羅 濤，向雪靜，王中華

（攀枝花學(xué)院醫(yī)學(xué)院，四川 攀枝花 617000）

SD大鼠是國內(nèi)最常用醫(yī)學(xué)實驗動物之一，大鼠8周即性成熟，妊娠期為19～21天，為全年多動情性動物?，F(xiàn)如今，很多醫(yī)學(xué)動物實驗，都需要用到大鼠孕鼠模型。所以，如何準(zhǔn)確判斷雌鼠受孕，并知曉其懷孕天數(shù)，對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性起著關(guān)鍵性的作用。

1 實驗材料

實驗動物：未交配SD大鼠共60只，雌性40只，體重（230±10）g，雄性20只，體重（300±10）g。由昆明醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，清潔級。

飼養(yǎng)條件：室內(nèi)，室溫，自然光照，普通清潔級鼠飼料自由采食飼養(yǎng)，自由飲用自來水。

所需儀器：普通光學(xué)顯微鏡，消毒棉簽，潔凈玻片，生理鹽水。

2 方法

2.1 飼養(yǎng)合籠

60只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，雌雄分籠飼養(yǎng)，期間注意觀察大鼠的活動規(guī)律和飲食狀況。按照雌雄2∶1的比例進(jìn)行合籠，一般合籠時間為傍晚8點，正常供給飼料和水。于次日早晨8點進(jìn)行雌鼠的陰道涂片檢查。

2.2 陰道涂片

取待檢查的雌鼠置于另一空籠子鐵絲蓋上，拇指、食指和中指捏住其尾巴，輕輕向后翻起尾巴，露出陰道口，用沾有生理鹽水的小棉支在陰道口處稍停留，以讓雌鼠適應(yīng)，輕輕插入大鼠陰道并且緩慢轉(zhuǎn)動，慢慢將小棉支抽出，將小棉支上的黏液均勻涂在載玻片上，肉眼觀察并鏡檢（10×10倍）。

2.3 記錄并統(tǒng)計

對每只雌鼠的涂片進(jìn)行記錄，并采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計，采用x2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

驗中 fi sher精確概率法檢驗。

3 結(jié) 果

如果大鼠交配成功，陰道涂片下可以觀察到精子。普通光學(xué)顯微鏡100倍下觀察，若發(fā)現(xiàn)鏡下有呈長條形，頭端稍膨大、呈鉤狀物質(zhì)（如圖1），則可判定雌鼠已交配受孕。

圖1 SD大鼠精子涂片

觀察第一次的合籠交配，陰道涂片結(jié)果顯示17只雌鼠鏡下觀察到有精子，占比42.5%，7只處于動情前期，6只處于動情期，4只處于動情后期，有6只大鼠陰道脫落細(xì)胞無特殊變化。把鏡下未觀察到有精子的雌鼠再進(jìn)行第二次合籠后，陰道涂片發(fā)現(xiàn)，鏡下觀察到5只有精子，占比21.7%。再進(jìn)行第三次合籠后，涂片顯示鏡下有1只查出精子，占比5.5%。本實驗中發(fā)現(xiàn)，凡是陰道涂片發(fā)現(xiàn)精子的均為妊娠大鼠。經(jīng)過統(tǒng)計，有差異性（P＜0.05）。說明該方法確定妊娠的準(zhǔn)確性很高，幾乎為100%。

4 討 論

醫(yī)學(xué)動物實驗是科學(xué)研究中必不可少了，各種大鼠模型的制作對于我們的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究至關(guān)重要?？焖贉?zhǔn)確的制備孕鼠模型及清晰知曉大鼠孕齡是保證實驗順利進(jìn)行的前提條件。目前檢測大鼠受孕方法主要有兩種：陰栓檢查法和陰道涂片法[1，2]。陰栓檢查法就是在大鼠交配后查看雌鼠陰道是否有分泌物。但是，查找陰栓過程比較困難，如果觀察時間過早，陰栓可能還未形成。如果觀察時間過晚，可能存在液化和脫落的情況[3]，一旦陰栓脫落，掉入鼠籠墊料中，很難被找到。所以就造成結(jié)果的不準(zhǔn)確性。而陰道涂片的操作過程快速、準(zhǔn)確。不僅為醫(yī)學(xué)實驗動物模型的制作節(jié)約了時間，也保證了實驗?zāi)Ｐ偷臏?zhǔn)確性。

通過實驗結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)，大鼠初次合籠交配后，受孕率為42.5%。反復(fù)第二次合籠后檢查受孕率為21.7%，第三次合籠后檢查的受孕率只有5.5%。這個結(jié)果顯示，雌鼠再檢查出沒有受孕后，是可以反復(fù)合籠嘗試的，但是隨著合籠的次數(shù)越多，受孕率越低。我們分析，多次反復(fù)的對同一只雌鼠進(jìn)行陰道涂片，陰道刺激過多，或因操作過程中旋轉(zhuǎn)太猛，都可能會傷到陰道壁，造成受孕率越來越低，甚至出現(xiàn)不孕的結(jié)果。

綜上所述，采用陰道涂片法確定大鼠妊娠，具有快速、準(zhǔn)確、簡便、實用等優(yōu)點。保證了實驗?zāi)Ｐ偷臏?zhǔn)確性，不僅減少了模型制作時間，也降低了因?qū)嶒災(zāi)Ｐ偷牟粶?zhǔn)確而產(chǎn)生的成本。所以，陰道涂片對確定SD大鼠妊娠的應(yīng)用具有重要的價值。

[1] 李鳳奎.實驗動物與動物實驗方法學(xué)[M].鄭州大學(xué)出版社.2007.392-393.

[2] 何秋明,肖尚杰,夏惠敏.大鼠陰道圖片的觀察[J].廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,35(4):54-56.

[3] 張 森,王 新,韋旭斌,等.大鼠發(fā)情周期各階段的陰道細(xì)胞變化觀察[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2006,27(2):69-72.