李 炯，葉 圳，顧宏剛，蔡 濱

（1.上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院，上海 200032；2. 上海中醫(yī)藥大學，上海 200032）

膿毒癥是指由感染引起的全身炎癥反應綜合征。盡管抗感染治療和器官功能支持技術取得了長足的進步，膿毒癥的病死率仍高達30%～70%。中醫(yī)藥治療作為治療手段的一種，在膿毒癥的治療中日益引起醫(yī)家的重視。本研究采用中藥復方錦紅湯干預來觀察其對膿毒癥大鼠血清炎癥介質的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對象 健康，雄性SD大鼠，清潔級，192只，體質量220～250 g，由實驗動物中心提供。

1.2 模型制備 膿毒癥動物模型的建立采用國際公認的盲腸結扎穿孔CLP膿毒癥模型。標準步驟主要參考Rittirsch等的報道[1]。

1.3 實驗藥物 錦紅湯由大黃9 g（后下），紅藤30 g，蒲公英30 g組成，由上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院中藥房提供。注射用亞胺培南針，由杭州默沙東制藥有限公司生產。

1.4 動物分組與處理 將192只大鼠常規(guī)適應性喂養(yǎng)后按照每組32只隨機分為正常對照組（正常組）、膿毒癥模型組（模型組）、假手術組、錦紅湯治療組（中藥組）、亞胺培南治療組（西藥組）、亞胺培南+錦紅湯組（聯(lián)合組）等6組。藥物劑量以成人用藥劑量按實驗動物體型系數換算法計算，參照陳奇主編《中藥藥理實驗方法學》，得錦紅湯6.3 g/（kg·d），及亞胺培南180 mg/（kg·d）。治療組造模后即予相應藥物干預，其余組均以等量生理鹽水干預，每組大鼠再按術后0、2、6、24 h分為4個亞組，每亞組8只。在各個時間點采集標本，所有大鼠于標本采集完畢后處死。各個時間點之前死亡的大鼠被排除在研究之外。

1.5 標本采集 實驗大鼠常規(guī)麻醉固定于手術臺上，腹部脫毛，常規(guī)消毒鋪巾，無菌條件下打開胸腹腔。取心臟血2 mL，取材時均使用單獨無菌器械以避免交叉污染。

1.6 觀察指標與檢測方法

1.6.1 各組大鼠大體情況觀察。

1.6.2 血清炎癥介質（CRP、ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α）檢測 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELⅠSA)測定。所有試劑盒均購自上海廣銳生物科技有限公司。

1.7 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS 19軟件進行統(tǒng)計學分析。

2 結果

2.1 大鼠大體情況觀察結果 正常對照組大鼠反應靈活，活動敏捷，皮光澤，毛緊貼皮膚，密集，鼻、唇濕潤干凈，眼睛明亮，大小便正常。模型組大鼠毛蓬松，活動遲緩，反應遲鈍。假手術組、抗生素組、錦紅湯組和聯(lián)合用藥組行為學表現(xiàn)方面與模型組比較有改善，但仍未能達到正常對照組水平。整個實驗過程中，未發(fā)生動物死亡。

2.2. 各組大鼠血清CRP結果比較（x± s ） 6組不同觀察時間點之間CRP表達有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不同組別和觀察時間之間沒有交互作用（P＞0.05）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢，其中模型組持續(xù)維持在高位，中藥組在6 h達到了高峰后快速下降，西藥組亦在6 h后開始出現(xiàn)了下降，聯(lián)合組在2 h出現(xiàn)高峰后即開始下降。各治療組在24 h時均明顯低于模型組。見表1。

表1 各組不同時間點CRP比較（μg/L，n = 6）

2.3 各組大鼠血清ⅠL-6結果比較（x± s ） 結果顯示，6組不同觀察時間點之間ⅠL-6表達有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不同組別和觀察時間之間有交互作用（P＜0.05）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢，其中模型組持續(xù)維持在高位，隨時間變化，中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后表達持續(xù)下降，聯(lián)合組始終低于中藥組、西藥組表達。各治療組在術后24 h的表達均明顯低于模型組。見表2。

表2 各組不同時間點ⅠL-6比較（ng/L，n = 6）

2.4 各組大鼠血清ⅠL-8結果比較（x± s） 6組不同觀察時間點之間表達有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；不同組別和觀察時間之間有交互作用（P＜0.01）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢，其中模型組持續(xù)維持在高位，隨時間變化模型組、中藥組、西藥組表達均持續(xù)下降，聯(lián)合組下降較中藥組、西藥組明顯。各治療組在術后24 h的表達均明顯低于模型組。見表3。2.5 各組大鼠血清TNF-α結果比較（x± s） 6組不同觀察時間點之間TNF-α表達有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不同組別和觀察時間之間沒有交互作用（P＞0.05）。模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組在造模后均出現(xiàn)了上升趨勢，其中模型組持續(xù)維持在高位，中藥組、西藥組、聯(lián)合組表達持續(xù)下降，聯(lián)合組下降較中藥組、西藥組明顯。各治療組在術后24 h的表達均低于模型組。見表4。

表3 各組不同時間點ⅠL-8比較（ng/L，n = 6）

3 討論

CRP作為由肝臟合成的一種急性期反應蛋白，在臨床上常用于急性感染性疾病的診斷和鑒別診斷。本實驗在造模后CRP出現(xiàn)了一定程度的升高，經治療后能迅速下降。近年來對膿毒癥大鼠的研究證實了膿毒癥早期就出現(xiàn)了TNF-α水平的顯著升高[2-4]。然后其進一步作用于巨噬細胞或樹突狀細胞，從而產生大量的ⅠL-6、ⅠL-8等繼發(fā)性細胞因子。促炎因子及抗炎因子同膿毒癥病情及預后呈顯著相關性，膿毒癥死亡組患者TNF-α、ⅠL-6均顯著上升[5]。朱永研究表明，經過治療，膿毒癥患者TNF-α、ⅠL-6 均較治療前顯著下降，癥狀的好轉與炎癥因子的下降

表4 各組不同時間點TNF-α比較（ng/L，n = 6）

存在一定關系[6]。ⅠL-6與SⅠRS的嚴重程度以及致死率關系密切[7]。而且進行動態(tài)監(jiān)測血清 ⅠL-6濃度變化趨勢有助于膿毒癥預后的判斷[8]。在吳媛的研究中，膿毒癥患者ⅠL-6、ⅠL-8 濃度均隨著時間推移和病情加重而呈現(xiàn)逐漸增高的動態(tài)變化[9]，許多研究顯示，膿毒癥患者血中 ⅠL-6 水平明顯增高，且增高幅度與膿毒癥嚴重程度、膿毒癥休克和不良預后相關[10-11]。本實驗在造模后ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α表達出現(xiàn)了一定程度的升高，經治療后與模型組比較下降明顯，與文獻報道一致。本項目所采用的中藥復方錦紅湯是以上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院中西醫(yī)結合外科根據中醫(yī)“六腑以通為用”原理，基于炎癥性急腹癥“臟腑不通、邪熱橫逆脾土、毒熱內蘊、熱壅腸腑”的基本病機，在復方大黃牡丹湯基礎上研制而成，用以外科炎癥性急腹癥的治療，取得良好臨床療效[12-15]。全方由大黃、紅藤、蒲公英組成，具有清熱解毒、通里攻下作用?，F(xiàn)代藥理學研究表明，蒲公英具有抗炎、抗氧化、利尿、利膽、抗風濕、抗菌作用[16]；大黃主要成分大黃素能明顯地抑制LPS誘導的內皮細胞中NF-κB的活化和ⅠκB的降解來抑制內皮細胞促炎因子ⅠL-1β和ⅠL-6，趨化因子ⅠL-8和MCP-1的表達，使LPS誘導的巨噬細胞炎癥因子的表達減少，并呈時間依賴性[17-18]；紅藤則具有抗炎、抑菌、抗氧化、抗病毒、耐缺氧、抗過敏、擴張冠狀動脈和抗凝血的作用[12,15,19]。劉霖研究表明，中西醫(yī)聯(lián)合用藥治療能改善大鼠膿毒癥休克癥狀，其中機制可能是通過抑制ⅠL-6的表達[20]。本研究中，中藥組、西藥組、聯(lián)合組ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α表達出現(xiàn)下降，且西藥組要優(yōu)于中藥組，而聯(lián)合組要優(yōu)于中藥組及聯(lián)合組。說明了中藥錦紅湯對于抑制ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α的表達從而達到治療膿毒癥的作用是有效的。

總之，炎癥因子CRP、ⅠL-6、ⅠL-8、TNF-α是膿毒癥患者病情嚴重程度及預后的可靠生物學標志，應用中藥錦紅湯可顯著抑制炎癥因子，中西醫(yī)結合治療是治療膿毒癥的有效治療手段，具有重要臨床應用價值。