劉征輝，趙琳琳，趙云平，魏靜娜，薛天凱，郭永澤*

(1.天津市農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，天津 300381；2.天津海世達(dá)檢測技術(shù)有限公司，天津 300381；3.天津市現(xiàn)代中藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心，天津 300381)

金黃粉是一種非生物合成著色劑，又名酸性橙Ⅱ、酸性金黃Ⅱ、金橙Ⅱ或酸性艷橙GR，化學(xué)名為2-萘酚偶氮對苯磺酸鈉，分子式：C16H11N2NaO4S，相對分子質(zhì)量：350.33，易溶于乙醇、乙腈等，是重要的精細(xì)化工產(chǎn)品之一。金黃粉主要用于蠶絲、毛線和羊毛的染色，羊毛、蠶絲和錦綸織物的直接印花，皮革和紙張的著色等；此外，它又是一種指示劑，醫(yī)學(xué)上常用于組織切片的染色[1]。結(jié)構(gòu)式如下：

金黃粉屬非食用色素，具有較強(qiáng)的毒性和致癌性，國內(nèi)外有關(guān)規(guī)定均嚴(yán)禁將金黃粉用于食品著色。金黃粉比通常的食用色素更不易變色褪色，而且色澤鮮艷、滲透性好、價格低廉、具有一定的堅(jiān)牢度。在國家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)中，對金黃粉等違禁色素的檢驗(yàn)術(shù)語為“不得檢出”[2]。

紅花為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的筒狀花冠，是一種名貴中藥材，具良好的活血通經(jīng)，散瘀止痛的功效。由于近年貨源較缺，價格上漲，不法分子常將藥廠提取過的紅花重新染色出售以次充好而作假。經(jīng)鑒定其染色為一種化工染料酸性橙Ⅱ(又名金黃粉)，本品具有可疑致癌作用，禁止在食品中使用，目前金黃粉的檢測在國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中仍是空白只有很少的幾篇文獻(xiàn)[3-9]，一般也是液相方法，沒有質(zhì)譜相關(guān)的方法研究，我們經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)摸索，建立了液質(zhì)聯(lián)用法快速檢測紅花中金黃粉的方法，該方法靈敏高、簡便易行，取得了滿意的效果，適用于紅花中金黃粉的測定。

1 儀器與試藥

美國Waters Acquity UPLC/Waters Quattro Premier XE三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配備電噴霧離子源(ESI)以及Masslynx 4.1數(shù)據(jù)采集軟件。

金黃粉orangeⅡ sodium salt(Dr.Ehrenstorfer GmbH公司，批號：50513)；乙腈(色譜純，美國fisher公司)，乙酸銨(色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，2016年6月19日)，超純水(milli Q超純水系統(tǒng)，過0.22 μm濾膜)。

2 方法與結(jié)果

2.1 試液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備：精密稱取金黃粉對照品適量，加乙腈制成每1 mL含金黃粉對照品0.16 μg的溶液，備用；

2.1.2 供試品溶液的制備：取已粉碎并混勻的紅花樣品約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(70∶30)25 mL，密塞，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，并補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，備用；

2.2 色譜條件

采用C18液相色譜柱：Waters BEH C18(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；以0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(70∶30)為流動相；流速0.2 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.3 質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源，負(fù)離子電離模式，毛細(xì)管電離電壓2.5 kv，取樣錐孔電壓15 v，離子源溫度110 ℃，脫溶劑溫度300 ℃，脫溶劑氮?dú)饬魉?50 L·hr-1，錐孔反吹氮?dú)?0 L·hr-1，掃描模式為多反應(yīng)監(jiān)測MRM，采集時間0～5 min，掃描時間0.3 s，間隔時間0.02 s，選擇離子m/z 327Da作為目標(biāo)離子，碰撞電壓30 v，定性離子為m/z 93Da、171Da和247Da，定量離子為m/z 156Da，通過定量離子可以準(zhǔn)確的鎖定樣品中金黃粉的含量。

圖1 金黃粉標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖

圖2 金黃粉定性離子提取圖

圖3 金黃粉定量離子提取圖

圖4 紅花樣品總離子流圖

圖5 紅花樣品定性離子提取圖

圖6 紅花樣品定量離子提取圖

2.4 樣品中金黃粉的定量測定

儀器方法同上，對照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣10μL，在對照品質(zhì)譜圖和樣品質(zhì)譜色譜圖提取定量離子為m/z 156Da的色譜圖進(jìn)行積分，測定金黃粉質(zhì)譜色譜峰的峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品中金黃粉的積分峰面積和濃度的數(shù)據(jù)，計(jì)算樣品中金黃粉的含量。檢測結(jié)果見表1。

表1 市售A廠家紅花中金黃粉含量測定結(jié)果 mg·kg-1

2.5對上述確定的測定方法進(jìn)行有效性評價，其中包括專屬性、線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、測定范圍。方法學(xué)研究表明，以0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(體積比70∶30)作為提取溶劑超聲處理樣品，采用液質(zhì)聯(lián)用法快速檢測樣品中的金黃粉的含量，檢出限為0.8 ng，定量限2.4 ng；線性范圍為2.4～240 ng(線性方程y=8.620 5x+2.346 8，r=0.999 6)；平均回收率達(dá)到96.28%(RSD=1.8，n=6)；測定紅花中金黃粉含量的測量偏差為0.26%～1.32%。

3 結(jié)果與討論

3.1實(shí)驗(yàn)過程中，優(yōu)選0.01 mol·L-1乙酸銨溶液-乙腈(體積比70∶30)作為提取溶劑，采用超聲提取方法，超聲處理30 min。對目標(biāo)成分提取效果好，且方法簡單易操作，回收率、重復(fù)性和提取效率都達(dá)到要求。

3.2本方法與現(xiàn)有的檢測技術(shù)[10-13]相比所具有的積極效果在于：本方法首次采用液質(zhì)聯(lián)用法快速測定紅花中金黃粉的含量，5 min內(nèi)即可完成檢測，待測峰與樣品中基質(zhì)達(dá)到很好的分離。其優(yōu)點(diǎn)是簡便易行，方法操作性強(qiáng)，回收率高，重現(xiàn)性好。

3.3本方法所建立的快速檢測方法，首次采用二級質(zhì)譜，是從質(zhì)譜層面上對金黃粉的含量進(jìn)行準(zhǔn)確定性定量方法。在碰撞電壓30 v下，金黃粉的特征碎片離子峰組為m/z 93Da、171Da和247Da，同時提取離子峰m/z 156Da作為定量離子。

3.4目前以紅花為主藥入藥的中成藥有很多，本方法所述的快速檢測方法，其中的金黃粉的檢測方法可檢測含有金黃粉的紅花藥材及含有紅花的中成藥。