李海鳳，羅賢磊，段亞梅，戴 毅，高 勇，張 軍，張璐璐，陳建民

(1.揚州大學生物科學與技術學院，江蘇揚州 225009； 2.揚州市職業(yè)大學，江蘇揚州 225012)

小麥赤霉病(Fusarium head blight,FHB)是由禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)等真菌侵染所造成的生育后期的氣候性病害，在溫暖濕潤和半濕潤地區(qū)(如中國、日本、南美等國)危害尤其嚴重。該病不僅導致小麥產量損失，而且籽粒中由赤霉菌產生的毒素脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)會危害人畜健康。由于普通小麥內源的抗赤霉病基因資源較少，其抗性還不能滿足抗赤霉病育種的需要。因此，在小麥近緣種屬中挖掘新的赤霉病抗源并將其導入小麥尤顯重要。

長穗偃麥草(Thinopyrumelongatum,syn.Agropyronelongatum,syn.Elytrigiaelongata)是小麥的近緣野生種，屬于小麥的三級基因源，具有抗銹病、白粉病、條紋花葉病、赤霉病等多種抗性，亦具有大穗多花、抗寒耐旱、耐鹽堿和籽粒蛋白質含量高等諸多優(yōu)良性狀[1-3]。在自然界中，長穗偃麥草有二倍體、四倍體和十倍體3種不同的倍性類型。一般認為二倍體長穗偃麥草[Thinopyrumelongatum(Host)A. L?ve,2n=2x=14,EE或EeEe]的E染色體是長穗偃麥草多倍體物種的基本染色體組之一[4-5]。研究表明，二倍體長穗偃麥草1E和7E染色體上攜帶有赤霉病抗性基因[6-10]。Dvorak[11]利用二倍體長穗偃麥草育成了整套中國春-長穗偃麥草附加系和代換系。由于帶有完整外源染色體的附加系和代換系的遺傳穩(wěn)定性和農藝性狀差，難以在生產上直接利用，因此培育遺傳穩(wěn)定及農藝性狀優(yōu)良的小麥-長穗偃麥草易位系對于小麥抗赤霉病育種具有現實意義。Knott等[12-14]通過誘導小麥7D染色體與十倍體長穗偃麥草的7el2染色體間部分同源重組獲得易位系KS10-2(7el2S·7el2L-7DL)和KS24-1(7DS·7el2L)，將長穗偃麥草攜帶的抗稈銹病及抗赤霉病基因轉入小麥；隨后，Shen和Zhang等[15-16]報道十倍體長穗偃麥草7el2染色體長臂攜有抗赤霉病基因Fhblop。為了將二倍體長穗偃麥草7E染色體抗赤霉病基因轉入栽培小麥，張璐璐等[17]用60Co-γ射線(劑量30 000 rad)照射[中國春-二倍體長穗偃麥草7E代換系DS7E(7B)×揚麥16]的F2代種子，自M1至M4通過抗赤霉病接種和染色體特異分子標記鑒定，從M4代中獲得小麥-長穗偃麥草7EL抗赤霉病易位系TW-7EL2。本研究以TW-7EL2為材料，利用熒光原位雜交、分子標記技術和赤霉病抗性評價，繼續(xù)對該易位系進行染色體身份及抗性鑒定。攜帶目標基因的小片段易位染色體遺傳穩(wěn)定性更好，可有效減少外源染色體帶來的冗余基因，是轉移外源有利基因的理想材料，因此，本研究同時利用60Co-γ射線輻射處理該易位系的花粉，誘導產生長穗偃麥草染色體7EL的不同片段大小的結構變異材料，以期為赤霉病抗性基因定位和向小麥導入長穗偃麥草有益基因奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

小麥-長穗偃麥草7EL易位系TW-7EL2、小麥-長穗偃麥草7E短臂附加系W-DA7ES，由揚州大學提供；二倍體長穗偃麥草，中國春-長穗偃麥草二體附加系DA7E，7E端二體附加系DA7EL、DA7ES，中國春-長穗偃麥草二體代換系DS7E(7A)、DS7E(7B)和中國春，由加拿大農業(yè)部Ottawa研究中心惠贈；安農8455、蘇麥3號和揚麥16，由江蘇里下河地區(qū)農業(yè)科學研究所惠贈；中國春缺-四體材料N7AT7B、N7BT7A和N7DT7A，由山東農業(yè)大學惠贈。

1.2 試驗方法

1.2.1 花粉輻射及輻射后代處理

將小麥-長穗偃麥草7EL純合易位系TW-7EL2即將開花的穗子(中部小穗基部小花的花藥呈微黃色的穗子)從莖基部剪下，置于盛有清水的三角瓶中，用60Co-γ 射線照射處理，輻射劑量1 200 rad，劑量率為100 rad·min-1。取輻射處理當天收集的新鮮花粉授予已去雄的小麥品種揚麥158，收獲雜交種M1。利用基因組原位雜交(GISH)技術檢測M1植株中7EL染色體的結構變異體，統(tǒng)計外源染色體小片段頂端易位、小片段中間插入易位以及7EL頂端缺失的M1植株數。從每株M1變異材料中選取2～3個穗子去雄后與揚麥158回交，其余穗子套袋自交獲得后代種子。

1.2.2 細胞學鑒定

易位系根尖體細胞有絲分裂中期染色體制片參照Gill等[18]的方法，在相差顯微鏡下進行染色體計數、觀察，放入-70℃超低溫冰箱中冷凍后揭去蓋玻片，在70%、95%、100% 乙醇中梯度脫水后進行熒光原位雜交(fluorescent in situ hybridization,FISH)。雙色熒光原位雜交參照Zhang等[19]的方法，以Fluorescein-12-dUTP標記的長穗偃麥草基因組DNA和以 Digoxinin-11-dUTP 標記的質粒 pSc119.2 為探針進行熒光原位雜交，以中國春的基因組DNA為封阻[23-24]。雜交洗滌后用DAPI(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色，每張載玻片加10 μL DAPI(含抗褪變劑)復染，蓋上蓋玻片。在Nikon(Ni-U)熒光顯微鏡下進行觀察，尼康DS-U3數碼相機攝取圖像。

1.2.3 分子標記鑒定

參照Sharp等[20]的方法提取供試材料的DNA，利用長穗偃麥草染色體7E短臂特異標記P7E_No.39[21]、7E長臂特異標記Xgwm333[7，22]對易位系及誘導后代進行分析。擴增反應體系與程序參見Taq酶(TaKaRa，Japan)說明書，其中退火溫度50～60 ℃，延伸時間1 min 。擴增產物用 1%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，在凝膠成像系統(tǒng)中觀察、照相。

1.2.4 赤霉病抗性鑒定

于2015-2017年在揚州大學試驗田采用單花滴注接種禾谷鐮刀菌(菌種為本地強毒株的分生孢子混合液，由江蘇省里下河地區(qū)農業(yè)科學研究所惠贈)對供試材料進行抗病性鑒定，每份材料接種 10～20穗，接種 21 d后，調查接種穗的發(fā)病小穗數和總小穗數。病小穗率=病小穗數/總小穗數×100%。

2 結果與分析

2.1 易位系的細胞學鑒定結果

雙色熒光原位雜交結果顯示，一對易位染色體的長穗偃麥草部分有綠色彌散信號，并且在其端部顯示出pSc119.2的較強紅色信號，與7EL長臂相似，進一步證實易位染色體中長穗偃麥草片段為7E長臂(圖1A)；在易位染色體中小麥片段端部顯示出較強的pSc119.2雜交信號，與染色體7B短臂的雜交信號相似(圖1B)。由此推測該易位染色體是小麥7B短臂和長穗偃麥草7E染色體長臂的整臂易位。

花粉母細胞(PMC)減數分裂中期I染色體構型分析表明，一對易位染色體在絕大多數PMC中均能配對成環(huán)狀二價體(圖1C)。在所觀察的35個花粉母細胞中，平均每個花粉母細胞中含0.23個單價體，1.74個棒狀二價體，19.06個環(huán)狀二價體，0.11個三價體，三價體并不涉及小麥與長穗偃麥草的易位。上述結果表明該易位系具有較好的細胞學穩(wěn)定性。

2.2 易位系的分子標記鑒定結果

利用標記P7E_No.39和Xgwm333對中國春、揚麥16、二倍體長穗偃麥草等材料進行PCR擴增，結果表明，標記P7E_No.39在易位系TW-7EL2 中未能擴增出約330 bp的7ES特異條帶(圖2)，而標記Xgwm333能擴增出約130 bp的7EL特異條帶(圖3)，說明該易位染色體長穗偃麥草部分來自7EL。利用標記Xgwm333對中國春、揚麥16、中國春的第七同源群缺-四體、長穗偃麥草的7E附加系、代換系和易位系進行分析，結果表明，中國春缺體7B-四體7A(N7BT7A)、小麥-長穗偃麥草代換系DS7E(7B)和易位系TW-7EL2均缺失約170 bp的特異條帶，而代換系DS7E(7B)與易位系TW-7EL2的帶型一致，說明該易位系中缺失小麥的7BL染色體。綜合細胞學研究結果，該易位系的易位染色體涉及小麥7BS和長穗偃麥草7EL染色體，命名為T7BS·7EL易位。

2.3 易位系赤霉病抗性鑒定

連續(xù)3年的赤霉病接種鑒定結果表明，易位系T7BS·7EL的赤霉病抗性顯著高于感病親本中國春及感病對照安農8455，也顯著優(yōu)于中抗赤霉病親本揚麥16，與抗病對照蘇麥3號差異不顯著(表1)。穗部發(fā)病程度見圖4。

A:綠色為長穗偃麥草基因組DNA雜交信號,紅色為pSc119.2雜交信號,箭頭示易位染色體; B:染色體7E,T7BS·7EL和7B的熒光原位雜交及模式圖,點狀綠色和紅色信號為pSc119.2雜交信號; C:易位系TW-7EL2 減數分裂中期I染色體的熒光原位雜交,小麥染色體呈紅色,長穗偃麥草染色體呈黃綠色; 箭頭示配成環(huán)狀二價體的易位染色體T7BS·7EL。

In panel A,Th.elongatumgenomic DNA was visualized with green signals,and pSc119.2 was visualized with red signals; the arrows show translocation chromosomes. In panel B,from the left to right:FISH patterns of chromosome 7E,the translocation chromosome T7BS·7EL and chromosome 7B; pSc119.2 was visualized with green and red spot signals. In panel C,pollen mother cells at MI of the translocation line TW-7EL2; wheat chromosomes display red color,andTh.elongatumchromosome segments show yellow-green color; arrow shows the ring bivalent formed by a pair of T7BS·7EL.

圖1易位系TW-7EL2的染色體熒光原位雜交結果(2n=42)

Fig.1ImagesofchromosomesinthetranslocationlineTW-7EL2(2n=42)detectedbyFISH

M:Marker 2501; 1:中國春; 2:揚麥16; 3:二倍體長穗偃麥草; 4:中國春-長穗偃麥草附加系DA7E; 5:7E短臂附加系; 6:7E長臂附加系; 7:中國春-長穗偃麥草代換系DS7E(7B); 8:易位系T7BS·7EL。

M:Marker 2501; 1:Chinese Spring; 2:Yangmai 16; 3:Th.elongatum; 4:DA7E; 5:DA7ES; 6:DA7EL; 7:DS7E(7B); 8:T7BS·7EL.

圖2標記P7E_No.39(7ES)的擴增結果

Fig.2ProductsamplifiedwithmarkerofP7E_No.39(7ES)

2.4 長穗偃麥草7EL小片段結構變異體的創(chuàng)制

本研究共得到M1植株96株，對這些材料進行根尖細胞有絲分裂中期染色體GISH鑒定，共檢測到含有7EL染色體小片段結構變異的單株15株，占M1觀察植株數的15.62%。除6株只含有單個小片段中間插入或者頂端易位外(圖5A、圖5B)，其余9株細胞內同時具有兩種7EL染色體小片段結構變異，包括不同長度的小片段頂端易位、小片段中間插入易位染色體和7EL頂端缺失染色體(圖5C、圖5D)。在獲得的15株材料中，有2株在抽穗前死亡，其余13株自交結實率差，均通過與揚麥158回交獲得回交種子，使易位染色體得以傳遞下來。分離各種類型易位系的純合體正在進行中。

M:Marker 2501; 1:中國春; 2:揚麥16; 3:缺體7A四體7B; 4:缺體7B四體7A; 5:缺體7D四體7A; 6:二倍體長穗偃麥草; 7:中國春-長穗偃麥草附加系DA7E; 8:7E短臂附加系; 9:7E長臂附加系; 10:中國春-長穗偃麥草代換系DS7E(7B); 11:易位系T7BS·7EL。

M:Marker 2501;1:Chinese Spring; 2:Yangmai 16; 3:N7AT7B; 4:N7BT7A; 5:N7DT7A; 6:Th.elongatum; 7:DA7E; 8:DA7ES; 9:DA7EL; 10:DS7E(7B); 11:T7BS·7EL.

圖3標記Xgwm333(7BL,7EL)的擴增結果

Fig.3ProductsamplifiedwithmarkerofXgwm333(7BL,7EL)

A:易位系7BS·7EL; B:7ES端體附加系; C:中國春; D:揚麥16; E:蘇麥3號; F:安農8455。

A:T7BS·7EL; B:W-DA7ES; C:Chinese Spring; D:Yangmai 16; E:Sumai 3; F:Annong 8455.

圖4 供試材料的赤霉病抗性鑒定結果

表中數據為3年赤霉病病小穗率；同一列數據后的不同小寫字母表示在0.05 水平上有顯著差異。

The data in the table are the spikelet rate of scab for 3 years; Different letters following values indicate significant difference among lines at 0.05 level.

3 討 論

Kibridge-Sebuny等[13]報道，利用中國春ph1b突變體誘導小麥7D染色體與十倍體長穗偃麥草的7el2染色體間部分同源重組，選育到易位系7el2S·7el2L-7DL(KS10-2)和7DS·7el2L(KS24-1)[14]。目前，這兩份易位系已被作為中間材料將7el2的抗赤霉病基因和抗稈銹病基因 Sr43轉入硬粒小麥和普通小麥中[27-28]。Guo等[25]利用中國春ph1b突變體與7DS·7el2L整臂易位雜交，從后代中篩選出一個約含有1/3長穗偃麥草7el2長臂的小片段易位系，將抗赤霉病基因 Fhb7定位于7el2L上，并獲得聚合 Fhb1與 Fhb7抗病基因的小麥抗赤霉病種質。在已報道的小麥-長穗偃麥草代換系和易位系中，來源于十倍體長穗偃麥草的一對部分同源染色體7el1和7el2，與二倍體長穗偃麥草7E染色體具有部分同源性，7E與7el1間配對頻率為13.6%，而7el1和7el2染色體間配對頻率為71.64%[26]。赤霉病抗性研究表明，7el1的代換系和易位系均沒有抗性，而整臂易位7DS·7el2L具有抗性[7]。二倍體長穗偃麥草的E組染色體是長穗偃麥草的基本染色體組之一，深入開展二倍體長穗偃麥草的研究可以推動和加速偃麥草屬基因的開發(fā)和利用。張璐璐等[17]用60Co-γ射線照射DS7E(7B)×揚麥16的F2代種子，從M4代中成功獲得小麥-長穗偃麥草7EL抗赤霉病易位系。在此工作基礎上，本研究利用雙色GISH-FISH結合分子標記對易位系TW-7EL2進行鑒定，表明該易位系為涉及小麥7BS和長穗偃麥草7EL的整臂易位，遺傳穩(wěn)定性好。赤霉病抗性鑒定表明，該易位系具有較高的赤霉病抗性，是小麥抗赤霉病育種又一新的種質材料。

A:箭頭所指為一條中間插入易位染色體; B:箭頭所指為一條頂端易位染色體; C:白色箭頭所指為一條頂端易位染色體,黃色箭頭所指為一條中間插入易位染色體; D:白色箭頭所指為小片段頂端易位染色體,藍色箭頭為頂端缺失染色體。小麥染色體呈紅色,長穗偃麥草染色體呈黃綠色。以二倍體長穗偃麥草基因組DNA作探針，中國春基因組DNA為封阻進行GISH。

A:The arrow shows an interstitial chromosome with small segment; B:The arrow shows a small segment terminal translocation chromosome; C:The white arrow shows a small segment terminal translocation chromosome; the yellow arrow shows an interstitial chromosome with different segment of chromosome arm 7EL; D:The white arrow shows a small segment terminal translocation chromosome; the blue arrow shows a deletion chromosome of chromosome arm 7EL. Wheat chromosomes display red color,andTh.elongatumchromosome segments show yellow-green color. Total genomic DNA ofTh.elongatum(2X) was labeled as probe and Chinese spring genomic DNA as block for GISH.

圖5含有7EL結構變異染色體的M1植株根尖細胞有絲分裂中期染色體GISH

Fig.5GISHpatternsofchromosomeaberrationsinvolvingthelongarmofchromosome7Eof

Th.elongatumatthemitoticmetaphaseintheroot-tipcellsofM1plants

小麥異源易位系在小麥遺傳改良中具有重要的意義，培育攜有外源目的基因的片段盡可能小的易位系在小麥育種中利用價值較高。電離輻射是一種有效誘導染色體結構變異的方法[29]。陳升位等[30]利用60Co-γ 射線處理T6AL·6VS整臂易位系的成熟雌配子，從534株M1材料中檢測到97株涉及6VS染色體的小片段結構變異植株，誘變頻率為18.16%。Zhao等[31]利用60Co-γ 射線處理T4DL·4VS純合易位系成熟花粉，從266株M1材料中檢測到含有4VS染色體小片段結構變異的單株40株，誘變頻率為15.04%。本研究利用60Co-γ射線處理T7BS·7EL純合易位系即將開花的穗子，從96株M1材料中檢測到含有7EL染色體的小片段結構變異的單株15株，占M1觀察植株數的15.62%，表明通過電離輻射處理小麥-長穗偃麥草易位系的成熟花粉，可以快速獲得較多類型的變異體，達到較高的誘變效應。以整臂易位系作為輻射材料，由于僅涉及外源染色體的單條臂，針對性強，外源染色體臂發(fā)生一次斷裂即可產生小片段中間易位或頂端易位，或者形成缺失。但是，由于電離輻射在誘發(fā)易位的同時也會引起小麥染色體本身存在較多變異，導致變異植株難以結實或后代種子不發(fā)芽、夭亡或不育，因此，為了解決輻射雜種M1代中的易位染色體通過自交傳遞率低的問題，本研究中利用含有結構變異染色體的植株做母本與小麥品種繼續(xù)回交，使得M1代中具有結構變異的染色體通過雌配子得以傳遞，降低了后代中的結構變異染色體數量，在后代選擇中再利用分子標記選擇，保留具有長穗偃麥草染色體的植株，隨著自交世代的增加，可獲得結實正常的長穗偃麥草染色體小片段易位系。目前，選育涉及染色體7EL的小片段純合易位系的工作及赤霉病抗性鑒定正在進行中，有望獲得不同類型的變異體用于抗赤霉病基因定位和分子標記物理作圖。

參考文獻：

[1] DVORAK J,EDGE M,ROSS K.On the evolution of the adaptation ofLophopyrumelongatumto growth in saline environments [J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,1988,85(11):3805.

[2] ZHONG G Y,DVORAK J.Chromosomal control of the tolerance of gradually and suddenly imposed salt stress in theLophopyrumelongatumand wheat,TriticumaestivumL.genomes [J].TheoreticalandAppliedGenetics,1995,90(2):229.

[3] LI Z S,HAO S.Chromosome engineering of wheat in China [J].CriticalReviewsinPlantSciences,1992,10(5):471.

[4] 董玉琛,鄭殿生.中國小麥遺傳資源 [M].北京:中國農業(yè)出版社,2000:183.

DONG Y C,ZHENG D S.Genetic resource ofTriticeaein China [M].Beijing:China Agricultural Press,2000:183.

[5] 唐朝暉,劉少翔,張?zhí)m萍,等.二倍體長穗偃麥草E組染色體研究進展 [J].山西農業(yè)科學,2007,35(5):3.

TANG Z H,LIU S X,ZHANG L P,etal.Advances in research on E genome ofThinopyrumelongatum[J].JournalofShanxiAgriculturalSciences,2007,35(5):3.

[6] 劉登才,鄭有良,王志容,等.影響小麥赤霉病抗性的Lophopyrumelongatum染色體定位 [J].四川農業(yè)大學學報,2001,19(3):200.

LIU D C,ZHENG Y L,WANG Z R,etal.Distribution of chromosomes in diploidLophopyrumelongatum(Host) A.L?ve that influences resistance to head scab of common wheat [J].JournalofSichuanAgriculturalUniversity,2001,19(3):200.

[7] SHEN X R,Kong L R,OHM H.Fusarium head blight resistance in hexaploid wheat(Triticumaestivum)-Lophopyrumgenetic lines and tagging of the alien chromatin by PCR markers [J].TheoreticalandAppliedGenetics,2004,108:808.

[8] WANG J R,WANG L,GULDEN S,etal.RNA profiling of Fusarium head blight-resistant wheat addition lines containing theThinopyrumelongatumchromosome 7E [J].CanadianJournalofPlantPatholog,2010,32(2):188.

[9] JAUHAR P P,PETERSON T S,XU S S.Cytogenetic and molecular characterization of a durum alien disomic addition line with enhanced tolerance to Fusarium head blight [J].Genome,2009,52(5):467.

[10] 陳士強,黃澤峰,張 勇,等.中國春背景下長穗偃麥草抗赤霉病相關基因的染色體定位 [J].麥類作物學報,2012,32(5):839.

CHEN S Q,HUANG Z F,ZHANG Y,etal.Chromosomal location of the genes associated with FHB resistance ofLophopyrumelongatumin Chinese Spring background [J].JournalofTriticeaeCrops,2012,32(5):839.

[11] DVORAK J.Disomic and ditelosomic additions of diploidAgropyronelongatumchromosomes toTriticumaestivum[J].Genome,1974,16(2):399.

[12] KNOTT D R,DVORAK J,NANDA J S.The transfer to wheat and homoeology of anAgropyronelongatumchromosome carrying resistance to stem rust [J].Genome,1977,19(1):75.

[13] KIBIRIDGE-SEBUNYA I,KNOTT D R.Transfer of stem rust resistance to wheat from anAgropyronchromosome having a gametocidal effect [J].Genome,1983,25(3):215.

[14] KIM N S,ARMSTRONG K,KNOTT D R.Molecular detection ofLophopyrumchromatin in wheat-Lophopyrumrecombinants and their use in the physical mapping of chromosome 7D [J].TheoreticalandAppliedGenetics,1993,85(5):561.

[15] SHEN X R,OHM H.Fusarium head blight resistance derived fromLophopyrumelongatumchromosome 7E and its augmentation with Fhb1 in wheat [J].PlantBreeding,2006,125(5):424.

[16] ZHANG X L,SHEN X R,HAO Y F,etal.A genetic map ofLophopyrumponticumchromosome 7E,harboring resistance genes to Fusarium head blight and leaf rust [J].TheoreticalandAppliedGenetics,2011,122(2):263.

[17] 張璐璐,陳士強,李海鳳,等.小麥-長穗偃麥草7E抗赤霉病易位系培育 [J].中國農業(yè)科學,2016,49(18):3477.

ZHANG L L,CHEN S Q,LI H F,etal.Development of wheat-Thinopyrumelongatumtranslocation lines resistant to Fusarium head blight [J].ScientiaAgriculturaSinica,2016,49(18):3477.

[18] GILL B S,FRIEBE B,ENDO T R.Standard karyotype and nomenclature system for description of chromosome bands and structural aberration in wheat [J].Genome,1991,34(5):830.

[19] ZHANG P,LI W,FRIEBE B,etal.Simultaneous painting of three genomes in hexaploid wheat by BAC-FISH [J].Genome,2004,47(5):979.

[20] SHARP P J,CAO S,DESAI S,etal.The isolation,characterization and application in theTriticaleof a set of wheat RFLP probes identifying each homoeologous chromosome arm [J].TheoreticalandAppliedGenetics,1989,78(3):342.

[21] CHEN S Q,HUANG Z F,DAI Y,etal.The development of 7E chromosome-specific molecular markers forThinopyrumelongatumbased on SLAF-seq technology [J].PLoSOne,2013,8(6):e65122.

[22] SOMERS D J,ISAAC P,EDWARD K.A high-density microsatellite consensus map for bread wheat(TriticumaestivumL.) [J].TheoreticalandAppliedGenetics,2004,109(6):1105.

[23] MUKAI Y,NAKAHARA Y,YAMAMOTO M.Simultaneous discrimination of the three genomes in hexaploid wheat by multicolor fluorescence in situ hybridization using total genomic and highly repeated DNA probes [J].Genome,1993,36(3):489.

[24] LINC G,SEPSI A,MOLNAR-LANG M.A FISH karyotype to study chromosome polymorphisms for theElytrigiaelongateE genome [J].CytogeneticGenomeResearch,2012,136(2):138.

[25] GUO J,ZHANG X L,HOU Y,etal.High-density mapping of the major FHB resistance gene Fhb7 derived fromThinopyrumponticumand its pyramiding with Fhb1 by marker-assisted selection [J].TheoreticalandAppliedGenetics,2015,128(11):2301.

[26] DVORAK J.Meiotic pairing between single chromosomes of diploidAgropyrumelongatumand decaploidA.elongatuminTriticumaestivum[J].CanadianJournalofGeneticsandCytology,1975,17(3):329.

[27] FORTE P,VIRILI M E,KUZMANOVIC L,etal.A novel assembly ofThinopyrumponticumgenes into the durum wheat genome:Pyramiding lines previously engineered for other beneficial traits from the same alien species [J].MolecularBreeding,2014,34(4):1701.

[28] NIU Z,KLINDWORTH D L,YU G,etal.Development and characterization of wheat lines carrying stem rust resistance gene Sr43 derived fromThinopyrumponticum[J].TheoreticalandAppliedGenetics,2014,127:969.

[29] BIE T D,CAO Y P,CHEN P D.Mass production of intergeneric chromosomal translocations through pollen irradiation ofTriticumdurum-Haynaldiavillosaamphiploid [J].JournalofIntegrativePlantBiology,2007,49(11):1619.

[30] 陳升位,陳佩度,王秀娥.利用電離輻射處理整臂易位系成熟雌配子誘導外源染色體小片段易位[J].中國科學C輯(生命科學),2008,38(3):346.

CHEN S W,CHEN P D,WANG X E.Inducement of chromosome translocation with small alien segments by irradiating mature female gametes of the whole arm translocation line [J].ScienceChinaLifeScienece,2008,51(4):346.

[31] ZHAO R H,WANG H Y,JIA Q,etal.Development of EST-PCR Markers for the chromosome 4V ofHaynaldiavillosaand their application in identification of 4V chromosome structural aberrant [J].JournalofIntegrativeAgriculture,2014,13(2):282.