廖彥昭 陳圳煒

(中山大學(xué)附屬第八醫(yī)院腎內(nèi)科 深圳 518033)

腎臟疾病作為臨床中常見的疾病類型，隨著近年來慢性腎臟疾病發(fā)病率的不斷提升，如何實(shí)現(xiàn)對慢性腎臟疾病的有效治療成為了諸多研究學(xué)者所關(guān)注的內(nèi)容。臨床經(jīng)驗(yàn)表明，終末期腎臟病約占慢性腎臟疾病的1.7%～5.8%[1～3]。基于此，本研究為了研究MHD患者血管鈣化的早期診斷和預(yù)防，隨機(jī)選取2017年5月～2018年3月于院內(nèi)接受自體動靜脈內(nèi)瘺成形術(shù)治療的70例MHD患者，根據(jù)其是否出現(xiàn)了RAC將其分為鈣化組和非鈣化組，分析患者RAC與OPN、OPG和BMP-2的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2017年5月～2018年3月于中山大學(xué)附屬第八醫(yī)院接受自體動靜脈內(nèi)瘺成形術(shù)治療的70例MHD患者作為研究對象，其中男性患者41例，女性患者29例，年齡為29歲～79歲，平均年齡(51.74±13.89)歲。所有患者均于院內(nèi)接受了自體動靜脈內(nèi)瘺成形術(shù)治療，且簽署了院內(nèi)倫理委員會批準(zhǔn)的相關(guān)知情同意書。排除了近期維生素D沖擊治療、急性感染、創(chuàng)傷、腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、甲狀旁腺切除術(shù)、抗癲癇治療、應(yīng)用免疫抑制劑和糖皮質(zhì)激素治療的患者。通過術(shù)后對患者橈動脈修剪后用10%中性福爾馬林固定24h后石臘包埋，切片。首先進(jìn)行HE染色，初步觀察血管結(jié)構(gòu)，觀察血管內(nèi)膜、中膜、外膜的基本層次，以及是否存在其他血管病變，采用鈣鹽特異性染色法(茜素紅S法)對動脈進(jìn)行鈣化染色，鈣化染色陽性表現(xiàn)為橙紅色。每例染片8張，鈣化積分取平均值，<1定義為無鈣化，1～2.5為輕中度鈣化，>2.5～4為重度鈣化。根據(jù)鈣化檢測結(jié)果將患者分為無鈣化組、鈣化組(輕中度鈣化、重度鈣化)。鈣化組32例，男19例，女13例，年齡為29歲～77歲，平均年齡為(50.28±14.45)歲，血液透析時間為(7.40±5.53)年，其中輕度鈣化患者12例，重度鈣化患者20例；非鈣化組38例，男22例，女16例，年齡為32歲～79歲，平均年齡為(52.97±12.90)歲，血液透析時間為(7.38±4.89)年。兩組患者的一般資料相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

1.2 方法

采取免疫組化法檢測OPN、OPG和BMP-2水平，操作方法如下：(1)使用二甲苯對石蠟組織脫蠟處理，梯度酒精至水化；(2)將10g/L的雙氧水阻斷溶液對內(nèi)源性過氧化物酶的活性進(jìn)行處理，并于室溫條件下孵育10min；(3)使用枸櫞酸緩沖液對組織抗原進(jìn)行熱修復(fù)，同時滴入非免疫性動物血清對組織中的非特異性吸附進(jìn)行阻斷，室溫條件下孵育10min；(4)分別將OPN、OPG和BMP-2抗體滴入不同的組織標(biāo)本中，放置于37℃的孵育器內(nèi)孵育1～2h，隨后在光學(xué)顯微鏡下控制染色3～10min。在光學(xué)顯微鏡下，OPG、OPN、BMP-2陽性信號位于胞質(zhì)，為棕褐色。免疫組化結(jié)果使用Image Proplus 6.0數(shù)碼分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，根據(jù)組織的染色情況制定陽性判定標(biāo)準(zhǔn)如下：細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色即可判定為陽性細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對統(tǒng)計數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)，計量資料使用配對t檢驗(yàn)，用Spearman秩相關(guān)系數(shù)分析，r表示相關(guān)系數(shù)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01表示差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組患者的OPN、OPG和BMP-2檢測結(jié)果

鈣化組的OPN、OPG和BMP-2陽性率均明顯高于非鈣化組(P<0.01)，見表1。

2.2 MHD患者RAC與OPN、OPG和BMP-2的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MHD患者的RAC程度與OPN、OPG和BMP-2均呈正相關(guān)(r=0.586，0.621，0.653，P<0.05)，即MHD患者的橈動脈鈣化程度越高，患者的OPN、OPG和BMP-2陽性率越高。

表1 兩組患者的OPN、OPG和BMP-2檢測結(jié)果比較[n(%)]

組別nOPNOPGBMP-2陽性陰性陽性陰性陽性陰性鈣化組3222(68.75)10(31.25)24(75.00)8(25.00)23(71.88)9(28.12)非鈣化組3811(28.95)27(71.05)10(26.32)28(73.68)8(21.05)30(78.95)χ211.04416.48318.185P<0.001<0.001<0.001

3 討論

RAC作為MHD患者常見的并發(fā)癥類型，其主要是因?yàn)槭艿解}磷代謝紊亂等因素的影響，以及體內(nèi)氧化應(yīng)激和炎癥狀態(tài)等原因，從而導(dǎo)致橈動脈出現(xiàn)了鈣化，而MHD作為治療終末期腎衰竭患者的首選途徑，如何降低MHD患者的RAC發(fā)生率也成為了臨床治療中需要解決的問題。近年來，大量研究學(xué)者針對MHD患者RAC的影響因素進(jìn)行了調(diào)查，劉艷賓等[3]認(rèn)為OPN作為一種具有多種功能的分泌性磷酸化糖蛋白，同時也是人體中重要的外基質(zhì)蛋白，在細(xì)胞的擴(kuò)散以及黏附中發(fā)揮出了至關(guān)重要的作用。涂曦文等[4]指出，OPG是一種可以對骨細(xì)胞生成產(chǎn)生抑制作用的細(xì)胞因子，并在動脈鈣化中產(chǎn)生了決定性的作用。蘇春賀等[5]選取了53例MHD患者作為研究對象，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者的RAC發(fā)生率為18.87%，而出現(xiàn)RAC患者的OPG和OPN水平均表現(xiàn)為異常增高。BMP-2是轉(zhuǎn)化生長因子-β細(xì)胞因子超家族當(dāng)中的一員，其在血管發(fā)育以及血管的病理和生理過程中發(fā)揮出了至關(guān)重要的作用，而這也使其在血管鈣化中產(chǎn)生了一定的誘導(dǎo)作用[6]。然而，目前臨床中針對MHD患者RAC與OPN、OPG和BMP-2相關(guān)性的研究卻相對較少，阻礙了其在臨床中的廣泛應(yīng)用。

本研究發(fā)現(xiàn)，70例患者中，有32例患者出現(xiàn)了RAC，發(fā)生率高達(dá)45.71%，這與江珊等[6]研究學(xué)者的研究結(jié)果不一致，可能是因?yàn)楸狙芯克x取的樣本數(shù)量較少。從兩組患者的OPN、OPG和BMP-2的檢測結(jié)果來看，鈣化組的OPN、OPG和BMP-2陽性率均明顯高于非鈣化組(P<0.01)，說明OPN、OPG和BMP-2的異常陽性表達(dá)可以有效體現(xiàn)出MHD患者的橈動脈鈣化情況，從而實(shí)現(xiàn)對RAC的早期診斷，為疾病的預(yù)防以及患者預(yù)后的改善產(chǎn)生了積極的影響。同時，本研究發(fā)現(xiàn)MHD患者的橈動脈鈣化程度與OPN、OPG和BMP-2均呈正相關(guān)(r=0.586，0.621，0.653，P<0.05)，即MHD患者的橈動脈鈣化程度越高，患者的OPN、OPG和BMP-2陽性率越高。

綜上所述，MHD患者的RAC與OPN、OPG以及BMP-2之間存在較高的關(guān)聯(lián)性，OPN、OPG和BMP-2異常陽性表達(dá)有助于MHD患者的RAC早期診斷和預(yù)測，但目前病例數(shù)較少，仍需通過后續(xù)的病例積累進(jìn)一步證實(shí)，若能肯定其關(guān)聯(lián)性，則可廣泛應(yīng)用和推廣。

1 周銳，許建中，周華東.雌激素、維生素D和骨形態(tài)發(fā)生蛋白質(zhì)與骨質(zhì)疏松癥及心腦動脈鈣化的發(fā)生機(jī)制.中華解剖與臨床雜志，2017，22(1):83～86.

2 李欣遙，張良榮，馮娟.血清骨橋蛋白與頸動脈斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系.中華老年心腦血管病雜志，2016，18(3):287～290.

3 吳艷，黃蘭.骨形態(tài)發(fā)生蛋白9體外誘導(dǎo)牙囊細(xì)胞的成骨分化.中國組織工程研究，2015，19(14):2255～2260.

4 劉艷賓，金衛(wèi)東，秦潔潔，等.血漿骨橋蛋白水平與冠狀動脈病變相關(guān)性研究.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016，10(13):35～36.

5 涂曦文，彭佑銘，唐東興，等.維持性血液透析患者血管鈣化及相關(guān)因素分析.中國動脈硬化雜志，2015，23(6):613～616.

6 江珊，于洪偉，王偉.血清骨橋蛋白對冠狀動脈支架植入術(shù)后再狹窄的預(yù)測價值.中國動脈硬化雜志，2015，23(9):911～914.

收稿日期：2017-07-13

作者簡介：謝日倫(1974-)，男，漢族，廣東江門人，大專，骨傷科主治醫(yī)師。研究方向：臨床骨科。