張瓊，劉婷，彭慧，袁清照

（1.湘潭醫(yī)衛(wèi)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411104；2.湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410006）

0 引言

青藤堿(Alkaloid sinomenine，SIN)是從中藥青風(fēng)藤中提取的單體生物堿，具有祛風(fēng)除濕止痛、消炎、免疫抑制與免疫調(diào)節(jié)等作用[1,2]，主要用于治療風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[3]。目前臨床上有青藤堿腸溶片、正清風(fēng)痛寧注射液、正清風(fēng)痛寧片等制劑，均為全身給藥途徑，生物半衰期短、且容易引起全身不良反應(yīng)[4]。目前國際上已開始將風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎新藥的研究熱點轉(zhuǎn)向皮膚給藥系統(tǒng)。其中經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中的涂膜劑制備工藝簡單，使用方便，給藥后可按一定速率釋藥，避免首過效應(yīng)，降低藥物的毒副作用及其他不良反應(yīng)。因此將青藤堿制備成局部給藥的涂膜劑，以使藥物在給藥部位的濃度積累并達到持續(xù)釋藥的目的，相對的減少了藥物通過全身吸收達到治療部位時產(chǎn)生的不良反應(yīng)。本研究對青藤堿涂膜劑處方進行了優(yōu)選，并采用離體鼠皮考察其透皮吸收行為。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津20A型高效液相色譜儀（日本島津）；TP-5型智能透皮儀，南京紅藍電子科技中心；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋，上?？莆鲈囼瀮x器廠；AB104-N型電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；ACS-6型電子計重稱，上海華德衡器有限公司。

2.2 試劑

鹽酸青藤堿對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；鹽酸青藤堿（西安瑞林生物科技有限公司）；聚乙烯醇（PVA124，西隴化工股份有限公司）、95%乙醇（西隴化工股份有限公司）、亞硫酸鈉（西隴化工股份有限公司）；甘油（天津鼎盛鑫化工有限公司）；氮酮（山東佰仟化工有限公司）。

2.3 動物

SD雄性大鼠180-200g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，SCXK（湘）2016-0002。

2 方法與結(jié)果

2.1 成膜材料的選擇

涂膜劑使用的成膜材料分為脂溶性膜材和水溶性膜材。應(yīng)用較多的脂溶性膜材有聚乙二醇縮甲醛、聚乙烯醇縮丁醛、聚乙烯吡咯烷酮。水溶性膜材有聚乙烯醇(PVA)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)羥丙基甲基纖維素(HPMC)等。根據(jù)文獻報道，PVA的成膜性和柔韌性好，黏度適宜，穩(wěn)定性較好，無毒無刺激，有藥用標(biāo)準(zhǔn)，與處方藥物無配伍禁忌[5]，因此，將PVA作為成膜材料。我們選擇了PVA-1788、PVA-0588、PVA-124三種常用型號進行初步篩選，結(jié)果顯示使用PVA-124的制劑綜合性能最好，所以選用PVA-124作為成膜材料進行涂膜劑的制備。

2.2 涂膜劑的制備

為了改善膜材的成膜性、可塑性，選用水溶性的甘油作為本處方的增塑劑，乙醇為溶媒。由于青藤堿性質(zhì)不穩(wěn)定，易氧化，因此加入抗氧化劑亞硫酸氫鈉0.4%。加入1% 氮酮作為透皮促進劑[6]。

將處方量的PVA-124用適量蒸餾水溶脹24h，再置于95℃水浴加熱溶脹成凝膠狀，在不斷攪拌下混合均勻作為基質(zhì)備用。將處方量的青藤堿、甘油、95%乙醇、亞硫酸氫鈉、氮酮加入基質(zhì)溶液中，加蒸餾水至100mL，攪拌均勻，即得。

2.3 成膜處方的篩選

根據(jù)文獻及預(yù)試驗結(jié)果，采用正交試驗設(shè)計法，以膜材濃度（A），乙醇含量（B），甘油含量（C）為試驗考察因素，每個因素設(shè)三個水平，選擇用L9(34)正交表安排試驗。以成膜時間、外觀評分（粘稠度，延展性，均勻度）為考察指標(biāo)進行綜合評分，優(yōu)選最佳配比。取涂膜劑2mL均勻涂于4cm×4cm的手臂皮膚上，開始計時，當(dāng)制劑成為不可流動的固態(tài)薄膜時停止計時，即為成膜時間。成膜時間得分：成膜時間≤4min記為10分；≤6分鐘記為6分；≤8分記為3分，＞8分記為0分。涂膜劑液體粘稠度適宜記為10分；較適宜為6分；一般為3分；差為0分。延展性得分。成膜后均勻無破損，延展性好為10分；較完整存在很小破損，延展性較好記為6分；有部分破損，延展性一般記為3分；破損嚴(yán)重不成形，延展性差記0分。均勻度得分。成膜厚度均勻記10分；略有不均勻記6分；部分不均勻記3分，很不均勻記0分[7,8]。綜合評分=成膜時間評分+外觀評分。因素水平安排見表1。正交試驗安排結(jié)果見表2，采用SPSS 20.0軟件進行單因素方差分析，分析結(jié)果見表3。

表1 成膜處方因素水平表

表2 正交試驗直觀分析結(jié)果

表3 正交試驗方差分析

根據(jù)以上試驗結(jié)果分析，PVA-124濃度和乙醇含量對試驗結(jié)果有顯著性影響（P＜0.05），甘油含量對試驗結(jié)果無顯著性影響（P＞0.05）。綜合考慮最佳制備工藝為A1B2C2,即：PVA-124 4g，95%乙醇30mL，甘油4mL，按上述制備方法制備，制得的青藤堿涂膜劑成膜時間短，粘稠度適宜，成膜后均勻無破損，成膜厚度均勻，延展性好。

2.4 驗證試驗

根據(jù)上述正交試驗最佳處方配比即PVA-124 4g，95%乙醇30mL，甘油4mL，按2.2項下工藝制備3批青藤堿涂膜劑，結(jié)果顯示平均成膜時間為3.8min，外觀質(zhì)量評分為28.7，綜合評分為38.7，說明優(yōu)化之后的處方制備工藝可靠，重復(fù)性良好。

2.5 青藤堿涂膜劑離體透皮吸收試驗[9]

取6只健康雄性大鼠，電推剪腹部剃毛，頸椎脫臼處死大鼠，剝離剪下去毛部位皮膚，小心除去皮下脂肪，用生理鹽水洗凈，臨用前用濾紙吸干水分，皮膚未見破損者，即可用于試驗。

將同一大鼠皮沿腹中線左右對稱地剪取兩塊皮片，繃于Franz 擴散池上，緊張度適中，皮片角質(zhì)層向外。量取鹽酸青藤堿涂膜劑0.1mL(含青藤堿1000μg)，均勻涂抹于大鼠皮片角質(zhì)面上；接收池內(nèi)盛pH7.4的PBS緩沖液（模擬體內(nèi)生理環(huán)境），排除殘留氣泡，使接收液與皮片緊密接觸。接收池容積為17mL，皮片涂藥面積為1.5cm2，水浴溫度為37.0±0.1℃，磁力攪拌強度為200轉(zhuǎn)/min。涂藥后第 2、4、6、8、10、24h取接收液 1mL，HPLC測定其中鹽酸青藤堿的濃度。每次取樣之后補充預(yù)熱至37℃的接收液1mL。取浸泡液用0.45μm濾膜過濾后，用HPLC測定鹽酸青藤堿的含量并計算累積滲透量Qn(μg)與累積透過率P。按照下式計算不同時間累積滲透量Qn：

Cn為每個時間點接收液濃度，V0為接收池體積17mL

P=(Qn/1000μg)×100%

以時間t為橫坐標(biāo)，各時間點的累積滲透量Qn為縱坐標(biāo)，繪制青藤堿涂膜劑透皮吸收累積滲透曲線，見圖1。

圖1 青藤堿涂膜劑透皮吸收累積滲透曲線

對青藤堿涂膜劑的透皮吸收累積滲透量進行Higuchi方程擬合，發(fā)現(xiàn)其符合Higuchi方程 (Qn =229.49t1/2-184.74，r=0.9271)，Higuchi方程斜率即為透皮速率常數(shù)（J），J=229.49μg·h-1。從圖1看出，青藤堿涂膜劑透皮吸收累積滲透曲線趨于對數(shù)曲線，在后期逐漸趨于平緩，累積透過率達86.18%，說明青藤堿涂膜劑大部分能透過皮膚進入體循環(huán)來發(fā)揮藥效。

3 討論

3.1 成膜材料是涂膜劑中藥物的載體，我們在參考文獻基礎(chǔ)上，預(yù)試驗考察了PVA-1788、PVA-0588、PVA-124三種型號的性能，發(fā)現(xiàn)PVA-1788水溶性差；PVA-0588黏附性差，不易成膜；PVA-124水溶性、柔軟性、成膜性，抗拉強度以及成膜時間都比較適宜，所以確定使用PVA-124作為成膜材料，并采用正交設(shè)計試驗優(yōu)化了處方配比。

3.2 在透皮吸收試驗中，我們采用了零級、一級動力學(xué)模型和Higuchi模型對青藤堿涂膜劑的透皮吸收數(shù)據(jù)進行動力學(xué)模型擬合，藥物的體外釋放過程符合Higuchi模型，達到緩慢釋放藥物的目的。

在后續(xù)的研究中，我們會進一步評價青藤堿涂膜劑的有效性和安全性，以期為青藤堿涂膜劑應(yīng)用于臨床治療風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎提供更多的理論依據(jù)。