張津 薛園園 鄒立娜 劉文猜 王延紅

1 山東省眼科醫(yī)院 （山東 濟(jì)南 250021）2 山東省立醫(yī)院 （山東 濟(jì)南 250021）

壓力蒸汽滅菌中，生物監(jiān)測是必不可少的，根據(jù)WS310.3-2016的要求，應(yīng)至少每周監(jiān)測一次。生物監(jiān)測是使用活的微生物芽孢制成指示劑，根據(jù)微生物芽孢的死亡情況來判斷滅菌是否成功，考核滅菌器負(fù)荷是否達(dá)到無菌保障水平，是壓力蒸汽滅菌效果最準(zhǔn)確、最可靠的方法[1]。現(xiàn)在大多數(shù)醫(yī)院的生物監(jiān)測選擇自含式生物指示劑，快捷方便，合乎規(guī)范。然而個別醫(yī)院則是使用玻璃試管加膠塞作為生物監(jiān)測裝置?，F(xiàn)通過試驗，驗證玻璃試管加膠塞的裝置作為生物檢測裝置的可行性。

1.資料與方法

1.1 一般資料

滅菌器及生物指示劑：某廠家平移門型脈動真空滅菌器，程序參數(shù)設(shè)置如下，脈動3次，跨壓脈動1次，正壓脈動3次，滅菌溫度134?C，滅菌壓力210kPa，滅菌時間5min，干燥時間10min。

壓力蒸汽滅菌生物指示劑。

1.2 方法

1.2.1 保證滅菌器合格

對脈動真空滅菌器進(jìn)行保壓測試與BD測試合格后，使用TMI-ORION無線驗證儀對脈動真空滅菌器的滅菌過程中各項滅菌參數(shù)進(jìn)行驗證，使用符合WS310.3-2016要求的標(biāo)準(zhǔn)生物測試包進(jìn)行生物監(jiān)測合格。在以上各項檢驗都合格、保證滅菌器運行正常的前提下，進(jìn)行試驗。

1.2.2 分組試驗

一共設(shè)置5組進(jìn)行試驗：①第1組按照WS310.3-2016要求制作標(biāo)準(zhǔn)生物測試包進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的生物監(jiān)測作為標(biāo)準(zhǔn)對照組。②第2組使用玻璃試管和透氣膠塞并塞得較松。③第3組使用玻璃試管和透氣膠塞并塞得較緊。④第4組使用玻璃試管和不透氣膠塞并塞得較松。⑤第5組使用玻璃試管和不透氣膠塞并塞得較緊。

滅菌后培養(yǎng)生物指示劑，觀察并記錄結(jié)果。試驗中均使用自含式生物指示劑作為滅菌是否合格的對照。

1.3 觀察指標(biāo)

滅菌后化學(xué)指示卡顏色達(dá)到或深于對照色則經(jīng)過了合格滅菌過程。生物指示劑由培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)后變?yōu)辄S色的，是芽孢未殺滅、滅菌失敗，不變色的（紫色）為已經(jīng)殺滅、滅菌成功。

2.過程與結(jié)果

2.1 試驗準(zhǔn)備（保證滅菌器合格）

試驗準(zhǔn)備（保證滅菌器合格），滅菌器檢測見表1，BD圖見圖1。

表1.滅菌器檢測

圖1.BD圖

圖2.菌片培養(yǎng)結(jié)果

表2.試驗數(shù)據(jù)

2.2 透氣性及松緊度對比試驗

透氣性最好的標(biāo)準(zhǔn)測試包中的芽孢被滅殺的概率為100%。

使用透氣性較好的膠塞封口的玻璃試管中的芽孢和塞得較松的玻璃試管中芽孢被殺滅概率較大，而使用不透氣膠塞封口和塞得較緊的試管中芽孢被殺滅概率較小。部分培養(yǎng)結(jié)果如圖2所示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計見表2。

2.3 蒸汽穿透性驗證

第2組與第3組對比，第4組與第5組對比，結(jié)果為塞緊的比塞的較松的未滅殺率高；第2組與第4組對比，第3組與第5組對比，結(jié)果為使用不透氣膠塞的比使用透氣膠塞的未滅殺率高。

圖3.TMI-ORION無線驗證儀放置方式

由此可見，塞緊或者使用不透氣膠塞的玻璃試管中菌片未殺滅率較高，為了進(jìn)一步驗證蒸汽穿透效果，在滅菌過程中，使用TMI-ORION無線驗證儀對不透氣膠塞密封的玻璃試管中的物理參數(shù)進(jìn)行了驗證。試管內(nèi)溫度驗證方式及結(jié)果如圖3、圖4所示（黃綠色曲線為玻璃試管外部溫度變化曲線，深藍(lán)色粗線為玻璃試管內(nèi)溫度變化曲線）?？梢娫嚬軆?nèi)部在滅菌過程中溫度較低，達(dá)到134?C的時間非常短，僅幾秒鐘時間，遠(yuǎn)達(dá)不到程序設(shè)定的5min滅菌時間，與WS310.2-2016規(guī)定的134?C滅菌最短滅菌時間4min都相差甚遠(yuǎn)。

圖4.試管中溫度曲線（深藍(lán)粗線）

表3.生物指示劑中芽孢被殺滅情況

2.4 裝置改進(jìn)

由以上實驗數(shù)據(jù)分析，玻璃試管膠塞裝置生物監(jiān)測結(jié)果與膠塞類型和密封程度有很大關(guān)系?，F(xiàn)將膠塞換成醫(yī)院正常打包滅菌使用的無紡布，實現(xiàn)阻菌效果的同時也可以達(dá)到提高蒸汽穿透效果的目的。對比試驗結(jié)果如表3所示。

3.結(jié)論

玻璃試管膠塞裝置中，膠塞透氣性不可控，膠塞塞得松緊程度受人為因素影響較大也為不可控因素。使用玻璃試管膠塞裝置會影響蒸汽穿透效果，導(dǎo)致抗力過高，提高出現(xiàn)假陽性結(jié)果的概率，容易使監(jiān)測失敗。所以玻璃試管加膠塞型生物監(jiān)測裝置不能實際證明滅菌過程合格性。

使用無紡布封口的玻璃試管生物監(jiān)測裝置做的生物監(jiān)測可以較準(zhǔn)確反映滅菌的實際情況。所以，玻璃試管型生物監(jiān)測裝置可以使用無紡布進(jìn)行封口。但滅菌后需要在無菌條件下取出菌片，進(jìn)行培養(yǎng)[2]。這個過程需要嚴(yán)格無菌，而在實際操作中較易引入雜菌造成假陽性。

目前自含式生物指示劑已經(jīng)解決上述問題，自含式嗜熱脂肪桿菌芽孢生物指示劑的設(shè)置與結(jié)構(gòu)本身，能避免被污染，準(zhǔn)確，方便，是現(xiàn)有最好的生物監(jiān)測方法[3]。

[1]孫亞君.三種生物指示劑監(jiān)測壓力蒸汽滅菌效果的比較[J].中華醫(yī)院感染雜志,2012,22(17):3803-3804.

[2]WS310.3-2016醫(yī)院消毒供應(yīng)中心 第三部分:清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)[S].中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會,2016.

[3]胡秀鳳,張莉莉.生物指示劑出現(xiàn)假陽性的原因分析及防范[J].實用臨床醫(yī)藥雜志,2008,4(6):91.