張琦
摘 要:建立了高效液相色譜法測定奧氮平中有關物質,使用C8色譜柱梯度洗脫;檢測波長為220nm,結果顯示奧氮平精密度良好,專屬性良好,與有關物質分離完全,奧氮平及各雜質在范圍內線性良好,回歸線的相關系數R均大于0.9990,但奧氮平溶液在室溫下放置有不穩(wěn)定現象,需立即進樣。結論:該方法重復性好,結果準確,能更好地控制奧氮平中有關物質的含量。
關鍵詞:奧氮平 有關物質 高效液相色譜儀
中圖分類號:TQ460 文獻標識碼:A 文章編號:1672-3791(2018)01(c)-0080-02
奧氮平化學名為2-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基-)-10H-噻吩并[2,3-b][1,5]苯并二氮雜卓,是一種新型非典型抗精神病藥,可有效改善精神分裂癥狀,安全性高,耐受性好,EPS發(fā)生率低[1-3],已廣泛用于治療多種精神疾病。美國藥典35版增補1[4]中收錄了“奧氮平”質量標準,其有關物質檢查項下考察了奧氮平雜質A及奧氮平雜質B兩個已知雜質(結構見圖1),但考慮企業(yè)在奧氮平片合成的實際工藝過程中[5],可能同時引入起始物:4-氨基-2-甲基-10H-噻吩并[2,3-b][1,5]苯并二氮雜鹽酸鹽。筆者擬采用美國藥典方法對三種已知雜質進行控制,建立HPLC梯度洗脫方法,測定奧氮平片中有關物質。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
島津LC-20AT高效液相色譜儀,LC-Solution色譜工作站。
1.2 試樣
奧氮平對照品(100948-200801,中國藥品生物制品檢定所);奧氮平(110302,江蘇某某制藥);奧氮平起始物(20110102,臺州市某某化工);雜質A(20110201,臺州市某某化工);雜質B:110315,自制;乙腈,色譜純,購自×××COMPANY INC,雙蒸水,自制,其他試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
采用C8色譜柱;以緩沖液(稱取十二烷基硫酸鈉13g至1500mL水中使溶解,加磷酸5mL,用5mol/L氫氧化鈉溶液調pH至2.5)-乙腈(52∶48)為流動相A,以緩沖液-乙腈(30∶70)為流動相B,按表1程序進行梯度洗脫;檢測波長為220nm;柱溫:35℃,流速為每分鐘1.5mL。
2.2 溶液的制備
溶劑∶乙二胺四乙酸二鈉緩沖液(稱取乙二胺四乙酸二鈉55mg溶解于1500mL緩沖液中)-乙腈(60∶40)。
供試品:取本品適量,精密稱定,加溶劑稀釋制成每1mL約含400μg的溶液。
對照品溶液:取奧氮平對照品適量,加溶劑稀釋制成每1mL約含2μg的溶液。
2.3 系統(tǒng)適用性
取奧氮平、雜質A、雜質B及起始物各適量,以溶劑溶解并稀釋制成每1mL中含奧氮平20μg,雜質A、雜質B及起始物各2μg的溶液,作為系統(tǒng)適用性溶液。精密量取系統(tǒng)適用性溶液20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結果見圖2。
此方法下系統(tǒng)適用性溶液中奧氮平及各雜質分離良好,各雜質峰峰面積的相對標準差均小于2.0%,保留時間的相對標準差均小于1.0%;理論塔板數按奧氮平峰計算均大于3000,各雜質峰的拖尾因子均小于1.5,奧氮平與雜質A的分離度均大于3.0;該色譜系統(tǒng)適用性良好。
2.4 專屬性
取奧氮平樣品100mg,置25mL量瓶中,加溶劑定容至刻度,搖勻作為專屬性實驗儲備液。未破壞樣品:取奧氮平儲備液1mL置10mL容量瓶中加溶劑稀釋定容;光照樣品:取儲備液1ml于10mL容量瓶中,加溶劑定容至刻度于光照強度為4500Lx±500Lx條件下放置10d后,加溶劑定容至刻度;高溫樣品:取儲備液1mL置于10mL量瓶中,于60℃高溫條件下放置于10d后,加溶劑定容至刻度;酸破壞樣品:取儲備液1mL置于10mL量瓶中,加1mol/L鹽酸溶液1mL,搖勻,于80℃水浴中放置3h后,加1mol/L氫氧化鈉溶液調pH至中性,加溶劑定容至刻度;堿破壞樣品:取儲備液1mL置10mL量瓶中,加1moL/L氫氧化鈉溶液1mL,搖勻,于80℃水浴中放置4h后,加1mol/L鹽酸溶液調pH至中性,加溶劑定容至刻度;氧化破壞樣品:取儲備液1mL,置10mL量瓶中,加10%過氧化氫溶液1mL,搖勻,室溫放置2h后,加溶劑定容至刻度。精密量取上述溶液各20μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。破壞試驗結果顯示,在光照、高溫、堿性條件下,樣品穩(wěn)定;在酸性、氧化條件下,主峰破壞較嚴重,但破壞產生的雜質與奧氮平及雜質A、雜質B能夠完全分離;此方法專屬性良好。
2.5 線性
精密稱取奧氮平,起始物,雜質A和雜質B適量,配置成奧氮平濃度為3.0μg/mL起始物及雜質A濃度為3.0μg/mL,雜質B濃度為3.0μg/mL的儲備液,逐級稀釋精密量取上述溶液各20μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以濃度為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y),進行線性回歸分析(結果見表2)。
2.6 溶液穩(wěn)定性實驗
將供試品溶液在進樣盤室溫條件下放置,分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h精密量供試品溶液20μL注入液相色譜儀,10h奧氮平、起始物、雜質A峰面積百分比的RSD值為均小于2.0%;雜質B峰面積百分比略有增長,但RSD值小于10.0%;一未知雜質隨放置時間增長,有明顯增長的趨勢,說明溶液在室溫下放置10h內不穩(wěn)定,需現配現用。
2.7 精密度實驗
取奧氮平對照品和供試品溶液20uL,注入液相色譜儀中,并同法配制5份測得4種混合物溶液的主峰及雜質峰峰面積的RSD均在0.79~0.99之間,滿足系統(tǒng)適用性要求,表明該方法的精密度良好。
2.8 樣品測定
取三批奧氮平20mg,精密稱定,置50mL容量瓶中加溶劑稀釋制成每1mL約含400μg的溶液,作為供試品溶液;另取奧氮平對照品適量,加溶劑稀釋制成每1mL約含2μg的溶液,作為對照品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,計算各雜質的量及雜質總和(結果見表3)。試驗結果表明:三批奧氮平有關物質結果均小于1.0%
參考文獻
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[3] 陳光.奧氮平治療老年精神分裂癥80例臨床分析[J].臨床心身疾病雜志,2008,14(6):519-521.
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