馬希珍　沈情情　王俊　謝俊霞

[摘要]目的研究魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的帕金森病小鼠模型血壓及焦慮抑郁行為的變化。方法12月齡C57BL/6雄性小鼠360只，隨機(jī)分為兩組，各180只。實(shí)驗(yàn)組給予魚(yú)藤酮5 mg/（kg·d）灌胃，對(duì)照組給予等量不含魚(yú)藤酮的溶劑。兩組分別于給藥1周、2周、3周、1月、2月、3月后進(jìn)行鼠尾血壓測(cè)量及曠場(chǎng)檢測(cè)。

結(jié)果兩組各時(shí)間點(diǎn)平均動(dòng)脈壓比較，差異無(wú)顯著性（P>0.05）。曠場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組給藥2周周?chē)鷧^(qū)域活動(dòng)時(shí)間與中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間的比值較對(duì)照組明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.019，P<0.01）。

結(jié)論魚(yú)藤酮灌胃給藥不能使C57BL/6小鼠的平均動(dòng)脈壓發(fā)生變化，魚(yú)藤酮短時(shí)間給藥能夠使小鼠產(chǎn)生焦慮樣行為。

[關(guān)鍵詞]帕金森?。霍~(yú)藤酮；血壓；焦慮

[中圖分類(lèi)號(hào)]R338

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)] 20965532（2018）02013004

帕金森?。≒D）為一種常見(jiàn)的緩慢進(jìn)展的神經(jīng)退行性疾病，其主要病理學(xué)特征為黑質(zhì)（SN）致密帶多巴胺（DA）能神經(jīng)元丟失以及紋狀體區(qū)DA釋放減少，殘存的神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)以α突觸核蛋白（αsyn）為主要成分的路易小體（LB）[1]。遺傳因素、環(huán)境因素、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等多種因素均可參與PD的發(fā)病[2]。魚(yú)藤酮（RN）是一種線粒體復(fù)合物Ⅰ的高親和力的特異性抑制劑[34]。研究顯示，慢性RN小鼠模型能夠模擬出包括αsyn聚集在內(nèi)PD的幾乎所有病理變化[57]，并能模擬BRAAK提出的PD從低位腦干到中腦進(jìn)展的病理變化[810]。本文選用慢性RN小鼠模型模擬PD的疾病進(jìn)程，研究PD病程不同時(shí)期小鼠平均動(dòng)脈壓（MAP）及焦慮抑郁情緒的變化?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑

取7月齡SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠360只，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，單籠飼養(yǎng)于清潔動(dòng)物房?jī)?nèi)，室溫（19±2）℃，濕度（50±5）%，晝夜循環(huán)（12/12 h）光照，并自由進(jìn)食和飲水，飼養(yǎng)至12月齡。羧甲基纖維素鈉鹽（CMC）、RN均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。其他試劑均從當(dāng)?shù)卦噭┕举?gòu)買(mǎi)。CMC以生理鹽水溶解至40 g/L，并加入體積分?jǐn)?shù)0.012 5的氯仿。

1.2動(dòng)物分組及處理

將小鼠隨機(jī)分為兩組，各180只，實(shí)驗(yàn)組給予以40 g/L的CMC溶液溶解、濃度

[HJ2.2mm]

為6.25 g/L的RN溶液灌胃（5 mg/（kg·d）），對(duì)照組給予同等體積的40 g/L CMC溶液灌胃，分別于給藥1周、2周、3周、1月、2月、3月6個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)兩組小鼠進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)檢測(cè)。各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)的小鼠不重復(fù)使用。

1.3檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1鼠尾MAP使用北京軟隆生物技術(shù)有限公司的BP2010AUL鼠尾血壓測(cè)量?jī)x檢測(cè)小鼠的MAP。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)最后一次給藥后的24 h（次日上午9：00）將小鼠放入固定裝置內(nèi)，露出尾巴，將感應(yīng)裝置套在小鼠尾部。待小鼠安靜后測(cè)量小鼠尾動(dòng)脈血壓。每只小鼠測(cè)量3次，取平均值。

1.3.2曠場(chǎng)檢測(cè)將小鼠置于底面積約25 cm×25 cm的深盒里，讓其自由活動(dòng)，以Ethvision XT 7系統(tǒng)追蹤小鼠的活動(dòng)情況，計(jì)時(shí)10 min。每次檢測(cè)結(jié)束后以體積分?jǐn)?shù)0.75乙醇、擦手紙徹底清理盒子，并散去味道，避免陌生味道對(duì)小鼠行為產(chǎn)生干擾。以小鼠在周邊區(qū)域活動(dòng)時(shí)間與中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間的比值反映小鼠的焦慮抑郁行為。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料結(jié)果以[AKx-D]±s表示，兩組間比較采用Students t 檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1魚(yú)藤酮對(duì)小鼠MAP的影響

給藥1周、2周、3周、1月、2月、3月實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠MAP比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.2魚(yú)藤酮對(duì)小鼠焦慮抑郁行為的影響

曠場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組給藥2周在周?chē)鷧^(qū)域活動(dòng)時(shí)間與中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間的比值較對(duì)照組明顯增大，差異有顯著性（t=3.019， P<0.01）。兩組其他給藥時(shí)間周邊區(qū)域活動(dòng)時(shí)間與中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間比值比較，差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3討論

PD是一種進(jìn)展緩慢的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。目前研究結(jié)果認(rèn)為，PD的病因多而復(fù)雜，是一個(gè)多因素共同作用的結(jié)果，即在老化因素影響下，由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用產(chǎn)生的一種復(fù)雜的疾病[11]。BRAAK等[12]在2003年提出Braak分級(jí)假說(shuō)，認(rèn)為PD病人在出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)癥狀之時(shí)，病變已累及低位腦干。而在運(yùn)動(dòng)癥狀出現(xiàn)之前，病人多有體位性低血壓、便秘、嗅覺(jué)障礙等一系列非運(yùn)動(dòng)癥狀的改變[13]。近年來(lái)流行病學(xué)研究表明，對(duì)線粒體復(fù)合物Ⅰ有抑制作用的環(huán)境毒物因素可能是PD發(fā)病的危險(xiǎn)因素[14]。RN是一種具有線粒體復(fù)合物Ⅰ抑制作用、廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)除害的除草劑和魚(yú)塘清理的殺蟲(chóng)劑。研究發(fā)現(xiàn)，RN誘導(dǎo)的PD小鼠和大鼠模型，均可出現(xiàn)PD行為學(xué)改變和病理學(xué)特征，如運(yùn)動(dòng)功能障礙和黑質(zhì)DA能神經(jīng)元減少[89，15]。

為更早發(fā)現(xiàn)、診斷PD的發(fā)生，以期在疾病的早期采取措施阻斷疾病的進(jìn)展，本文實(shí)驗(yàn)采用了RN持續(xù)灌胃的方法構(gòu)建小鼠PD模型，對(duì)其進(jìn)行血壓檢測(cè)及曠場(chǎng)測(cè)試，以了解PD不同時(shí)期小鼠血壓及焦慮抑郁情況的改變。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠各給藥時(shí)間MAP值與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性。有研究結(jié)果顯示，PD病人的血壓節(jié)律偏向于非杓型，并廣泛存在夜間血壓升高現(xiàn)象，提示自主神經(jīng)功能受損[1618]。心臟副交感神經(jīng)起源于延髓迷走神經(jīng)背核（DMV）和疑核[19]。PD病人DMV在Braak分級(jí)的第一期就已受累[12，20]。還有研究結(jié)果顯示，該模型的DMV區(qū)在給藥早期就已受累[21]。自主神經(jīng)系統(tǒng)的中樞從脊髓直到大腦皮質(zhì)的各個(gè)水平都有調(diào)節(jié)與控制自主性功能的中樞[22]，它們都能影響交感與副交感神經(jīng)活動(dòng)。但動(dòng)物血壓水平受到多核團(tuán)、多系統(tǒng)的復(fù)雜調(diào)控[23]，因此RN對(duì)于小鼠血壓的影響可能被機(jī)體代償。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是用于檢測(cè)小鼠焦慮抑郁情緒的常用行為學(xué)檢測(cè)方法[2426]。小鼠由于對(duì)空曠場(chǎng)地存在畏懼的天性而多在周邊區(qū)域活動(dòng)；另一方面，面對(duì)新事物又會(huì)產(chǎn)生好奇心去探究新場(chǎng)所，周邊與中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間的比值能夠反映小鼠活動(dòng)的趨避性及焦慮水平。本文曠場(chǎng)測(cè)試結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠在RN處理第2周焦慮程度較對(duì)照組加重，但延長(zhǎng)給藥時(shí)間后，兩組焦慮情況比較差異無(wú)顯著性。使用該動(dòng)物模型的相關(guān)研究未見(jiàn)有對(duì)該模型小鼠焦慮程度的測(cè)定[2729]，但2017年一項(xiàng)AlCl3每日灌胃的小鼠模型曠場(chǎng)測(cè)試結(jié)果與本文相似[30]。因而我們推測(cè)，長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)灌胃的給藥方式可能影響小鼠的焦慮及抑郁情緒從而影響曠場(chǎng)測(cè)試結(jié)果。因此，該動(dòng)物模型可能不適于對(duì)PD小鼠模型進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的焦慮行為評(píng)估。

綜上所述，較短時(shí)間的RN灌胃給藥可以引起小鼠焦慮，但長(zhǎng)時(shí)間的給藥可能會(huì)導(dǎo)致小鼠對(duì)陌生環(huán)境等不良刺激的反應(yīng)性降低，從而顯示不出RN對(duì)焦慮或抑郁情緒的影響。是否存在組織病理改變需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。RN不能引起小鼠MAP的改變，但由于動(dòng)物血壓調(diào)控機(jī)制的復(fù)雜性，不排除RN對(duì)小鼠血壓的影響被其他機(jī)制代償。

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