蔡月花 馮 旭 王俊霞 王 莉 劉樹鋒 盧鶴真 徐增年 劉軍須 耿 琦

(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，石家莊 050017)

MIJ、HFJ近交系大鼠是河北醫(yī)科大學(xué)劉軍須、蔡月花等以本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的一對Wistar 大鼠為基代，經(jīng)10余年培育而成的近交系大鼠新品系[1-2]?，F(xiàn)MIJ已繁殖至F19代，HFJ已至F24代。HFJ大鼠表現(xiàn)為較高繁殖能力，其胎次間隔、窩產(chǎn)仔數(shù)和離乳率等繁殖指標(biāo)均高于封閉群Wistar大鼠，從而給品系維持、繁殖生產(chǎn)以及應(yīng)用帶來了極大的便利[2]。MIJ大鼠表現(xiàn)為群體內(nèi)穩(wěn)定出現(xiàn)雄性不育個(gè)體，不育個(gè)體睪丸下降延遲、生殖器官發(fā)育遲緩、精子生成減少等特征，與人類男性生殖障礙的隱睪、睪丸發(fā)育不全、少精等癥狀類似。因此，MIJ、HFJ近交系大鼠可作為生殖領(lǐng)域研究的良好動(dòng)物模型[3-4]。

血液生化指標(biāo)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的重要表型數(shù)據(jù)資料，在生命科學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。為了探究MIJ、HFJ大鼠的表型特征，并以此為基礎(chǔ)深入研究其高繁殖力、不育特性的機(jī)理，我們詳細(xì)測定了其血液生化指標(biāo)，以期為進(jìn)一步研究及應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4、8、12周齡雌、雄HFJ大鼠，每組20只，共120只；4、8、12周齡雌、雄性正常及雄性不育MIJ大鼠，每組20只，共180只。由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，合格證號為：1609352。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在屏障環(huán)境中飼養(yǎng)，相關(guān)環(huán)境指標(biāo)按照國家標(biāo)準(zhǔn)(GB 14925—2001)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 環(huán)境及設(shè)施》執(zhí)行；采用標(biāo)準(zhǔn)飼料飼喂，飲水采用超濾處理無菌水。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號：SYXK(冀)2013-0026。

1.2 主要儀器和試劑

采用南京特康-190 型全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血液生化指標(biāo)測定，試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 血液生化指標(biāo)檢測

采血前動(dòng)物禁食12 h，自由飲水，用3%的戊巴比妥鈉麻醉后，通過大鼠眼眶后靜脈叢取血，以3 000 r/min離心15 min，分離出血清，用全自動(dòng)生化儀檢測，指標(biāo)共15項(xiàng)，分別為：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLO)、谷酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、肌酐(CRE)、血清尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)，計(jì)算得出AST/ALT，A/G。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS(21)統(tǒng)計(jì)軟件對各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，并進(jìn)行t檢驗(yàn)和方差分析。

2 結(jié)果

血液生化指標(biāo)測定結(jié)果見表1～3。

2.1 HFJ雌性大鼠與MIJ雌性大鼠比較

4周齡HFJ雌性與MIJ雌性大鼠比較：ALT、ALP、GLO、BUN、UA、HDLC、LDLC差異有顯著性；8周齡HFJ雌性與MIJ雌性大鼠比較：AST、AST/ALT、ALP、UA、TG、LDLC差異有顯著性；12周齡HFJ雌性與MIJ雌性大鼠比較：ALT、AST/ALT、ALB、GLO、A/G、GGT、CRE、TC、LDLC差異有顯著性。

2.2 HFJ雄性大鼠與MIJ雄性正常大鼠比較

4周齡HFJ雄性與MIJ雄性正常大鼠比較：HDLC、LDLC差異有顯著性；8周齡HFJ雄性與MIJ雄性正常大鼠比較：ALT、AST/ALT、ALP、ALB、A/G、GLU、TC、HDLC、LDLC差異有顯著性；12周齡HFJ雄性與MIJ雄性正常大鼠比較：AST、AST/ALT、ALP、TP、ALP、CRE、GLU、UA、TG、LDLC差異有顯著性。

2.3 HFJ雄性大鼠與MIJ雄性不育大鼠比較

4周齡HFJ雄性與MIJ雄性不育大鼠比較：ALT、AST/ALT、TP、ALB、CRE、GLU、HDLC差異有顯著性；8周齡HFJ雄性與MIJ雄性不育大鼠比較：ALT、A/G、GGT、GLU、TG、TC、HDLC差異有顯著性；12周齡HFJ雄性與MIJ雄性不育大鼠比較：ALP、ALB、A/G、CRE、GLU、LDLC差異有顯著性。

表1 4周齡HFJ 和MIJ 近交系大鼠血液生化指標(biāo)比較Table 1 Comparability of serum biochemical parameters of HFJ and MIJ rat on four week

注：HFJ與同性別MIJ比較：#P<0.05，##P<0.01；不育雄鼠與HFJ雄鼠比較：★P<0.05，★★P<0.01；MIJ正常雄鼠與MIJ不育雄鼠比較：▲P<0.05，▲▲P<0.01；同品系不同性別比較：●P<0.05，●●P<0.01

Note: HFJ vs MIJ rats of the same sex:#P<0.05，##P<0.01; Infertile males vs HFJ males:★P<0.05，★★P<0.01; MIJ normal males vs MIJ infertile males:▲P<0.05，▲▲P<0.01；Compared with different sex of same strain:●P<0.05，●●P<0.01

表2 8周齡HFJ 和MIJ 近交系大鼠血液生化指標(biāo)比較Table 2 Comparability of serum biochemical parameters of HFJ and MIJ rat on eight week

注：HFJ與同性別MIJ比較：#P<0.05，##P<0.01；不育雄鼠與HFJ雄鼠比較：★P<0.05，★★P<0.01；MIJ正常雄鼠與MIJ不育雄鼠比較：▲P<0.05，▲▲P<0.01；同品系不同性別比較：●P<0.05，●●P<0.01

Note: HFJ vs MIJ rats of the same sex:#P<0.05，##P<0.01; Infertile males vs HFJ males:★P<0.05，★★P<0.01; MIJ normal males vs MIJ infertile males:▲P<0.05，▲▲P<0.01；Compared with different sex of same strain:●P<0.05，●●P<0.01

表3 12周齡HFJ 和MIJ 近交系大鼠血液生化指標(biāo)比較Table 3 Comparability of serum biochemical parameters of HFJ and MIJ rat on twelve week

注：HFJ與同性別MIJ比較：#P<0.05，##P<0.01；不育雄鼠與HFJ雄鼠比較：★P<0.05，★★P<0.01；MIJ正常雄鼠與MIJ不育雄鼠比較：▲P<0.05，▲▲P<0.01；同品系不同性別比較：●P<0.05，●●P<0.01

Note: HFJ vs MIJ rats of the same sex:#P<0.05，##P<0.01; Infertile males vs HFJ males:★P<0.05，★★P<0.01; MIJ normal males vs MIJ infertile males:▲P<0.05，▲▲P<0.01；Compared with different sex of same strain:●P<0.05，●●P<0.01

2.4 MIJ雄性正常與MIJ雄性不育比較

4周齡MIJ雄性正常與MIJ雄性不育比較：AST/ALT、ALB、CRE、GLU差異有顯著性；8周齡MIJ雄性正常與MIJ雄性不育比較：AST/ALT、GGT、TG、HDLC、LDLC差異有顯著性；12周齡MIJ雄性正常與MIJ雄性不育比較：ALP、GLU、TC差異有顯著性。

2.5 不同性別的HFJ近交系大鼠比較

4周齡HFJ近交系大鼠雌雄比較：ALP、TP、GLU、HDLC差異有顯著性；8周齡HFJ近交系大鼠雌雄比較：ALP、BUN差異有顯著性；12周齡HFJ近交系大鼠雌雄比較：ALT、AST、ALP、GGT、UA、TC、LDLC差異有顯著性。HFJ雄性大鼠的ALP指標(biāo)測定值在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)始終高于HFJ雌性大鼠。

2.6 不同性別的MIJ近交系大鼠比較

4周齡MIJ近交系大鼠雌雄比較：UA差異有顯著性；8周齡MIJ近交系大鼠雌雄比較：ALT、AST/ALT、ALP、ALB、GLU差異有顯著性；12周齡MIJ近交系大鼠雌雄比較：TP、GLO、A/G、GGT、GLU、UA差異有顯著性。

3 討論

血液生化指標(biāo)是反映動(dòng)物健康與否的重要而敏感的指標(biāo)，是動(dòng)物機(jī)體新陳代謝和生化反應(yīng)的標(biāo)志，也是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。根據(jù)血液生化指標(biāo)的改變以及改變程度與處理劑量的關(guān)系，可以反映實(shí)驗(yàn)處理導(dǎo)致動(dòng)物病變的性質(zhì)[5]。ALT、AST是反映肝臟功能的重要指標(biāo)，AST/ALT可以反映肝細(xì)胞的受損情況。血清中ALP的測定主要用于肝膽系統(tǒng)及骨骼系統(tǒng)疾病的診斷，ALP升高表示膽汁淤積造成的肝臟疾病。TP升高表示腎臟疾病、嚴(yán)重的滲出性皮膚病、腸道疾病、腸道腫瘤，降低表示腸道吸收不良、營養(yǎng)不良、免疫不全性疾病、胰腺外分泌不足。ALB升高表示嚴(yán)重的脫水，降低表示饑餓、寄生蟲病、慢性吸收不良、慢性肝臟疾病、腸道發(fā)炎、腎臟感染。GLO升高表示慢性炎癥、寄生蟲病、腫瘤、自體免疫性疾病。GGT存在于腎、胰、肝、脾、腸、腦、肺、骨骼肌和心肌等組織中，在肝內(nèi)主要存在于細(xì)胞漿和肝內(nèi)膽管上皮中。CRE與BUN是衡量腎功能的指標(biāo)。GLU對于診斷以及指導(dǎo)治療糖尿病具有重要意義。UA是嘌呤代謝的終產(chǎn)物，濃度升高多見于痛風(fēng)，核酸代謝增強(qiáng)的疾病，如白血病、多發(fā)性骨髓瘤、紅細(xì)胞增多癥、溶血性貧血、惡性貧血治療期等，腎功能受損的疾病UA值也增高。TG和TC是衡量血液中血脂水平的指標(biāo)。HDLC在血清中含量相對穩(wěn)定，可作為動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)指標(biāo)，減低見于冠心病、肝病等。LDLC與心血管疾病的發(fā)病率和病變程度呈負(fù)相關(guān)，被稱為抗動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)因子，增高是導(dǎo)致冠心病、心肌梗死、動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素之一，降低見于糖尿病、慢性肝病、肝硬化等[6-7]。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液生化指標(biāo)的測定已有很多文獻(xiàn)報(bào)道，其結(jié)果受到動(dòng)物、儀器、試劑、實(shí)驗(yàn)操作等多種因素的影響[8-9]。為了得到更為客觀的指標(biāo)測定結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)采集了較多的樣本數(shù)，每組20只，符合中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)特性數(shù)據(jù)庫的要求。并采集4、8、12周齡動(dòng)物，以觀察日齡對血液學(xué)指標(biāo)的影響。品系品種方面，測定HFJ、MIJ大鼠，可消除儀器、試劑等因素帶來的結(jié)果差異，起到相互參照的作用。因此，本實(shí)驗(yàn)取得的結(jié)果更為可信和客觀。

本實(shí)驗(yàn)測定了HFJ和MIJ 大鼠4周齡、8周齡和12周齡的血液生化指標(biāo)數(shù)據(jù)，對于進(jìn)一步了解HFJ、MIJ大鼠生物學(xué)特征提供了重要的參考依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HFJ和MIJ大鼠之間、MIJ雄性正常和MIJ雄性不育之間以及同品系的不同性別大鼠之間，均有多項(xiàng)指標(biāo)存在顯著差異。同時(shí)，在這些血液生化指標(biāo)中，沒有觀察到特殊高或低的血液生化指標(biāo)結(jié)果。即使MIJ雄性不育大鼠組的結(jié)果也同樣如此，因此，在血液生化指標(biāo)方面，HFJ、MIJ大鼠沒有缺陷指標(biāo)出現(xiàn)。