沈俊逸，趙智明，劉春麗，壯雨雯，徐文俊，蔡 輝

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，江蘇 南京 210002

腦梗死是目前繼癌癥和心血管疾病之后危害人類生命健康的第三大疾病。每年全球約有1 500萬人發(fā)病，死亡率高達17%～35%，而存活下來的患者中3%～6%遺留殘疾［1-3］。糖尿病致代謝紊亂是引發(fā)腦梗死的一個獨立危險因素［4-7］。正常機體如果長期處在高血糖環(huán)境中脂類的代謝過程會發(fā)生紊亂、異常，進而引起蛋白質(zhì)過度糖基化。而蛋白質(zhì)的過度糖基化會使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、溶解性、配位結(jié)合等理化性質(zhì)發(fā)生改變。這些過度糖基化的蛋白終產(chǎn)物不能在體內(nèi)有效代謝降解，沉積于血管內(nèi)壁，久之，加速了血管病變［8-11］。中藥復(fù)元醒腦湯在治療糖尿病腦梗死中顯示出了良好的治療效果，本研究通過糖尿病腦梗死大鼠模型觀察復(fù)元醒腦湯對其血糖、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)的調(diào)節(jié)作用以及對神經(jīng)缺損行為的影響，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1動物與試劑健康雄性SD大鼠150只，體質(zhì)量(250±25)g，購自上海杰思捷實驗動物有限公司，動物合格證：SCXK(滬)2011-009；2，3，5- 氯化三苯基四氮唑(TTC)購于正大青春寶藥業(yè)；水合氯醛購于上海國藥集團化學(xué)試劑公司；鏈脲佐菌素(STZ)購于美國Sigma公司。

1.2動物分組將實驗大鼠按隨機數(shù)字表法隨機均分為正常組、假手術(shù)組、模型組、西藥治療組、中藥治療組，每組30只。

1.3模型制備腹腔注射STZ 50 mg/kg后采用高能量高脂肪食物飼養(yǎng)2周復(fù)制糖尿病大鼠模型。

1.4腦梗死模型制備在STZ致糖尿病模型的基礎(chǔ)上，采用線栓法制備糖尿病腦梗死動物模型［11］。

1.5灌胃給藥中藥治療組大鼠灌胃復(fù)元醒腦湯［人參(單煎)10 g，三七 10 g，石菖蒲 12 g，水蛭10 g，益母草 30 g，生南星 15 g，制大黃(后下)9 g，濃度 388 g/L］10.4 g/kg(體質(zhì)量)/d，2 次 /d，連續(xù)14天。西藥治療組灌胃二甲雙胍(君力達制藥有限公司，批號：H20058567，規(guī)格：0.5g×12 粒×4板)27 mg/kg(體質(zhì)量)，2 次 /d；尼莫地平(中美上海施貴寶制藥有限公司，批號：11080056，規(guī)格：20mg×12片×2板)2.16 mg/kg(體質(zhì)量)，2次 /d，連續(xù) 14天。模型組、假手術(shù)組灌胃等容量生理鹽水。

1.6血糖、膽固醇和甘油三酯檢測注射STZ 1周后大鼠尾靜脈采血測血糖值。腦梗死造模前后測定各組大鼠血脂水平，應(yīng)用氧化酶法測定大鼠血清總膽固醇濃度；使用甘油磷酸氧化酶法測定大鼠血清中TG的濃度。

1.7神經(jīng)缺損行為體征評價造模成功后大鼠完全清醒，術(shù)后3小時及7天根據(jù)Bederson神經(jīng)缺損行為體征評分法對大鼠神經(jīng)缺損行為體征進行綜合等級評分。將大鼠提尾懸空1米，觀察前肢屈曲情況，具體評分標準0級(0分)：無明顯神經(jīng)缺損癥狀；Ⅰ級(1分)：實驗動物腦梗死對側(cè)前肢回收屈曲內(nèi)收，同時實驗動物同側(cè)前肢向地面伸展；Ⅱ級(2分)：實驗動物Ⅰ級體征+實驗動物俯臥于桌面時，從腦梗死側(cè)向?qū)?cè)推動大鼠時阻力降低；Ⅲ級(3分)：實驗動物Ⅱ級體征+實驗大鼠行走時向腦梗死對側(cè)肢體旋轉(zhuǎn)(呈追尾狀)，甚至?xí)A倒。分值大于或等于Ⅰ級時表明實驗動物模型制作成功。

1.8統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16.0分析數(shù)據(jù)，計量資料以(±s)表示，不同組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1大鼠造模生存例數(shù)入組150只大鼠，每組30只，正常組死亡2只。另外120只大鼠在糖尿病造模成功后，在高脂飼料喂養(yǎng)的條件下死亡20只。剩余糖尿病模型大鼠100只分為4組，每組25只。假手術(shù)組2只死亡；模型組10只死亡；西藥治療組9只死亡；中藥治療組7只死亡。因此各實驗組入組數(shù)據(jù)例數(shù)分別為正常對照組28例，假手術(shù)組23例，模型組15例，西藥治療組16例，中藥治療組18例。

2.2復(fù)元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠血糖水平的影響注射STZ 1周后，各組大鼠空腹血糖高于正常組；手術(shù)(線栓)后7天，糖尿病模型(假手術(shù)組、模型組、中藥治療組、西藥治療組)與正常組相比，血糖濃度顯著升高(P＜0.01)；手術(shù)后7天，與模型組相比，中藥治療組和西藥治療組大鼠血糖濃度降低(P＜0.01)，說明西藥和中藥均有降低糖尿病模型大鼠血糖的作用，見表1。

表1 各組大鼠手術(shù)前后血糖變化情況(±s) mmol/L

表1 各組大鼠手術(shù)前后血糖變化情況(±s) mmol/L

注：＊＊表示與正常組比較，P＜0.01；##表示與模型組比較，P＜0.01；△表示與術(shù)前比較，P＜0.01

組別 只數(shù) 術(shù)前 術(shù)后7天正常組 28 8.03±1.27 7.71±1.20假手術(shù)組 23 24.60±4.36 28.29±3.65＊＊△模型組 15 24.26±3.53 32.35±4.12＊＊△西藥治療組 16 26.76±5.08 22.13±3.71##＊＊△中藥治療組 18 24.01±4.87 20.72±3.44##＊＊△

2.3復(fù)元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠血清TC水平的影響與正常組相比，各組大鼠腦梗死術(shù)前血清中TC濃度提升(P＜0.01)。手術(shù)后7天假手術(shù)組、模型組、西藥治療組大鼠血清TC含量未降低，與模型組相比，中藥治療組TC濃度下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見表2。

表2 各組大鼠手術(shù)前后TC變化情況 mmol/L

2.4復(fù)元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠血清TG的影響與正常組大鼠相比，各組大鼠腦梗死術(shù)前血清TG濃度提升(P＜0.01)。手術(shù)后7天假手術(shù)組、模型組、西藥治療組大鼠血清中TG未降低，與模型組相比，中藥治療組大鼠血清TG濃度降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見表3。

表3 各組大鼠手術(shù)前后TG變化情況 mmol/L

2.5復(fù)元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠神經(jīng)缺損行為的影響造模結(jié)束后假手術(shù)組和正常組大鼠神經(jīng)功能缺損評分均為0分；模型組、中藥治療組及西藥治療組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)行為學(xué)異常，主要表現(xiàn)為右側(cè)霍納征(上瞼下垂，瞳孔散大)和左側(cè)前肢為主的癱瘓，表現(xiàn)為提尾時左側(cè)肢體屈曲內(nèi)收緊貼胸壁，行走時失去正常的狀態(tài)，呈現(xiàn)出左側(cè)轉(zhuǎn)圈，或向左側(cè)傾倒等。各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分均高于正常組、假手術(shù)組，提示腦梗死模型造模成功；灌胃治療7天后中藥治療組與西藥治療組大鼠Bederson評分降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見表 4。

表4 各組大鼠手術(shù)后Bederson評分比較 分

3 討論

糖尿病并發(fā)腦梗死以其居高不下的致殘率和病死率嚴重威脅著人類健康。糖尿病會增加腦卒中的風(fēng)險，糖尿病患者血糖控制受損，腦梗死灶更容易擴大，持續(xù)高血糖條件下糖類的有氧代謝過程發(fā)生障礙，生成大量有害物質(zhì)乳酸，造成乳酸性酸中毒，最終誘發(fā)正常細胞內(nèi)的高滲狀態(tài)，細胞缺氧，從而加劇缺血腦組織損害［12］。Kwon 等［13］報道，相比于糖尿病患者，糖尿病腦卒中患者發(fā)病率更高，同時腦卒中會引發(fā)認知障礙［14］。丁承宗等［15］通過大量CT分析顯示糖尿病引發(fā)的腦梗死患者中超過一半伴隨多發(fā)腔梗灶，并累及大腦中動脈支配區(qū)。

清代醫(yī)家沈金鰲認為“元氣虛為中風(fēng)之根也?！蹦X梗死的發(fā)病主要以元氣虛損為本,痰瘀互結(jié)及痰熱生風(fēng)為核心病機。痰、瘀為元氣虛導(dǎo)致的中間病理產(chǎn)物，貫穿中風(fēng)始終,痰瘀互阻，生熱化風(fēng)，風(fēng)火相煽，乃發(fā)“風(fēng)”。據(jù)此，本研究以補益元氣為主，佐逐瘀化痰、泄熱熄風(fēng)、醒腦開竅之法，自擬復(fù)元醒腦湯，方中人參大補元氣為君，扶正祛邪，為治本之藥；石菖蒲芳香走竄，功擅豁痰辟穢，開竅寧神；膽南星清熱化痰之力強，且能熄風(fēng)定驚，擅祛頑痰、風(fēng)痰；三七化瘀止血，活血定痛；水蛭為化瘀峻品，消癥破結(jié)通經(jīng)。張錫純認為本品“破瘀血而不傷新血，專入血分而不損氣分”，以上共為臣藥。大黃苦降，功專通腑瀉下，又具有清熱瀉火，涼血解毒之功，且有逐瘀通經(jīng)之功效，與三七通澀并用，活血止血，導(dǎo)濕熱、瘀熱外出，熱毒下泄，使氣血調(diào)達，經(jīng)絡(luò)通暢；益母草為血家圣藥，不僅能活血調(diào)經(jīng)，且有利尿消腫，清熱解毒之功，尤善解郁平肝，活血祛風(fēng)，均為佐藥。諸藥合用，方小力專，共奏“復(fù)元醒腦，逐瘀化痰，泄熱熄風(fēng)”之功。

本研究表明復(fù)元醒腦湯對糖尿病腦梗死大鼠的神經(jīng)缺損有修復(fù)作用。很多學(xué)者認為血脂的增高是腦梗死的誘發(fā)因素，但是血脂異常與腦梗死之間的關(guān)系尚未闡明。高TC和TG易誘發(fā)動脈粥樣硬化。動脈粥樣硬化引起血栓形成，進而引起腦梗死。高血脂會引起多種凝血因子升高，增加血小板凝集，當血管內(nèi)皮細胞受損時會引發(fā)血栓形成［16-18］。STZ誘導(dǎo)聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)的糖尿病腦梗死大鼠血脂水平較高［19］，降低中藥治療組大鼠血清TG和TC低于模型組，提示復(fù)元醒腦湯對血脂有較好的干預(yù)作用，與模型組相比復(fù)元醒腦湯能夠降低糖尿病腦梗死大鼠的血糖水平。