董惠峰，劉 芳,2，張俊霞，李 源,2，張鳳洪,2*

(1.鼎正動物藥業(yè)(天津)有限公司 天津 300383；2.天津市飼用微生物制劑企業(yè)重點實驗室 天津 300383)

恩諾沙星作為廣譜的動物專用抗菌藥物，已廣泛應(yīng)用于多個國家的獸醫(yī)臨床，對多種病原菌引發(fā)的疾病都起到了良好的防治效果。本試驗按照獸藥新制劑申報的指導(dǎo)原則，并參考有關(guān)文獻(xiàn)，對偏堿性恩諾沙星注射液進(jìn)行了臨床前靶動物的安全性試驗，為獸醫(yī)臨床的安全用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

偏堿性恩諾沙星注射液，由鼎正動物藥業(yè)(天津)有限公司提供。

1.2 試驗動物及飼料

AA白羽肉雞雛，購自長春市農(nóng)科院飼養(yǎng)場；肉雞系列飼料(一號料)，購自長春市吉源飼料廠，批號20140916。

1.3 試驗方法

將試驗動物隨機(jī)分為 5組，每組 50只，在前期實驗確定的最佳給藥劑量的基礎(chǔ)上，分別以 1倍(1.75,mL/kg)、3 倍(5.25,mL/kg)、5 倍(8.75,mL/kg)、10倍(17.5,mL/kg)劑量連續(xù) 3,d給藥，觀察臨床癥狀，分別于末次給藥、停藥7,d后隨機(jī)抽取10只試驗雛雞的頸靜脈血，剖檢摘取采血試驗雛雞的心、肝、脾、肺、腎和法氏囊等臟器并稱重、記錄，計算各臟器的臟器系數(shù)(臟器重/體重)，通過肉眼觀察和 HE染色分別對各臟器的外觀和組織病理變化進(jìn)行檢查。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1 臨床癥狀表現(xiàn)

給藥后每天觀察記錄雛雞的臨床癥狀變化，精神狀態(tài)、食欲、糞便、呼吸等。健康對照組的雛雞精神狀態(tài)良好，食欲、排便及呼吸正常；給予 1倍劑量(推薦劑量)偏堿性恩諾沙星注射液組的雛雞，精神狀態(tài)、食欲、糞便、呼吸均表現(xiàn)正常，與不給藥對照組的雛雞無明顯差異；給予3倍及以上劑量的偏堿性恩諾沙星注射液組的雛雞喜臥、精神沉郁、排黃白色稀便，部分雛雞精神萎靡、死亡(見表1)。

2.2 血液生理指標(biāo)測定

血液生理指標(biāo)測定結(jié)果顯示(見表2)，給予1倍劑量(推薦劑量 1.75,mg/kg)試驗雛雞各指標(biāo)在末次給藥結(jié)束和停藥 7,d后，與健康對照組相比差異不明顯；給予 3倍劑量(5.25,mg/kg)試驗雛雞各指標(biāo)在末次給藥結(jié)束和停藥 7,d后，與健康對照組相比，除白細(xì)胞差異顯著外，其余各指標(biāo)均差異不顯著；給予5倍劑量(8.75,mg/kg)和10倍劑量(17.5,mg/kg)試驗雛雞各指標(biāo)在末次給藥結(jié)束后，與健康對照組相比，白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞差異顯著，停藥 7,d后，中性粒細(xì)胞恢復(fù)正常，白細(xì)胞差異仍顯著，其余各指標(biāo)均差異不顯著。

表1 偏堿性恩諾沙星注射液對雛雞臨床表現(xiàn)的影響/%(±s，n＝10)Tab.1 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection clinical manifestation of chicks/%(±s，n＝10)

表1 偏堿性恩諾沙星注射液對雛雞臨床表現(xiàn)的影響/%(±s，n＝10)Tab.1 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection clinical manifestation of chicks/%(±s，n＝10)

組別 動物數(shù) 給藥劑量 臨床癥狀健康對照組 50 不用藥 精神、食欲均正常1倍劑量組 50 1.75,mg/kg 精神、食欲均正常3倍劑量組 50 5.25,mg/kg 少部分雛雞精神萎靡，呼吸困難，口流粘液，食欲減退5倍劑量組 50 8.75,mg/kg 部分雛雞精神萎靡，呼吸困難，口流粘液，食欲減退，有死亡10倍劑量組 50 17.5,mg/kg 大部分雛雞精神萎靡，呼吸困難，口流粘液，食欲減退，有死亡

表2 偏堿性恩諾沙星注射液對雞血液學(xué)檢測指標(biāo)的影響(±s，n＝10)Tab.2 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on blood biochemistry index of chicks(±s，n＝10)

表2 偏堿性恩諾沙星注射液對雞血液學(xué)檢測指標(biāo)的影響(±s，n＝10)Tab.2 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on blood biochemistry index of chicks(±s，n＝10)

*為差異顯著(0.01＜P＜0.05)

組別 RBC(1012/L) HGB(g/L) WBC(109/L)NEUT(109/L)EON比率%,BASON比率%, LYMPHN比率%, MONON比率%,健康對照組 3.06±0.16 103±0.48 21.53±0.64 2.33±0.11 6.47±0.53 1.48±0.04 57.2±0.3 4.62±0.17 1 倍劑量組(給藥結(jié)束) 3.13±0.25 109±0.13 24.15±0.07 2.03±0.62 6.66±0.25 1.32±0，14 53.24±1.56 4.69±1.02 3 倍劑量組(給藥結(jié)束) 2.86±0.13 95±0.23 50.15±0.17* 2.25±0.32 6.51±0.35 1.30±0.22 53.14±1.41 4.96±1.48 5 倍劑量組(給藥結(jié)束) 2.83±0.02 80±0.63 50.12±0.12* 3.51±0.41* 6.56±0.42 1.36±0.16 57.28±1.19 4.89±1.26 10 倍劑量組(給藥結(jié)束) 2.73±0.15* 80±0.13 40.35±0.13* 4.65±0.42* 6.53±0.33 1.24±0.22 59.58±1.37 5.16±1.14 1 倍劑量組(停藥 7,d 后) 3.08±0.17 115±0.27 21.46±0.71 2.11±0.53 6.43±0.52 1.44±0.12 54.43±2.62 4.94±0.07 3 倍劑量組(停藥 7,d 后) 2.83±0.04 105±0.47 42.16±0.51* 2.03±0.61 6.38±0.57 1.38±0.23 56.52±1.16 4.57±0.37 5 倍劑量組(停藥 7,d 后) 2.82±0.16 90±0.57 43.05±0.41* 2.63±0.72 6.51±0.46 1.41±0.25 56.58±1.19 4.68±0.57 10 倍劑量組(停藥 7,d 后) 2.78±0.15 90±0.17 45.22±0.53* 3.74±0.53* 6.37±0.62 1.40±0.17 57.88±1.23 4.75±0.62

2.3 血液生化指標(biāo)測定

不同劑量組雛雞給藥前后的血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果見表3。1倍劑量(推薦劑量 1.75,mg/kg)組雛雞給藥后，藥物在雛雞組織器官內(nèi)吸收、代謝良好，給藥結(jié)束時除血清總膽紅素正常外，白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、堿性磷酸酶等血液生化指標(biāo)都有明顯變化。停藥7,d后，各項指標(biāo)恢復(fù)正常，即偏堿性恩諾沙星注射液可在停藥 7,d內(nèi)經(jīng)過腎臟排泄出體外，對雛雞肝臟、腎臟損傷較小。

3倍劑量偏堿性恩諾沙星注射液組的雛雞血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，給藥結(jié)束時除血清總膽紅素正常外，白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、堿性磷酸酶等血液生化指標(biāo)亦有明顯變化。停藥 7,d后，白蛋白、總蛋白指標(biāo)明顯低于健康對照組和 1倍劑量組；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)與堿性磷酸酶血液生化指標(biāo)明顯高于健康對照組和1倍劑量組。

5倍及以上劑量偏堿性恩諾沙星注射液組的雛雞血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，給藥結(jié)束時除血清總膽紅素正常外，白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、堿性磷酸酶等血液生化指標(biāo)亦有明顯變化。停藥 7,d后，白蛋白、總蛋白指標(biāo)均明顯低于健康對照組和 1倍劑量組；谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶血液生化指標(biāo)明顯高于健康對照組和 1倍劑量組。

表3 偏堿性恩諾沙星注射液對雞血液生化學(xué)檢測指標(biāo)(±s，n＝10)Tab.3 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on hematology index of chicken(±s，n＝10)

表3 偏堿性恩諾沙星注射液對雞血液生化學(xué)檢測指標(biāo)(±s，n＝10)Tab.3 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection on hematology index of chicken(±s，n＝10)

組別 白蛋白參考范圍38～55(g/L)谷丙轉(zhuǎn)氨酶參考范圍0～40(U/L)谷草轉(zhuǎn)氨酶參考范圍0～40(U/L)血清總膽紅素參考范圍 2.1～19(μmol/L)總蛋白參考范圍60～80(g/L)堿性磷酸酶參考范圍10～115(U/L)健康對照組 39.6±2.02 25.3±2.16 24.6±2.36 3.2±0.99 60.3±9.58 80.4±2.33 1 倍劑量組(給藥結(jié)束) 13.1±5.68 118.8±1.83 234.6±25.89 18.2±4.24 23.8±8.47 4,029.4±125.89 3 倍劑量組(給藥結(jié)束) 14.2±3.54 236.9±1.89 342.5±54.58 16.3±8.69 25.2±8.75 4,200.4±253.47 5 倍劑量組(給藥結(jié)束) 11.7±2.54 335.7±1.87 406.3±54.52 12.3±3.56 23.8±5.68 4,678.3±328.24 10 倍劑量組(給藥結(jié)束) 10.8±2.14 366.1±2.53 526.4±87.92 11.8±4.21 20.2±5.47 5,778.6±532.14 1 倍劑量組(停藥 7,d 后) 40.5±5.24 28.5±4.14 28.4±9.24 3.6±0.74 60.6±17.21 96.7±19.32 3 倍劑量組(停藥 7,d 后) 34.4±4.21 22.6±9.27 72.5±18.47 17.4±6.57 45.4±12.51 896.5±148.59 5 倍劑量組(停藥 7,d 后) 29.6±6.97 172.7±41.21 284.3±76.28 5.8±1.47 32.3±9.36 1,256.8±234.17 10 倍劑量組(停藥 7,d 后) 19.2±5.28 223.8±24.88 268.7±43.23 12.9±4.21 20.5±4.57 2,486.3±278.44

2.4 病理組織學(xué)觀察

2.4.1 連續(xù)給藥3,d后各臟器病理組織學(xué)觀察

連續(xù)給藥 3,d后，頸靜脈采血完畢，剖檢試驗雛雞，肉眼觀察，與健康對照組相比，偏堿性恩諾沙星注射液各劑量組均未發(fā)現(xiàn)任何明顯的病變和異常。病理組織學(xué)切片結(jié)果顯示：偏堿性恩諾沙星注射液各劑量組試驗雛雞的心臟、脾臟無明顯病理學(xué)變化。1倍劑量(推薦劑量1.75,mg/kg)組試驗雛雞肝臟有少量細(xì)胞核碎裂和溶解，呈現(xiàn)輕微壞死，法氏囊小葉中存在少量水腫液。隨著給藥劑量的增加，試驗雛雞肝臟的嗜堿性粒細(xì)胞明顯增多且大量聚集，呈現(xiàn)局部區(qū)域性化膿灶，中門靜脈血管組織中有大量紅細(xì)胞聚集、充血；肺臟的肺泡腔間質(zhì)增厚，且充血、出血逐漸明顯，支氣管管腔充血，并伴有炎性細(xì)胞浸潤；腎小管管腔和間質(zhì)間有充血，且炎性細(xì)胞逐漸增多，雛雞腎臟呈現(xiàn)不同程度的病理損傷；法氏囊小葉中存在少量水腫液，隨著給藥劑量的增加，法氏囊小葉出現(xiàn)組織缺失，并有紅色團(tuán)狀物質(zhì)存在，組織間隙增寬。由此可見，給予不同劑量偏堿性恩諾沙星注射液后，雛雞肝臟、肺臟、腎臟和法氏囊均呈現(xiàn)不同程度的病理損傷。

2.4.2 停藥7,d后各臟器病理組織學(xué)觀察

停藥7,d后，頸靜脈采血完畢，剖檢試驗雛雞，肉眼觀察，與健康對照組相比，偏堿性恩諾沙星注射液各劑量組均未發(fā)現(xiàn)任何明顯的病變和異常。病理組織學(xué)切片結(jié)果顯示：偏堿性恩諾沙星注射液各劑量組試驗雛雞的心臟、脾臟和法氏囊無明顯病理學(xué)變化。1倍劑量(推薦劑量1.75,mg/kg)組試驗雛雞各組織器官無明顯病理學(xué)變化。3倍劑量(5.25,mg/kg)組和5倍劑量(8.75,mg/kg)組試驗雛雞肺臟肺泡腔間質(zhì)充血、出血明顯，肺泡數(shù)量減少；腎小管管腔和間質(zhì)間有充血，且炎性細(xì)胞增多。10倍劑量(17.5,mg/kg)組雛雞肝臟有少量血細(xì)胞集聚；肺泡腔間質(zhì)有明顯出血和肺泡數(shù)量減少，支氣管管腔充血，并伴有炎性細(xì)胞浸潤；腎小管管腔內(nèi)，炎性細(xì)胞明顯增多。

2.5 器官指數(shù)測定

不同劑量組試驗雛雞給藥前后器官指數(shù)的測定結(jié)果表明(見表4)，給予 1、3、5、10倍臨床推薦劑量(1.75、5.25、8.75、17.5,mg/kg)的偏堿性恩諾沙星注射液，連續(xù)給藥 3,d及停藥 7,d后，各臟器指數(shù)與健康對照組相比，差異不明顯。

表4 偏堿性恩諾沙星注射液對雛雞臟器相對體質(zhì)量的影響/%(±s，n＝10)Tab.4 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection organ relative weight of chicks/%(±s，n＝10)

表4 偏堿性恩諾沙星注射液對雛雞臟器相對體質(zhì)量的影響/%(±s，n＝10)Tab.4 Effects of alkali deviation type enrofloxacin injection organ relative weight of chicks/%(±s，n＝10)

*為差異顯著(0.01＜P＜0.05)

檢測時間 心臟 肝臟 脾臟 肺臟 腎臟 法氏囊健康對照組 0.93±0.083 4.82±0.34 0.06±0.02 0.73±0.17 0.93±0.11 0.13±0.01 1 倍劑量組(給藥結(jié)束) 1.01±0.45 4.44±0.80 0.06±0.05 0.73±0.44 0.86±0.62 0.11±0.15 3 倍劑量組(給藥結(jié)束) 0.98±0.088 4.50±1.010 0.08±0.023 0.63±0.311 0.87±0.30 0.16±0.03 5 倍劑量組(給藥結(jié)束) 0.94±0.62 4.67±0.16 0.08±0.05 0.81±0.07 0.93±0.11 0.15±0.11 10 倍劑量組(給藥結(jié)束) 0.89±0.01 5.27±0.63 0.08±0.006 0.70±0.11 0.98±0.22 0.13±0.00 1 倍劑量組(停藥 7,d 后) 1.05±0.55 4.62±1.95 0.06±0.004 0.74±0.22 0.74±1.21 0.15±0.31 3 倍劑量組(停藥 7,d 后) 1.03±0.886 4.20±1.410 0.07±0.210 0.67±0.013 0.76±0.47 0.14±0.20 5 倍劑量組(停藥 7,d 后) 0.93±0.89 4.33±0.32 0.07±0.10 0.74±0.17 0.82±0.48 0.16±0.27 10 倍劑量組(停藥 7,d 后) 0.98±0.08 4.30±0.18 0.07±0.14 0.90±0.40 0.77±0.36 0.11±0.01

3 結(jié) 論

本研究以人工構(gòu)建的雛雞大腸桿菌病模型為基礎(chǔ)，給予 1倍劑量(推薦劑量 1.75,mg/kg)、3倍劑量(5.25,mg/kg)、5倍劑量(8.75,mg/kg)和10倍劑量(17.5,mg/kg)偏堿性恩諾沙星注射液，在連續(xù)給藥3,d后，雛雞血液生理指標(biāo)顯示：1倍劑量組(推薦劑量 1.75,mg/kg)試驗雛雞各指標(biāo)在末次給藥結(jié)束和停藥 7,d后，與健康對照組相比差異不明顯。隨著給藥劑量的增加，白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量明顯增高。停藥7,d后白細(xì)胞差異仍顯著，其余各指標(biāo)均差異不顯著。血液生化指標(biāo)顯示：1倍劑量組(推薦劑量1.75,mg/kg)試驗雛雞各指標(biāo)在停藥 7,d后各指標(biāo)恢復(fù)正常。隨著給藥劑量的增加，白蛋白和總蛋白升高，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶降低。病理組織切片顯示：隨著給藥劑量的增加，肝臟、肺臟和法氏囊有病理損傷，在給藥結(jié)束 7,d后，1倍劑量(推薦劑量 1.75,mg/kg)組試驗雛雞各組織器官無明顯病理學(xué)變化。3倍劑量(5.25,mg/kg)組和 5倍劑量(8.75,mg/kg)組試驗雛雞肺臟肺泡腔間質(zhì)充血，出血明顯，肺泡數(shù)量減少；腎小管管腔和間質(zhì)間有充血，且炎性細(xì)胞增多。10倍劑量(17.5,mg/kg)組雛雞肝臟有少量血細(xì)胞集聚；肺泡腔間質(zhì)有明顯出血和肺泡數(shù)量減少，支氣管管腔充血，并伴有炎性細(xì)胞浸潤；腎小管管腔內(nèi)炎性細(xì)胞明顯增多。得出結(jié)論，給予雛雞1倍劑量(1.75,mg/kg)偏堿性恩諾沙星注射液時，對雛雞生存狀態(tài)和臟器影響較小，使用安全，可作為臨床推薦劑量使用。