羅煥，蔣超，朱麗，左方芳，田寧，孫璐

鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南鄭州 450052

腦卒中是一種高致殘率、高死亡率的急性腦血管事件[1]，在我國(guó)以及世界范圍都已成為人類死亡和致殘的重要病因之一，危害人類生命健康，降低生活質(zhì)量，對(duì)患者家庭以及整個(gè)社會(huì)造成沉重負(fù)擔(dān)。據(jù)全球疾病負(fù)擔(dān)調(diào)查分析，卒中是全球范圍內(nèi)生命損失第三大原因[2]。

腦卒中主要包括缺血性卒中和出血性卒中兩種，其中缺血性卒中占所有腦卒中患者的70%～80%。缺血性腦卒中又稱“腦梗死”，腦梗死不僅導(dǎo)致神經(jīng)元死亡、顱內(nèi)炎癥反應(yīng)，還能引起機(jī)體免疫系統(tǒng)改變[3]。淋巴細(xì)胞是機(jī)體的主要免疫細(xì)胞，在細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，可輔助體液免疫應(yīng)答。腦梗死的發(fā)生發(fā)展過程與免疫系統(tǒng)之間關(guān)系的研究正在逐步展開，但各研究結(jié)果不盡相同，且對(duì)Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞研究較少。為探討淋巴細(xì)胞亞群（如Th細(xì)胞、Tc細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞）在急性腦梗死早期中的變化及其意義，該院于2016年6月—2017年6月收集急性腦梗死患者的外周血，進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該病例對(duì)照研究連續(xù)納入了入住該院的急性腦梗死患者50例作為研究對(duì)象，均符合2010年中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南[4]，選取同時(shí)期門診健康體檢者50名作為對(duì)照組。其中男女比例均為1:1，年齡均大于40歲，兩組病例的一般臨床資料特點(diǎn)見表1。入選標(biāo)準(zhǔn)：急性腦梗死發(fā)生12 h之內(nèi)入院且NIHSS評(píng)分≥4分（出血性卒中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ惋@示腦損傷體積影響細(xì)胞和體液免疫[5]）。剔除標(biāo)準(zhǔn)：入院時(shí)伴有感染癥狀，伴有實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)（如血尿常規(guī)、ESR等）異常，惡性腫瘤，近期服用抗炎及免疫抑制劑等藥物。50名健康體檢者在此前的體格檢查和常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查均屬于健康狀態(tài)，同樣按照上述納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)篩選。該項(xiàng)檢測(cè)經(jīng)倫理委員會(huì)認(rèn)可，所有研究對(duì)象及其家屬均簽署知情同意書，所有操作均符合無菌操作原則。

1.2 檢測(cè)方法

所有研究對(duì)象均于入院首個(gè)清晨空腹靜脈取血等5 mL。淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：應(yīng)用該院檢驗(yàn)科提供的美國(guó)BD公司的FACSCalibur流式細(xì)胞儀及美國(guó)BD公司生產(chǎn)的抗體：總淋巴細(xì)胞（CD45），Th細(xì)胞（CD3、CD4）、Tc 細(xì)胞（CD3、CD8）、NK 細(xì)胞（CD16、CD56）、B細(xì) 胞 （CD19）、Th17 細(xì) 胞 （CD4、IL17A）、Treg 細(xì) 胞（CD4、CD25、FoxP3）。測(cè)定結(jié)果采用 CellQuest功能軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)獲取與分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，采取χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組一般臨床資料

腦梗死組年齡（57.43±16.72）歲，對(duì)照組（60.67±10.45）歲（t=0.726，P＞0.05），兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見表 1。

2.2 比較兩組淋巴細(xì)胞亞群的比例

比較兩組外周血中淋巴細(xì)胞亞群Th細(xì)胞、Tc細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的百分比（%），對(duì)照組總外周血淋巴細(xì)胞數(shù)為5.23×109/L，腦梗死組總外周血淋巴細(xì)胞數(shù)為11.96×109/L。腦梗死組較對(duì)照組Th細(xì)胞、Tc細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞比例降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞比例升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。 見表 2。

表1 兩組病例一般資料特點(diǎn)的比較

表2 兩組病例外周血淋巴細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞比例的比較[（±s），%]

表2 兩組病例外周血淋巴細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞比例的比較[（±s），%]

組別Th Tc NK B Th17 Treg腦梗死組（n=50）對(duì)照組（n=50）t值P值18±8.05 28±5.64 1.89 0.040 27±3.09 31±3.88 1.86 0.046 14±4.87 18±2.35 1.94 0.040 14±2.59 16±3.21 1.86 0.043 1.3±0.54 0.9±0.44 1.86 0.019 5.8±2.01 3.2±1.18 1.94 0.014

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)腦卒中可導(dǎo)致神經(jīng)-免疫系統(tǒng)紊亂，1974年Orra等[6]報(bào)導(dǎo)了腦卒中后免疫抑制，1977年Beseclovsky等[7]提出神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)假說，神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)之間的相互關(guān)系的研究越來越多。Barclay Sd等[8]研究認(rèn)為，T細(xì)胞上CD3+分子的減少可降低對(duì)抗原提呈細(xì)胞上的主要組織兼容性復(fù)合體抗原決定簇識(shí)別能力，從而減弱機(jī)體的免疫功能。目前，急性腦梗死與免疫系統(tǒng)的關(guān)系尚不明確，該研究旨在通過分析急性腦梗死早期患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化，來探索腦梗死后免疫系統(tǒng)的變化。

免疫系統(tǒng)是由多種免疫器官、免疫細(xì)胞和全身各級(jí)淋巴管構(gòu)成，免疫應(yīng)答可分為體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答2種。在正常免疫應(yīng)答過程中，淋巴細(xì)胞群及其亞群之間相互作用，從而完成對(duì)抗原物質(zhì)的識(shí)別、免疫應(yīng)答和清除，從而維持機(jī)體正常的免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定。淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的主要免疫細(xì)胞，不僅參與體液免疫應(yīng)答，而且在細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。在外周血中淋巴細(xì)胞約占白細(xì)胞的20%～45%。淋巴細(xì)胞可分為T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等，并可以進(jìn)一步分為若干亞型。CD3+T是總T淋巴細(xì)胞，它主要分為兩個(gè)亞群，即CD3+CD4+T（Th）細(xì)胞和CD3+CD8+T（Tc）細(xì)胞。Th細(xì)胞又可分為Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th3細(xì)胞、Th17細(xì)胞等。近年來，又命名了一種新的具有免疫抑制作用的Th細(xì)胞，即調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）。NK細(xì)胞是自然殺傷細(xì)胞，參與固有免疫應(yīng)答，能直接殺傷靶細(xì)胞，此外尚具有免疫調(diào)節(jié)功能[9]。

淋巴細(xì)胞及其亞群在免疫應(yīng)答反應(yīng)中起重要作用，目前Treg細(xì)胞在腦卒中中的變化及作用存在爭(zhēng)議[10-11]。與前人的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究相似[10]，該次發(fā)現(xiàn)急性腦梗死患者外周血 Th17 細(xì)胞[（1.3±0.54）%vs （0.9±0.44）%]、Treg 細(xì)胞[（5.8±2.01）%vs （3.2±1.18）%]的比例較正常對(duì)照組升高了，然而Th細(xì)胞（18±8.05）%vs（28±5.64）%、Tc 細(xì)胞[（27±3.09）%vs （31±3.88）%]、NK 細(xì)胞[（14±4.87）%vs （18±2.35）%]、B 細(xì)胞[（14±2.59）%vs （16±3.21）%]的比例降低了。這說明了急性腦梗死早期存在機(jī)體免疫系統(tǒng)的紊亂，淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量有所變化。據(jù)報(bào)導(dǎo)，在炎癥反應(yīng)中Th細(xì)胞能夠加劇炎癥反應(yīng)，而Treg細(xì)胞發(fā)揮炎癥抑制作用[12-13]；在腦梗死后Th17細(xì)胞的數(shù)量與比例均明顯升高，加重腦組織損傷[12,14]；在腦血管病相關(guān)炎癥反應(yīng)過程中若Treg細(xì)胞缺如或功能受到抑制則能夠促進(jìn)腦損傷相關(guān)的炎癥反應(yīng)，并能夠加重神經(jīng)功能的缺損程度[15]。該實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果結(jié)合上述研究報(bào)導(dǎo)說明在急性腦梗死后Th17細(xì)胞數(shù)量增加，可促進(jìn)腦卒中后炎癥反應(yīng)，而Treg細(xì)胞數(shù)量有所增加，能夠抑制腦卒中后炎癥及免疫反應(yīng)，抑制神經(jīng)功能缺損。B細(xì)胞主要參與體液免疫反應(yīng)，該研究中B細(xì)胞較對(duì)照組有所減少，可能是急性腦梗死后體液免疫反應(yīng)受到抑制所致；NK細(xì)胞是自然殺傷細(xì)胞，該研究中NK細(xì)胞較對(duì)照組有所減少，說明急性腦梗死后可能發(fā)生了自然殺傷作用或者免疫調(diào)節(jié)作用；Tc細(xì)胞是細(xì)胞毒性細(xì)胞，該研究中Tc細(xì)胞較對(duì)照組有所減少作用,說明在急性重癥腦梗死時(shí)可能產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用殺傷靶細(xì)胞，或者細(xì)胞毒性作用被抑制，這可能與機(jī)體感染和神經(jīng)保護(hù)機(jī)制有關(guān)。

綜上所述，急性腦梗死患者早期免疫功能的變化與腦卒中患者發(fā)病及病情變化相關(guān)。急性腦梗死早期患者免疫系統(tǒng)受到抑制，這可能是由于腦組織缺血缺氧受損后，神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)紊亂，使機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫受到抑制，從而發(fā)生卒中后免疫抑制綜合征。也可能與腦卒中后外周血Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞的比例變化相關(guān)。免疫因素在急性腦梗死早期中的作用及其相互作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。

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