周啟新 郝金斗 劉培輝

全身炎癥反應(yīng)綜合征是一種臨床上常見的危重癥, 病情進(jìn)展后可發(fā)展為多器官功能障礙綜合征, 嚴(yán)重者還會導(dǎo)致多器官功能衰竭, 早期診斷與治療是改善全身炎癥反應(yīng)綜合征預(yù)后及阻止炎癥損傷的關(guān)鍵［1］。IL-6基因多態(tài)性與IL-6血清水平相關(guān)聯(lián), 而且與全身炎性反應(yīng)綜合征的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2］。本研究針對IL-6基因多態(tài)性對小兒全身炎癥反應(yīng)綜合征治療的影響進(jìn)行探討, 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇 2016年 12 月～2017年12月入住醫(yī)院治療的50例全身炎癥反應(yīng)綜合征患兒作為觀察組, 另選取同期50例體檢正常的健康兒童作為對照組。所有研究對象家長均對本研究知情, 且簽署了知情同意書；全身炎癥反應(yīng)綜合征患兒符合相關(guān)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。觀察組中男27例,女 23例；年齡 0.22～5.50歲 , 平均年齡 (3.65±1.82)歲。對照組中男28例, 女22例；年齡0.25～5.52歲, 平均年齡(3.62±1.76)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 ①標(biāo)本采集：留取2 m l兩組研究對象的外周靜脈血, 觀察組在入院后第 2天清晨空腹時留取, 對照組在清晨空腹體檢時留取。1 m l外周靜脈血采用E D T A-N a2抗凝, 另1 m l外周靜脈血在室溫的條件下放置60 min, 在2000 r/min轉(zhuǎn)速下離心 10 min后留取血清, 并置于-20℃的冰箱中凍存以待備檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法對血清I L-6水平進(jìn)行測定［3］。②單核細(xì)胞的D N A提?。翰捎蔑柡头?氯仿法來提取抗凝外周靜脈血的基因組 D N A。③引物設(shè)計(jì)：根據(jù) I L-6基因-572位點(diǎn)的對應(yīng)基因序列來設(shè)計(jì)引物, 其中上5 GTGGGCTGAAGCAGGTGAA, 下游引物5’CTrTGTTGGAGGGTGAGGGT, 均由上海生物工程公司完成合成。④聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(P C R)反應(yīng)體系與反應(yīng)條件程序：P C R的總反應(yīng)體積為 30 μl, 其中有 1 μl模板 D N A(500 n g)、3 μl 10×B u f e r、3 μl 1.5 m m o l/L M g C l2、1 μl 10 m m o l/L d N T P、1 μl上游引物和 1 μl下游引物 (20 μm o l/L)、1.5 μg T a q D N A聚合酶、18.5 μl d d H2O。P C R的反應(yīng)條件：于96℃的條件下進(jìn)行預(yù)變性5 min, 于96℃下進(jìn)行預(yù)變性40 s, 63℃下進(jìn)行預(yù)變性40 s, 72℃下進(jìn)行預(yù)變性50 s, 共 33個循環(huán), 最后在72℃時延伸10 min。⑤P C R產(chǎn)物檢測：取8 μl P C R產(chǎn)物進(jìn)行染色, 上樣于含適量的溴化乙錠(E B)2%的瓊脂糖凝膠, 穩(wěn)壓為140 V, 行15～20 min電泳后進(jìn)行檢測, 在凝膠成像儀上對擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行觀察并記錄拍照, 并結(jié)合 D N A分子量標(biāo)準(zhǔn)對是否為目的片段進(jìn)行判斷。⑥I L-6基因提取、擴(kuò)增。提取外周血白細(xì)胞D N A, 設(shè)計(jì)特異引物, 應(yīng)用P C R技術(shù)擴(kuò)增目的基因, 應(yīng)用限制片斷長度多態(tài)分析聚合酶鏈反應(yīng)方法(RFLP/PCR)對兩組I L-6基因D 358 A/C和183 G/A位點(diǎn)多態(tài)性及其單體型進(jìn)行分析。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察比較兩組的C C基因型頻率、G G基因型頻率、C G基因型頻率、G等位基因頻率及I L-6水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組I L-6基因頻率與等位基因頻率比較 觀察組C C基因型頻率低于對照組, G G基因型頻率、C G基因型頻率高于對照組, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。觀察組G等位基因頻率明顯高于對照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組I L-6基因頻率與等位基因頻率比較［n(%)］

2.2 兩組I L-6水平比較 觀察組I L-6水平(292.32±85.43)n g/L高于對照組的(79.32±24.75)n g/L, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組I L-6水平比較(±s, n g/L)

表2 兩組I L-6水平比較(±s, n g/L)

注：與對照組比較, aP＜0.05

組別 例數(shù) I L-6水平觀察組 50 292.32±85.43a對照組 50 79.32±24.75 t 16.9337 P<0.05

3 討論

目前, 對全身炎癥反應(yīng)綜合征的病因尚未完全明確, 相關(guān)研究認(rèn)為, 全身炎癥反應(yīng)綜合征是由環(huán)境因素和遺傳因素共同作用而形成的多因子?。?］。IL-6是一種臨床上常見的細(xì)胞因子, 且血清中的IL-6濃度變化可作為全身炎癥反應(yīng)綜合征的發(fā)展與預(yù)后的判斷指標(biāo), IL-6對各種類型的淋巴細(xì)胞分裂和成熟均具有一定的促進(jìn)作用, 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)與NIA細(xì)胞免疫活性提高, 進(jìn)而增強(qiáng)了兒童免疫力［5］。當(dāng)出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征的相關(guān)臨床癥狀時, 患兒血液中的IL-6水平會明顯升高。

本研究數(shù)據(jù)顯示, 觀察組CC基因型頻率低于對照組, GG基因型頻率、CG基因型頻率高于對照組, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。觀察組G等位基因頻率明顯高于對照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。觀察組IL-6水平(292.32±85.43)ng/L高于對照組的(79.32±24.75)ng/L, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果說明：全身炎癥反應(yīng)綜合征患兒的IL-6基因啟動子區(qū)-572C/G多態(tài)性分布和健康兒童比較存在差異。G等位基因可能是全身炎癥反應(yīng)綜合征患兒的遺傳易感基因, 且G等位基因的攜帶者可能因血清 IL-6水平升高而提高了全身炎癥反應(yīng)綜合征的發(fā)病率。分析原因可能為：人的IL-6基因位于第7號染色體上, 全長為5 kb, 其含有內(nèi)含子4個、外顯子5個, 對其編碼區(qū)、上下游序列研究后發(fā)現(xiàn), IL-6基因多態(tài)性主要存在的位置為啟動子區(qū)-572 G/C、-597 G/A、-174 G/C、-373 AnTn。從理論上說, IL-6的-572 G/C、-597 G/A、-174 G/C、-373 AnTn基因多態(tài)性都可能是基因結(jié)合序列發(fā)生改變, 通過減弱或增強(qiáng)基因表達(dá)的調(diào)控和表達(dá)的水平,進(jìn)而對人群疾病易感性產(chǎn)生影響［6］。IL-6的-572 G/C、-597 G/A、-174 G/C、-373 AnTn基因多態(tài)性會對IL-6的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生影響, 且和較多疾病中的IL-6水平的特征性升高存在密切的相關(guān)性。-572位點(diǎn)的 C/G多態(tài)性與-174位點(diǎn)的G/C多態(tài)性均和炎癥性的疾病相關(guān), 全身炎癥反應(yīng)綜合征發(fā)病和IL-6基因-174位點(diǎn) G/C的多態(tài)性及-572位點(diǎn)C/G的多態(tài)性具有密切的相關(guān)性。進(jìn)而說明全身炎癥反應(yīng)綜合征的發(fā)生和IL-6基因-572 C/G的多態(tài)性具有相關(guān)性［7,8］。

綜上所述, IL-6基因多態(tài)性和全身炎癥反應(yīng)綜合征疾病的發(fā)病存在相關(guān)性, 且血清IL-6水平還會對基因多態(tài)性產(chǎn)生影響。

［1］藍(lán)海欣.布洛芬治療小兒全身炎癥反應(yīng)綜合征的臨床觀察.當(dāng)代醫(yī)學(xué), 2015, 21(23):127-128.

［2］李國華, 李秀瓊, 羅敏, 等.小劑量肝素對全身炎癥反應(yīng)綜合征患兒血TNF-α、IL-6的影響.鄂州大學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 23(2):108-109.

［3］周啟新, 郝金斗, 李寧.IL-6R基因SNP及單體型與小兒SIRS的關(guān)聯(lián)研究.吉林醫(yī)學(xué), 2017, 38(7):1274-1276.

［4］劉培輝, 楊躍萍, 鄒嶸, 等.IL-6基因多態(tài)性與小兒全身炎癥反應(yīng)綜合征的相關(guān)性研究.中國微生態(tài)學(xué)雜志, 2011, 23(1):24-27.

［5］焦秀紅.白細(xì)胞介素-6受體基因多態(tài)性與漢族兒童哮喘易感性的相關(guān)性.中國婦幼保健, 2017, 32(12):2682-2684.

［6］包進(jìn).新生兒全身炎癥反應(yīng)綜合征與IL-10基因多態(tài)性的相關(guān)性研究.吉林大學(xué), 2005.

［7］包進(jìn).新生兒全身炎癥反應(yīng)綜合征與IL-10基因多態(tài)性的相關(guān)性研究.中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2006, 14(10):11-13.

［8］鄒新英, 劉培輝, 楊躍萍, 等.白細(xì)胞介素-6基因-174G/C多態(tài)性與小兒全身炎癥反應(yīng)綜合征的相關(guān)性研究.中國婦幼保健, 2011, 26(12):1873-1875.