清華

云南中醫(yī)學院，云南 昆明 650500

化血膽Melasmaarvense(Benth.) Hand.-Mazz.為玄參科植物黑蒴屬的全草,性涼、微苦，具有祛濕、平肝、散瘀活血功效，可治療黃疸型肝炎、肝腫大、跌打傷瘀腫、痛經(jīng)等[1]。民間常用于化瘀消腫，對跌打損傷、外傷等導致的淤血腫塊有很好的消腫止痛之效。一般采取酒泡服用，外擦內(nèi)服。化血膽藥物在滇東南一帶：臨滄、普洱、紅河、版納、文山作為一種常用的活血化瘀藥，采用方便，使用頻率高，伹藥物資源已不足。因此，采用現(xiàn)代科學方法對該藥物開展初步藥效實驗研究，明確藥效，不但能為臨床用藥提供理論指導，還能為開發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的民族藥新藥提供實驗依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物 清潔級SD雄性大鼠40只，體重(180±30)g，由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供，動物合格證號：SCXK(川)2010-22。

1.2 藥品與試劑 化血膽由云南中醫(yī)學院中藥學院民族醫(yī)藥學院馮德強教授提供，鑒定為玄參科植物黑蒴屬的全草。復方丹參滴丸(天津天士力制藥有限公司，批號100207)，垂體后葉素(pit，天津生物化學制藥有限公司，批號20090702)，SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)，MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所)，硝酸異山梨酯(江蘇方強制藥有限責任公司，批號20091129)

1.3 BL-420E生物信號采集系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，臺式低速離心機(上海電機廠)。

2 方法

2.1 動物造模 參照文獻方法[2-3]制備大鼠急性心肌缺血模型。實驗前一天進行pit敏感性篩選。(挑選標準：①具備Q-RS-T波群；②J點上升或ST段抬高或壓低0.1mv以上，T波先高聳后低平或倒置的大鼠作為實驗用鼠)。正常對照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水，其余各組尾靜脈注射pit 0.6U/kg，10s內(nèi)勻速注射完畢。

2.2 分組及給藥 將挑選出的敏感SD大鼠40只，隨機分為正常組、模型組、硝酸異山梨醇酯組、復方組、化血膽組，每組8只。在正常飼養(yǎng)基礎(chǔ)上，同時給予相應成分溶液連續(xù)灌胃15 d后復制模型。

2.3 檢測指標

2.3.1 大鼠心電圖 末次給藥1.5 h后各組大鼠用10%水合氯醛0.25 mL/100 g腹腔注射，麻醉后背位固定。造模前，用BL-420E 生物信號采集系統(tǒng)采集II導聯(lián)正常心電圖5 min，造模后，分組記錄各組注射pit完畢后15 s、30 s，1、3、5、10、20 min的心電圖。

2.3.2 血清心肌酶(AST、CK、LDH)及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量 待大鼠心電圖記錄完畢后，腹主動脈取血，低速離心3 000 r/min，15 min，取血清保存于-20℃冰箱，送云南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢測。

3 結(jié)果

3.1 對大鼠急性心肌缺血心電圖的影響 ①模型組與正常組比較，缺血后各時間點J點升高與正常組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提示造模成功；②化血膽組與模型組比較具有統(tǒng)計學差異(P<0.01)，表明藥物對急性心肌缺血后20 min內(nèi)都有不同程度的預防作用；③統(tǒng)計學與正常組比較：在急性心肌缺血后10 min、20 min后與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示化血膽對急性心肌缺血后期具有具有穩(wěn)定、顯著的保護作用。見表1。

組別鼠數(shù)心電圖J點位移/mv15s30s1min3min5min10min20min正常組80.02±0.010.04±0.010.02±0.010.02±0.010.08±0.010.03±0.010.02±0.01模型組80.19±0.04??0.20±0.05??0.18±0.04??0.18±0.04??0.15±0.04??0.15±0.05??0.18±0.09??硝酸組80.11±0.02##0.10±0.03##0.09±0.03##0.08±0.01##0.09±0.05#0.10±0.03#0.08±0.03##復方組80.11±0.05##0.09±0.33##0.10±0.15##0.09±0.04##0.09±0.05#0.07±0.05##0.10±0.06#化血膽組80.06±0.02##?0.08±0.03##?0.05±0.03##?0.08±0.04##?0.08±0.04##?0.06±0.02##0.03±0.02##

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.01，##P<0.001。

3.2 對大鼠急性心肌缺血心率的影響 ①模型組與正常組比較，缺血后各時間點心率與正常組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；②藥物組與模型組比較：化血膽組對缺血后15s、10min與模型組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，化血膽組對缺血后(30s、1min、3min、5min、20min)pit導致的急性心肌缺血心率降低改善作用不明顯。見表2。

組別鼠數(shù)心率/次/min15s 30s 1min 3min 5min 10min 20min正常組8445±58441±61447±50434±45434±47425±51413±36模型組8333±99??316±75??269±82??284±65??297±70??316±92?321±96硝酸組8430±18#340±93292±159309±126315±100344±124359±126復方組8382±68351±94249±105264±56270±60310±50326±95化血膽組8424±43#365±48243±80238±82257±66228±75#257±128

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

3.3 對急性心肌缺血大鼠血清心肌酶的影響 ①模型組與正常組比較，缺血前后大鼠血清心肌酶差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示造模成功；②化血膽組與模型組比較，大鼠血清心肌酶差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，化血膽對急性心肌缺血后心肌損傷具有較好的保護作用。見表3。

組別鼠數(shù)AST/U/LCK/U/LLDH/U/L正常組8139.38±31.75 2014.75±905.91 1151.13±323.24模型組8 183.5±31.16??3065.75±1489.35? 1454.37±419.66?硝酸組8124.75±7.98###1988±675.09#891±223.56###復方組8 126.63±23.62###2192±763.35#649.38±214.64###化血膽8 100.08±18.11###1073.5±338.24### 301.5±215.9###

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。

3.4 對急性心肌缺血大鼠超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影響 各給藥組與模型組比較，SOD 及MDA差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明化血膽藥物對急性心肌缺血具有提高SOD活性，降低丙二醛含量，從而對心肌缺血發(fā)揮預防的保護作用。見表4。

組別鼠數(shù)SODMDA正常組8204.14±31.92 2.57±1.00模型組8168.01±16.03?5.78±3.59?硝酸組8 198.93±19.08###2.65±1.39###復方組8212.23±8.44###1.77±0.36###化血膽8 202.03±18.11###2.70±1.07###

注：與正常組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。

4 討論

心肌缺血指心臟的血液灌注減少, 導致心臟的供氧減少, 心肌能量代謝失常,不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)[4]。中醫(yī)根據(jù)心肌缺血病理過程中所表現(xiàn)出的癥狀多將其歸屬于“卒心痛”、“厥心痛”等范疇。目前抗心肌缺血中藥研究是中藥藥理研究熱點之一。心肌缺血是多種心臟疾患的初始階段, 臨床上主要表現(xiàn)為冠心病心絞痛、心肌梗死等心肌缺血性癥狀,屬于中醫(yī)“胸痹”、“心痛”范疇。其病性總屬本虛標實，心脈痹阻為發(fā)病主要病機，基本治法為活血化瘀、宣痹通陽、扶正固表等[5-6]。

心電圖測量作為無創(chuàng)性檢查手段，對心肌缺血的評估、診斷、預防等有很大幫助。血清心肌酶為多年來臨床上作為心肌壞死的檢測標記物，心肌缺血壞死時，細胞膜的完整性受到損害，膜的通透性增加，酶由細胞內(nèi)因釋放而減少，血清中酶活性增加。因此，心肌酶的檢測對心肌受損程度具有一定參考價值，也可以作為心肌梗塞范圍的定量指標[7]。從實驗結(jié)果分析筆者可以看出，化血膽對pit所致的大鼠急性心肌缺血具有很好的保護作用， 在降低血清心肌酶含量、提高SOD活性、降低MDA含量方面具有較好的治療作用，但其發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機理還有待進一步深入、系統(tǒng)的研究。

[1]云南思茅中草藥選[M]．云南:云南省思茅地區(qū)革命委員會,1971:162．

[2]徐叔云，卞如濂，陳修．藥理實驗方法學[M]．3版．北京：人民衛(wèi)生出版社,2012:1203.

[3]陳清華，莫莉，袁肇凱，等．養(yǎng)心通脈方有效成分部位抗心肌缺血的實驗研究[J]．中華中醫(yī)藥學刊，2008,9(9):1910-1912．

[4]明磊，盧丹，劉金平，等.抗心肌缺血中藥有效成分研究進展[J].人參研究，2010(3):38.

[5]張玲，中藥防治心肌缺血損傷作用機制研究進展[J]．遼寧中醫(yī)雜志，2010,37(10):2070．

[6]蔡光先，趙玉庸．中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)科學[M]．北京：中國中醫(yī)藥出版社，2005：198．

[7]Wang Q D，Pernow J,Sjoquist P O,et al.Pharmacological possibilities for protection against myocaedical reperfusion injury[J].Cardiovasc Res,2002,55(1):25-37.