劉曉婷，羅 燕，陳 潔，連科訊，劉 鋼，馬 昭，朱曉慶，谷新利

(石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003)

0 引 言

【研究意義】在畜禽生產(chǎn)中使用免疫增強(qiáng)劑可增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的免疫應(yīng)答，輔助疫苗發(fā)揮良好防疫效果。中藥多糖是從中草藥中提取出的具有增強(qiáng)免疫、抗炎、抗病毒、抗應(yīng)激、調(diào)節(jié)造血功能等多種生物活性作用的成分之一，它毒副作用小，體內(nèi)殘留量低，具有開發(fā)成療效確定、性質(zhì)穩(wěn)定、毒副作用小的免疫增強(qiáng)劑的前景[1]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】研究表明，中藥多糖可以通過提高免疫器官指數(shù)、促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，影響細(xì)胞因子的生成與分泌，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生等途徑來提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力[2,3]。同時(shí)，有研究發(fā)現(xiàn)，多糖類物質(zhì)是T細(xì)胞依賴性抗原之一，可以通過胞吞途徑，被MHC II類分子處理、呈遞，最終被TCR識別，參與機(jī)體細(xì)胞的免疫，誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生[4]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】經(jīng)合理配伍組成的中藥復(fù)方，其免疫增強(qiáng)效果在一定程度上優(yōu)于原有的單味中藥[5]。主要組織相容性復(fù)合體(MHC)是動(dòng)物抗病育種的主要候選基因群之一，而具有豐富多態(tài)性的雞MHC B-Lβ II基因的遺傳變異與機(jī)體免疫性狀有著顯著的關(guān)聯(lián)性，表現(xiàn)出不同個(gè)體間免疫功能存在強(qiáng)弱的差異[6,7]。研究中藥復(fù)方多糖對不同MHC B-Lβ II基因型蛋雞育雛育成期免疫功能的影響。【擬解決的關(guān)鍵問題】試驗(yàn)排除因MHC B-Lβ II基因多態(tài)性而導(dǎo)致的不同基因型個(gè)體免疫能力的差異，研究中藥復(fù)方多糖對蛋雞臟器指數(shù)、血常規(guī)部分指標(biāo)、GM-CSF和G-CSF質(zhì)量濃度的影響，篩選出其對各基因型雞的最佳免疫劑量，為中藥復(fù)方多糖在臨床的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 藥物

中藥復(fù)方多糖由石河子大學(xué)中獸醫(yī)學(xué)研究室提供。復(fù)方由當(dāng)歸、黨參、川芎、黃芪、熟地、淫羊藿、山楂、茯苓、何首烏、補(bǔ)骨脂與麥冬等11味中藥按一定配比組成，復(fù)方多糖濃度為77.10%，用等量滅菌超純水稀釋，將中藥復(fù)方多糖配置成50(高劑量)、25(中劑量)和12.5 mg/mL(低劑量)3個(gè)質(zhì)量濃度，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要試劑

動(dòng)物血細(xì)胞分析儀應(yīng)用試劑購自深圳普康電子有限公司；雞GM-CSF、G-CSF ELISA檢測試劑盒均購自上海藍(lán)基生物有限公司；血液基因組DNA提取試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司；雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗(La Sota 株+H120株)及雞傳染性法氏囊病活疫苗(B87株)均購自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司；雞新城疫病毒(La Sota株)、傳染性支氣管炎病毒(M41株)二聯(lián)滅活疫苗，購自普萊柯生物工程股份有限公司；禽流感二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-6株+H9N2 Re-2株)購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2 方 法

1.2.1 PCR-SSCP基因型檢測

1.2.1.1 基因組DNA的提取

翅下靜脈采血0.2 mL/羽，置于肝素鈉抗凝采血管中搖勻，-20℃冷凍保存。用血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA，2% 瓊脂糖凝膠電泳檢測后，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.2 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)GenBank中收錄的雞MHC B-LβⅡ基因序列(NO.M29763.1)，應(yīng)用Oligo軟件設(shè)計(jì)引物，引物序列為：上游引物：5‘-AAACCGACCGTCTGGCGTGCTA-3’，下游引物：5‘-TTACCCCACGCCTGGCTGAT-3’，擴(kuò)增片段238 bp，引物由華大基因科技股份有限公司合成。

1.2.1.3 PCR擴(kuò)增

PCR擴(kuò)增體系20 μL：2×PCR Mix 10 μL，模版DNA 2 μL，上、下游引物各0.5 μL，ddH2O 7 μL。PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5 min；94變性40 s，60.5℃退火45 s，72℃延伸35 s，32個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min；4℃保存。取5 μL PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物由2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像系統(tǒng)觀察并拍照。

1.2.1.4 PCR-SSCP分析及序列測定

取3 μL PCR產(chǎn)物加7 μL 變性上樣緩沖液，98℃變性10 min，變性結(jié)束后迅速置于冰上冰浴10 min。用8%聚丙烯酰胺凝膠(Acr∶Scr=29∶1)電泳檢測，300 V電壓預(yù)電泳10 min，120 V電泳16 h后，固定、銀染、顯色，判定基因型，拍照保存。各取3個(gè)不同基因型個(gè)體的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化回收，送華大基因科技股份有限公司進(jìn)行測序，對PCR-SSCP分型結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。

1.2.2 分組

500羽1日齡京粉1號蛋雞，購自新疆昌吉某一孵化場提供，根據(jù)MHC B-Lβ II基因第3外顯子PCR-SSCP的檢測結(jié)果分組，再將各組分為高、中、低劑量中藥多糖組和空白對照組。分別于8日齡肌肉注射50、25、12.5 mg/mL中藥復(fù)方多糖和生理鹽水，每只0.2 mL，連續(xù)注射7 d。

所用試驗(yàn)雞1日齡馬立克疫苗噴霧免疫(于孵化場進(jìn)行)，7日齡新、傳二聯(lián)活疫苗點(diǎn)眼免疫，21日齡新、傳二聯(lián)活疫苗點(diǎn)眼與新、傳二聯(lián)滅活苗肌注免疫，14日齡法氏囊疫苗滴口免疫，28日齡禽流感二聯(lián)滅活苗免疫。在相同條件下常規(guī)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)條件、營養(yǎng)水平和飼養(yǎng)管理均一致，飼養(yǎng)期為7周，整個(gè)試驗(yàn)期雞群健康狀況良好。

1.2.3 檢測項(xiàng)目

1.2.3.1 免疫器官指數(shù)

各組雞分別于21、35、49日齡隨機(jī)抽取5只，稱重后頸靜脈放血致死，迅速切開頸部和腹腔，完整分離并摘取胸腺、脾臟和法氏囊，剔除筋膜和脂肪組織，用濾紙吸干血水后準(zhǔn)確稱重。免疫器官指數(shù)計(jì)算公式如下：

免疫器官指數(shù)=器官重量(g)/活體重(kg)×100%。

1.2.3.2 血常規(guī)

每組隨機(jī)抽取5只試驗(yàn)雞，21、35、49日齡翅下靜脈采集EDTA抗凝血3 mL，用動(dòng)物血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血常規(guī)分析，主要分析白細(xì)胞總數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞(LYM)、中性粒細(xì)胞(GRA)、紅細(xì)胞總數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板總數(shù)(PLT)。

1.2.3.3 血清GM-CSF、G-CSF質(zhì)量濃度的測定

每組隨機(jī)抽取5只試驗(yàn)雞，于21、35、49日齡翅下靜脈采集非抗凝血3 mL，37℃靜置1 h，分離血清，測血清中GM-CSF、G-CSF的質(zhì)量濃度(均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較，數(shù)據(jù)以“x±SD”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果

用所設(shè)計(jì)的引物對基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，取所得PCR產(chǎn)物5 μL于2 %瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳檢測，研究表明，所設(shè)計(jì)引物的擴(kuò)增結(jié)果較好，片段長度與預(yù)期大小一致，條帶清晰、無非特異性條帶，可直接進(jìn)行SSCP分析。圖1

2.2 SSCP檢測

對所有DNA樣本的PCR產(chǎn)物進(jìn)行SSCP多態(tài)性檢測，發(fā)現(xiàn)所擴(kuò)增片段有3種基因型，分別定義為AA (103羽)、BB(266羽)和BC(131羽)。圖2

M，Trans DNA Marker I ；1～7，MHC B-Lβ II PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

M, Trans DNA Marker I; 1-7, PCR products of MHC B-Lβ II

圖1 MHC B-LβⅡ的PCR擴(kuò)增結(jié)果
Fig.1 The PCR amplification results of MHC B-Lβ II

1、6、8、10：BC型；2、4、7、9：BB型；3、5：AA型

1、6、8、10:BCgenotype; 2、4、7、9:BBgenotype; 3、5;AAgenotype

圖2 部分試驗(yàn)雞MHC B-LβⅡ基因型的PCR-SSCP檢測
Fig.2 PCR-SSCP detection of MHC B-LβⅡ genotype in partial hen

2.3 中藥復(fù)方多糖對不同MHC B-LβⅡ基因型蛋雞免疫器官指數(shù)的影響

研究表明，與空白對照組相比，21日齡，高劑量中藥復(fù)方多糖可顯著提高AA基因型和BC基因型雞的脾臟、法氏囊指數(shù)(P<0.05)；中劑量中藥復(fù)方多糖可顯著提高AA基因型雞的脾臟指數(shù)和BC基因型雞的法氏囊指數(shù)(P<0.05)；35日齡，高劑量中藥復(fù)方多糖可顯著提高AA基因型雞的法氏囊指數(shù)與BC基因型雞的胸腺指數(shù)，中劑量多糖可顯著提高AA基因型雞的胸腺、法氏囊指數(shù)及BC基因型雞的胸腺指數(shù)(P<0.05)；45日齡，中劑量復(fù)方多糖可顯著提高AA基因型雞的胸腺指數(shù)(P<0.05)。 各日齡高、中、低劑量復(fù)方多糖對BB基因型雞的胸腺、脾臟、法氏囊指數(shù)均有提高的作用，但均無顯著性差異(P>0.05)。表1

2.4 中藥復(fù)方多糖對不同基因型蛋雞血常規(guī)指標(biāo)的影響

2.4.1 中藥復(fù)方多糖對不同基因型蛋雞白細(xì)胞的影響

研究表明，35日齡，AA基因型雞低劑量和中劑量中藥復(fù)方多糖組中白細(xì)胞總數(shù)與淋巴細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，而中性粒細(xì)胞數(shù)高于對照組，但無顯著性差異(P>0.05)，BC基因型雞中劑量和高劑量中藥復(fù)方多糖組中白細(xì)胞總數(shù)與淋巴細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，而中性粒細(xì)胞數(shù)高于對照組，但無顯著性差異(P>0.05)；49日齡，AA基因型雞低劑量多糖組中白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞顯著高于對照組(P<0.05)，中劑量中藥復(fù)方多糖組中白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞顯著高于對照組(P<0.05)，BC基因型雞中劑量中藥復(fù)方多糖組白細(xì)胞總數(shù)與淋巴細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，高劑量中藥復(fù)方多糖組淋巴細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。表2

2.4.2 中藥復(fù)方多糖對不同基因型蛋雞紅細(xì)胞與血小板的影響

研究表明，與對照組相比，各劑量中藥復(fù)方多糖對不同基因型蛋雞血常規(guī)中紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白有一定程度的提高，但均無顯著性差異(P>0.05)。除49日齡，AA基因型雞高劑量多糖組中血小板總數(shù)顯著低于對照組外，21日齡、35日齡和49日齡，各基因型不同劑量多糖組與多對照組中血小板總數(shù)相比無顯著性差異(P>0.05)。表3

2.5 中藥復(fù)方多糖對不同基因型蛋雞血清的GM-CSF和G-CSF質(zhì)量濃度的影響

研究表明，隨著日齡的增加，不同基因型蛋雞血清中GM-CSF的質(zhì)量濃度呈遞減的趨勢，與對照組相比，21日齡時(shí)，各劑量中藥復(fù)方多糖對不同基因型蛋雞血清中GM-CSF的質(zhì)量濃度均有一定提高，但無顯著性差異(P>0.05)；35日齡時(shí)，中劑量中藥復(fù)方多糖可顯著提高AA基因型蛋雞血清中GM-CSF的質(zhì)量濃度(P<0.05)，高劑量中藥復(fù)方多糖可顯著提高BB基因型蛋雞血清中GM-CSF的質(zhì)量濃度(P<0.05)。G-CSF的質(zhì)量濃度，除在35日齡時(shí)BB基因型高劑量多糖組蛋雞血清中G-CSF的質(zhì)量濃度顯著低于BB基因型低劑量多糖組與空白對照組外(P<0.05)，其余日齡各組間并無明顯差異。表4

表4 不同基因型蛋雞血清的GM-CSF和G-CSF質(zhì)量濃度
Table 4 The mass concentrations of GM-CSF and G-CSF in serum of different genotypes of laying hens (pg/mL)

組別GroupsGM-CSFG-CSF21 d35 d49 d21 d35 d49 dAA-L AA genotype-Low-dose groupe34.66±2.5424.47±1.98b20.19±2.0845.61±4.3638.90±3.1340.65±4.19AA-M AA genotype-Middle-dose groupe37.83±2.7735.62±2.16a23.30±1.7440.15±2.1939.87±5.5643.96±3.97AA-H AA genotype-High-dose groupe36.91±2.9832.30±2.72ab27.70±1.5143.84±3.2737.53±3.2439.90±3.58AA-C AA genotype-Conteol groupe33.26±2.5321.89±1.49b23.32±1.1942.89±3.7541.56±4.6741.67±3.96BB-L BB genotype-Low-dose groupe42.23±3.2728.42±2.33ab22.20±1.6451.30±5.3956.90±5.57a47.43±5.39BB-M BB genotype-Middle-dose groupe39.85±3.6826.20±2.53b29.86±2.3146.57±4.5848.40±4.28ab47.15±5.72BB-H BB genotype-High-dose groupe41.70±4.6239.81±2.87a27.47±2.4944.09±4.3742.68±3.62b48.76±4.73BB-C BB genotype-Conteol groupe31.63±2.7327.64±2.57b27.30±1.8846.52±2.9754.24±4.69a51.17±5.98BC-L BC genotype-Low-dose groupe41.11±2.6931.51±2.4220.44±1.0447.88±4.2645.92±3.3749.41±5.44BC-M BC genotype-Middle-dose groupe38.23±2.0735.95±2.8128.91±2.5343.80±4.4245.80±3.3647.03±4.87BC-H BC genotype-High-dose groupe39.27±3.4836.80±2.1724.22±1.2947.24±5.1342.52±4.9347.44±4.82BC-C BC genotype-Conteol groupe34.46±2.4730.94±2.3128.73±1.4745.55±4.8343.81±4.7746.18±4.29

3 討 論

胸腺是T淋巴細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場所，它具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能和增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤、抗感染的能力。法氏囊為禽類特有的產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞的中樞免疫器官，其功能與體液免疫相關(guān)。脾臟是機(jī)體最大的免疫器官，含有大量的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。免疫器官發(fā)育的水平直接影響機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能和對疾病的抵抗力，免疫器官指數(shù)在一定程度上能反映免疫器官的發(fā)育水平，從而反映機(jī)體的免疫狀態(tài)。有試驗(yàn)表明，中藥多糖可以促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，提高動(dòng)物的免疫器官指數(shù)。羅李媛[8]在給雞飼喂川牛膝多糖后，發(fā)現(xiàn)胸腺、脾臟以及法氏囊臟器指數(shù)均有所提高，且以早期階段使用川牛膝多糖提高雞體的免疫功能的效果最為顯著。石念進(jìn)等[9]通過對黃芪多糖、復(fù)方多糖的比較發(fā)現(xiàn)，提取的復(fù)方中藥多糖有促進(jìn)雛雞免疫器官發(fā)育的作用，且效果良好。研究結(jié)果顯示，給予試驗(yàn)雞中藥復(fù)方多糖后的不同時(shí)間，高、中、低劑量中藥復(fù)方多糖均能顯著提高雞胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)，并且中劑量和高劑量中藥復(fù)方多糖組的免疫器官臟器指數(shù)均高于低劑量中藥復(fù)方多糖組，中、高劑量多糖能夠更有效促進(jìn)免疫器官的生長發(fā)育與成熟，增強(qiáng)蛋雞的細(xì)胞免疫與體液免疫，抵抗各種病原微生物感染的能力提高。

血常規(guī)檢查是動(dòng)物疾病診斷的重要輔助方法，同時(shí)也反映動(dòng)物機(jī)體造血與免疫機(jī)能的狀況。血細(xì)胞常分為白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板三大類，其分類計(jì)數(shù)結(jié)果可以反映動(dòng)物機(jī)體的生理狀態(tài)。白細(xì)胞是機(jī)體抵御病原微生物等異物入侵的主要防線，具有吞噬、產(chǎn)生抗體、傳遞免疫信息等功能，在正常生理狀態(tài)下，白細(xì)胞總數(shù)反映機(jī)體的綜合的免疫反應(yīng)能力，其變化可以反映機(jī)體的抵抗力[10]。紅細(xì)胞的主要功能是運(yùn)輸O2和CO2，且對酸、堿物質(zhì)有緩沖作用，且主要依賴于紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白來實(shí)現(xiàn)這些功能。血小板是由骨髓成熟的巨噬細(xì)胞胞漿裂解脫落下來的具有生物活性的小塊胞質(zhì)，在止血、傷口愈合、炎癥反應(yīng)等生理和病理過程中有重要保護(hù)作用[11]。聶健等[12]對免疫抑制小鼠給予當(dāng)歸補(bǔ)血湯處理后，可明顯提高造模小鼠的白細(xì)胞、紅細(xì)胞生成，提高血紅蛋白含量，且對脾臟萎縮有明顯的拮抗作用。王宏軍等[13]研究表明，南五味子多糖粗品可提高雛雞的胸腺、法氏囊、脾臟免疫器官指數(shù)，增加雛雞外周血紅細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞含量，對機(jī)體發(fā)揮非特異性免疫起到積極的作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示，各基因型高、中、低劑量的中藥復(fù)方多糖組的白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)均高于對照組，這進(jìn)一步顯示了該中藥復(fù)方多糖能夠提高機(jī)體的免疫能力。

GM-CSF是一種多潛能性細(xì)胞因子，在對骨髓造血細(xì)胞的調(diào)控和機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中均發(fā)揮著重要作用[14]。G-CSF是粒細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)因子，作用于骨髓粒系祖細(xì)胞，刺激造血干細(xì)胞的增殖、分化與成熟，增加外周血中性粒細(xì)胞的吞噬活性及趨化性，從而促進(jìn)機(jī)體免疫力[15]。部分中藥多糖能夠調(diào)節(jié)GM-CSF、G-CSF的產(chǎn)生和分泌，從而具有增強(qiáng)造血機(jī)能、升高白細(xì)胞的作用[16]。田維毅等[17]研究發(fā)現(xiàn)黃芪、枸杞、地黃等3味中藥多糖組分一定濃度組小鼠血清 GM-CSF較空白對照組顯著升高，且具有濃度差異性。李興玉等[18]用巴西蘑菇多糖誘導(dǎo)人臍血單核細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其可促進(jìn)造血干、祖細(xì)胞生成和人臍血單核細(xì)胞 GM-CFS 基因的表達(dá)。嚴(yán)善福等[19]增加牛膝多糖濃度可提高對粒系造血干細(xì)胞的動(dòng)員作用，其與G-CSF具有協(xié)同加強(qiáng)作用，共同促進(jìn)粒系造血干細(xì)胞增殖分化。試驗(yàn)結(jié)果顯示，各劑量中藥復(fù)方多糖有提高不同基因型蛋雞血清中GM-CSF質(zhì)量濃度的影響，與田維毅等研究相似。

MHC是一個(gè)與機(jī)體的免疫應(yīng)答和抗病性密切相關(guān)的多基因家族，不同個(gè)體間由于MHC基因的多樣性而導(dǎo)致免疫功能存在個(gè)體或品種上的差異。李福傳等[20]通過對3個(gè)地方品種的不同類型免疫滴度等免疫性狀的測定及與基因變異的關(guān)聯(lián)分析，表明不同免疫能力存在個(gè)體甚至品種水平上的遺傳差異，且不同免疫性狀存在顯著的優(yōu)勢基因型。吳春梅等[21]研究發(fā)現(xiàn)北京油雞MHC B-F區(qū)基因的Exon 2 多態(tài)性高于來航蛋雞，且其異嗜性粒細(xì)胞數(shù)、H/L 顯著低于來航蛋雞，而白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)顯著高于來航蛋雞，產(chǎn)生免疫反應(yīng)比來航蛋雞快。在試驗(yàn)的空白組中，AA基因型和BB基因型蛋雞的胸腺指數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)及血小板總數(shù)明顯高于BC基因型，表明AA基因型和BB基因型蛋雞的細(xì)胞免疫優(yōu)于BC基因型，但具體情況還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。目前已有多種多糖被證實(shí)可作為T細(xì)胞依賴性抗原，由MHC II類分子處理與呈遞而被TCR分子識別。Cobb B. A等研究發(fā)現(xiàn)多糖能夠以糖蛋白、糖連接或通過胞吞途徑被NO系統(tǒng)降解為小分子量碳水化合物的方式，被MHC classⅡ類分子處理與呈遞而被TCR分子識別，進(jìn)而活化T細(xì)胞誘導(dǎo)一定的免疫反應(yīng)[4,22]。在試驗(yàn)的中藥復(fù)方多糖組中，高、中、低劑量多糖對不同基因型蛋雞免疫器官、血常規(guī)部分指標(biāo)及GM-CSF質(zhì)量濃度均有一定影響，但各劑量多糖對各基因型同一指標(biāo)的影響并不相同，這可能與不同MHC B-Lβ II基因型雞機(jī)體的免疫系統(tǒng)對中藥多糖類外來抗原的敏感度及遞呈能力不同有關(guān)。MHC II基因多態(tài)性的存在可能會(huì)影響細(xì)胞上MHC II類分子的抗原結(jié)合槽結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使得MHC 等位基因編碼分子和多糖的糖蛋白、糖連接及小分子量碳水化合物的結(jié)合產(chǎn)生一定的選擇性，而這一選擇性可能導(dǎo)致不同MHC B-Lβ II基因型個(gè)體對同一抗原的免疫應(yīng)答有所差異，進(jìn)而導(dǎo)致各劑量多糖對各基因型同一指標(biāo)影響的差異[23]。

4 結(jié) 論

MHC B-Lβ II基因的多態(tài)性使蛋雞的免疫能力存有個(gè)體差異，通過高、中、低三個(gè)劑量中藥復(fù)方多糖對不同MHC B-Lβ II基因型京紅1號蛋雞免疫器官指數(shù)及血常規(guī)部分指標(biāo)影響的比較分析，初步說明連續(xù)肌注7 d不同劑量的中藥復(fù)方多糖可以不同程度提高各基因型組蛋雞免疫器官指數(shù)、部分血常規(guī)指數(shù)及GM-CSF質(zhì)量濃度，且整體上以高、中劑量中藥復(fù)方多糖免疫效果更好。

參考文獻(xiàn)(References)

[1] 徐小芳, 羅燕, 趙民, 等.中藥復(fù)方多糖對雞抗氧化功能的影響[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 42(3):706-713.

XU Xiao-fang, LUO Yan, ZHAO Min, et al. (2009). Effects of traditional Chinese medicine compound polysaccharides on anti-oxidation function of chicks [J].ScientiaAgriculturaSinica, 42(3):706-713. (in Chinese)

[2] 劉師旗, 陳家磊, 馮君, 等. 車前草多糖對雛雞血液生理生化指標(biāo)和免疫器官發(fā)育的影響[J]. 四川畜牧獸醫(yī), 2014, 41(5): 23-25.

LIU Shi-qi, CHEN Jia-lei, FENG Jun, et al. (2014). The effect of plantain polysaccharide on blood physiological index, seroenzyme activity and immune organ in chicken [J].SichuanAnimal&VeterinarySciences, 41(5): 23-25. (in Chinese)

[3] 章世元, 徐春燕, 董曉芳, 等. 苜蓿多糖和黃芪多糖對肉仔雞淋巴細(xì)胞增殖的影響[J]. 動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào), 2010, 22(3): 670-674.

ZHANG Shi-yuan, XU Chun-yan, DONG Xiao-fang, et al. (2010). Effects of water soluble alfalfa and astragalus polysaccharide on proliferation of lymphocyte in broilers [J].ChineseJournalofAnimalNutrition, 22(3): 670-674. (in Chinese)

[4] Cobb, B. A., Wang, Q., Tzianabos, A. O., & Kasper, D. L. (2004). Polysaccharide processing and presentation by the mhcii pathway.Cell,117(5): 677-687.

[5] 羅 燕, 谷新利, 趙宗勝, 等.中藥復(fù)方多糖及其各單味中藥多糖對小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī), 2008, (2):89-90.

LUO Yan, GU Xin-li, ZHAO Zong-sheng, et al. (2008). Effect of polysaccharide of compound Chinese medicine and its single flavored Chinese medicine polysaccharides on lymphocyte proliferation in mice [J].HeilongjiangAnimalScienceandVeterinaryMedicine, (2):89-90. (in Chinese)

[6] Shanaz, S. S., Joshi, C. G., Jhala, M. K., Rank, D. N., Khanna, K., & Barot, V. N., et al. (2005). Molecular characterization of b-lβ ii family (class ii mhc) alleles in three strains of poultry and its association with immune response.IndianJournalofPoultryScience, 40(1):1-8.

[7] 朱曉慶, 谷新利, 喬海博.主要組織相容性復(fù)合體(MHC)B-L βII基因Hin II 位點(diǎn)多態(tài)性對雞免疫功能的影響[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2013,21(5):570-578.

ZHU Xiao-qing, GU Xin-li, QIAO Hai-bo. (2013). The effects of chicken major histocompatibility complex (MHC) B-LβⅡgene hin1Ⅰlocus polymorphism on immune function [J].JournalofAgriculturalBiotechnology, 21(5): 570-578. (in Chinese)

[8] 羅李媛. 川牛膝多糖的提取工藝及其對肉雞免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D]. 成都： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2008.

LUO Li-yuan. (2008).Studiesontheteehnologyofextraetionandtheimmunomodulationeffeetoftheachyranthesbidentatapolysaccharidesinchicken[D]. Master Dissertation. Sichuan Agricultural University, Chengdou. (in Chinese)

[9] 石念進(jìn), 王希春, 吳金節(jié), 等. 中藥復(fù)方多糖對雛雞生長性能及免疫功能的影響[J].中國家禽, 2013, 35(1):20-24.

SHI Nian-jin, WANG Xi-chun, WU Jin-jie, et al. (2013). Effects of Chinese herbal medicine compound polysaccharide on growth performance and immune function in chicken [J].ChinaPoultry, 35(1):20-24. (in Chinese)

[10] Broxmeyer, H. E. (2001). Regulation of hematopoiesis by chemokine family members.InternationalJournalofHematology, 74(1):9-17.

[11] Huang, Y., Jiang, C., Hu, Y., Zhao, X., Shi, C., & Yu, Y., et al. (2013). Immunoenhancement effect of rehmannia glutinosa polysaccharide on lymphocyte proliferation and dendritic cell.CarbohydrPolym, 96(2): 516-521.

[12] 聶 健, 詹素瓊, 梁歌, 等. 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠造血功能和生長性能的影響[J].四川畜牧獸醫(yī), 2013, (1):30-31, 34.

NIE Jian, ZHAN Su-qiong, LIANG Ge, et al. (2013). Effect of dangguibuxuetang on the hematopoiesis and growth performance in mice [J].SichuanAnimal&VeterinaryMedicine, (1):30-31,34. (in Chinese)

[13] 王宏軍.南五味子多糖提取及其對雛雞免疫活性的研究[D].長春：吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2011.

WANG Hong-jun. (2011).ExtractionofpolysaccharidesfromKadsuramarmorataanditsimmunomodulatoryeffectsonchicken[D]. Master Dissertation. Jilin University, Changchun. (in Chinese)

[14] 孜比爾尼薩·哈迪爾, 張富春. GM-CSF增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J]. 疾病預(yù)防控制通報(bào), 2016, 26(6):76-78.

Zibiernisa Hadier. ZHANG Fu-chun. (2016). Research progress on enhanced immunomodulatory effect of GM-CSF [J].EndemicDiseasesBulletin(China) , 26(6):76-78. (in Chinese)

[15] Akbarzadeh, S., & Layton, J. (2001). Granulocyte colony-stimulating factor receptor: structure and function.Vitamins&Hormones, 63(1):159-194.

[16] 郭乃麗, 苗明三. 大棗多糖對氣血雙虛模型小鼠全血細(xì)胞和血清粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子水平的影響[J]. 中國臨床康復(fù), 2006, 10(15):146-147,150.

GUO Nai-li, MIAO Ming-shan. (2006). Effect of jujube polusaccharide on levels of colony stimulating factor in global blood cells and serum macrophage of model mice with bothqiand blood deficiency[J].ChinesejournalofClinicalRehabilitation, 10(15):146-147,150. (in Chinese)

[17] 田維毅, 葛金文, 陳育,等. 九種中藥多糖組分對小鼠血清集落刺激因子水平的影響[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2015, 26(2):328-329.

TIAN Wei-yi, GE Jin-wen, CHEN Yu, et al. (2015). Effect of nine traditional Chinese medicine polysaccharides on the level of serum colony stimulating factor in mice [J].LishizhenMedicineandMateriaMedicalResearch, 26(2):328-329. (in Chinese)

[18] 李興玉, 袁麗銘, 吳鑌, 等.國產(chǎn)巴西蘑菇多糖誘導(dǎo)細(xì)胞刺激因子基因表達(dá)的研究[J]. 食用菌學(xué)報(bào), 2005, 12(2):1-8.

LI Xing-yu, YUAN Li-ming, WU Bin, et al. (2005).Studies on the expression of cytokine genes induced by agaricus blazei polysaccharide [J].ActaEdulisFungi, 12(2):1-8. (in Chinese)

[19] 嚴(yán)善福, 陶 箭, 葉裕春. 牛膝多糖促進(jìn)骨髓細(xì)胞粒細(xì)胞集落形成[J]. 上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, (23):38-39.

YAN Shan-fu, TAO Jian, YE Yu-chun. (2003). Achyranthes-piaentata polysaccharides promotes the clone formation of granulocytes from bone marrow cells [J].ActaUniversitatisMedicinalisSecondaeShanghai, (23): 38-39. (in Chinese)

[20] 李福偉, 李淑青, 逯巖, 等. 三個(gè)地方雞種 MHC B-L BII 基因遺傳變異與免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析[J]. 生物工程學(xué)報(bào), 2013, 29(7): 904-913.

LI Fu-wei, LI Shu-qing, LU Yan, et al. (2013). Relations among immune traits and MHC B-LBII gene in three local chicken breeds [J].ChineseJournalofBiotechnology, 29(7): 904-913. (in Chinese)

[21] 吳春梅. 雞 MHC B-F 區(qū)基因 SNPs 分子標(biāo)記與免疫性狀關(guān)系的研究[D]. 揚(yáng)州: 揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2007.

WU Chun-mei. (2007).StudyontheRelationshipbetweenSNPsmolecularmarkerandimmunetraitsinchickenMHCB-Fregion[D]. Master Dissertation. Yangzhou University, Yangzhou. (in Chinese)

[22] Cobb, B. A., & Kasper, D. L. (2005). Coming of age: carbohydrates and immunity.EuropeanJournalofImmunology, 35(2): 352-356.

[23] 朱曉慶, 李效振, 喬海博, 等.11味中藥多糖提取物對不同MHC B-LβII基因型雞新城疫抗體水平和IFN-γ、IL-4含量的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2013, 44(10):1 685-1 692.

ZHU Xiao-qing, LI Xiao-zhen, QIAO Hai-bo, et al. (2013). Effects of polysaccharide extracted from 11 kinds of traditional Chinese medicines on ND antibody level and IFN-γ, IL-4 contents in different MHC B-LβⅡgenotype chickens [J].ChineseJournalofAnimalandVeterinarySciences, 44(10):1,685-1,692. (in Chinese)