0.5、1、3、6、12 h。在各時(shí)間隨機(jī)選取10只進(jìn)行剖殺，并采集法氏囊組織用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.1.2 慢性冷應(yīng)激試驗(yàn)

慢性冷應(yīng)激試驗(yàn)將180只1日齡沙威瑪特肉用鵪鶉飼養(yǎng)至15日齡，隨機(jī)分為6組，每組30只。前3組為對(duì)照組，即正常溫度下分別飼養(yǎng)5、10、20 d后剖殺；其余3組為應(yīng)激組，分別于（12±1）℃冷應(yīng)激環(huán)境下飼養(yǎng)5、10、20 d后剖殺取樣。

整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，各組雛鵪鶉均自由飲水和采食，并按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫。

2.2 胸腺組織抗氧化功能的檢測(cè)

按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，并在相應(yīng)的波長(zhǎng)處用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行讀數(shù)。用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總蛋白含量；用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)SOD活性；用DTNB顯色法檢測(cè)GSH-Px活性；用硫代巴比妥酸法檢測(cè)MDA含量。

2.3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

3 結(jié)果與分析

3.1 急性冷應(yīng)激時(shí)胸腺組織抗氧化能力的變化

急性冷應(yīng)激時(shí)胸腺組織抗氧化能力的變化見(jiàn)圖1A～1C。

圖1 急性冷應(yīng)激對(duì)胸腺組織抗氧化能力的影響

由圖1A可知，急性冷應(yīng)激時(shí)胸腺組織中GSHPx活性呈波動(dòng)性變化，與對(duì)照組相比，冷應(yīng)激0.5、1、3 h時(shí)，胸腺組織中GSH-Px活性顯著增加（P＜0.05），6和12 h時(shí)GSH-Px的活性顯著下降（P＜0.05）。由圖1B可知，急性冷應(yīng)激時(shí)胸腺組織SOD的活性隨著冷應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，與對(duì)照組相比，各時(shí)間點(diǎn)均顯著下降（P＜0.05）。由圖1C可知，急性冷應(yīng)激導(dǎo)致胸腺組織中MDA含量呈上升趨勢(shì)，與對(duì)照組相比，除0.5 h以外，其他各時(shí)間MDA含量均顯著升高（P＜0.05）。

3.2 慢性冷應(yīng)激時(shí)胸腺組織抗氧化能力的變化

慢性冷應(yīng)激時(shí)胸腺組織抗氧化能力的變化見(jiàn)圖2A～2C。

圖2 慢性冷應(yīng)激對(duì)胸腺組織抗氧化能力的影響

由圖2A和2B可知，慢性冷應(yīng)激導(dǎo)致胸腺組織中GSH-Px和SOD活性呈下降趨勢(shì)，且具有時(shí)間效應(yīng)。在5、10、20 d時(shí)GSH-Px和SOD活性均顯著低于對(duì)應(yīng)的對(duì)照組（P＜0.05）；由圖2C可以看出，MDA含量隨著冷應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)而呈上升趨勢(shì)，在5、10、20 d時(shí)MDA含量均顯著高于對(duì)應(yīng)的對(duì)照組（P＜0.05）。