江 茜 王 英 黃 誠(chéng)

(1贛南醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院，贛州341000；2贛南醫(yī)學(xué)院，贛州341000；3贛南醫(yī)學(xué)院生理教研室，贛州341000)

神經(jīng)病理性疼痛 (neuropathic pain,NP) 是由外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病、損傷及功能障礙所導(dǎo)致的疼痛[1]。其臨床表現(xiàn)特點(diǎn)為痛覺(jué)過(guò)敏、痛覺(jué)超敏和炎癥區(qū)域持續(xù)性的自發(fā)痛[2]。它是臨床上的常見(jiàn)病和慢性病，在人群中患病率約為6.9%～10%[3]。神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制至今未完全明了，目前仍無(wú)有效的治療手段。臨床上多數(shù)NP病人未能有效緩解疼痛，這給病人及其家庭帶來(lái)了沉重的心理、生理及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[4]。有證據(jù)表明促炎細(xì)胞因子如interleukin-6 (IL-6)、interleukin-1β (IL-1β) 和 tumor necrosis factor-α (TNF-α)等在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，最終引起中樞敏化，形成持續(xù)性疼痛[5,6]。此外，在促炎因子 (TNF-α、IL-1β、IL-6等)、細(xì)菌和病毒等刺激下，NF-κB被激活，活化的 NF-κB 可調(diào)控 IL-1β、IL-6和 TNF-α等基因的表達(dá)[7,8]，兩者構(gòu)成一種反饋機(jī)制共同促進(jìn)神經(jīng)病理性疼痛的維持與發(fā)展。

臭牡丹 (clerodendron bungei steud,CBS) 是傳統(tǒng)中草藥，屬馬鞭草植物，具有活血散瘀，消腫解毒等功用[9]。研究表明臭牡丹根提取液具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用[10]；但它的作用機(jī)制仍不甚清楚，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)探討臭牡丹治療NP機(jī)制的研究報(bào)道。我們的前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，劑量為30 g/kg的臭牡丹緩解神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠所致的機(jī)械痛敏效果最明顯[11]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和我們的前期結(jié)果，推測(cè)臭牡丹可能是通過(guò)抑制致炎細(xì)胞因子激活的NF-κB信號(hào)途徑來(lái)發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。因此，本實(shí)驗(yàn)擬從細(xì)胞因子及NF-κB信號(hào)通路入手，采用SNI大鼠模型，選擇30 g/kg的CBS濃度持續(xù)灌胃治療28天，應(yīng)用Von-Frey設(shè)備測(cè)定大鼠機(jī)械縮足反射閾值，觀察CBS能否緩解SNI大鼠的機(jī)械痛敏；通過(guò)qPCR和Western blot等實(shí)驗(yàn)探討臭牡丹干預(yù)神經(jīng)病理性疼痛的作用機(jī)制。

方 法

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性成年SD大鼠，體重180～220 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[動(dòng)物中心許可證號(hào)：SCXK （湘） 2013-0004]。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境為每天12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗，50%～55%濕度，23 ± 1℃。實(shí)驗(yàn)期間所有大鼠均自由攝食飲水。大鼠實(shí)驗(yàn)和飼養(yǎng)符合相關(guān)規(guī)定。

2.藥材提取

參考王春娟等[12]的方法提取藥材。800 g臭牡丹根（購(gòu)自亳州市安東藥業(yè)有限責(zé)任公司）剪碎，加3 200 ml 80%乙醇（藥材和水1:4比例），用恒溫電熱套100℃煮沸后調(diào)低溫度至60℃ 煮30分鐘，倒出藥液并用四層紗布過(guò)濾；臭牡丹根殘?jiān)凑盏谝槐樘崛》椒ㄔ俜謩e提取2次；合并三次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮并蒸發(fā)濾液中的乙醇至無(wú)醇味，加適量生理鹽水配置成6 g/ml (即30 g/kg) 濃度。藥液提取成功后分裝置于冰箱-20℃保存。

3.實(shí)驗(yàn)試劑

NF-κB p65亞基多克隆抗體（貨號(hào)：4767S）、組蛋白H 3 (D1H2) 抗體（貨號(hào)：4499S）購(gòu)自美國(guó)CST公司，TNF-α多克隆抗體 (貨號(hào)：ab6671）、IL- 1β多克隆抗體（貨號(hào)：ab9722）和β-actin抗體（貨號(hào)ab49900）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，IL-6多克隆抗體（貨號(hào)：SC-7884）購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，HRP標(biāo)記兔二抗（貨號(hào)：7074）購(gòu)自美國(guó)CST公司，亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組抽提試劑盒（貨號(hào)：539790）和PVDF膜購(gòu)自美國(guó)Millipore公司，青霉素（貨號(hào)：16051411）購(gòu)自江西東風(fēng)藥業(yè)股份有限公司，A SYBR? Select Master Mix（貨號(hào)：4472908）購(gòu)自美國(guó)Life technologies公司。

4.實(shí)驗(yàn)儀器

2390型Electronic Von Fery觸覺(jué)測(cè)痛儀（TC美國(guó)），Western Blot（電泳、電轉(zhuǎn)移）系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad），Lightcycler 480IIReal-Time PCR儀（德國(guó)Roche），MK3型酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo），ZNHW-Ⅱ型恒溫電熱套 （上?？旗Z儀器有限公司），SB-1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海愛(ài)郎儀器有限公司）。

5.神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型制備

參照Decosterd和Woolf等[13]方法制備SNI模型。1%戊巴比妥鈉 (按0.5 ml/100 g注射)腹腔麻醉后，左大腿側(cè)邊剪毛，酒精棉球消毒皮膚，劃開(kāi)皮膚，鈍性分離股二頭肌，暴露出坐骨神經(jīng)分支：腓腸神經(jīng)，腓總神經(jīng)和脛神經(jīng)，用5.0絲線把脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)緊緊結(jié)扎(結(jié)扎松緊以結(jié)扎的大鼠左后肢微微抽搐為宜)，在脊髓遠(yuǎn)側(cè)端剪斷，保留大約2～4 mm的遠(yuǎn)側(cè)殘端，注意術(shù)中保持腓腸神經(jīng)完整，傷口局部撒射青霉素粉末預(yù)防感染，肌肉和皮膚分兩層縫合。

假手術(shù)組（Sham組）只暴露坐骨神經(jīng)，不進(jìn)行結(jié)扎剪斷處理，其他手術(shù)操作同前；正常對(duì)照組（Ctrl組）不接受手術(shù)。

6.實(shí)驗(yàn)分組及給藥

將符合實(shí)驗(yàn)要求的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為四組 (n = 8)：① Ctrl組；② Sham組；③ SNI組；④ SNI+CBS組。從術(shù)后第7天開(kāi)始，SNI + CBS治療組大鼠灌胃給予30 g/kg 的CBS，連續(xù)灌胃28天，Ctrl組、Sham組和SNI組大鼠則均給予同體積生理鹽水。于術(shù)前1 天和術(shù)后第7、14、21、28和35天分別測(cè)定其行為學(xué)變化。并于灌胃28天后，處死大鼠，立即取材。

7.機(jī)械縮足反射閾值(機(jī)械痛敏)測(cè)量

在安靜環(huán)境下，將實(shí)驗(yàn)大鼠放置于透明的有機(jī)玻璃箱中（底為1 cm×1 cm的鐵絲網(wǎng)），使大鼠適應(yīng)15 min。待其安靜后，采用測(cè)痛儀由下往上垂直刺激大鼠足底正中皮膚（SNI大鼠術(shù)后則刺激大鼠足底外側(cè)皮膚），逐漸加大刺激強(qiáng)度，大鼠出現(xiàn)縮足反應(yīng)（如舔足、抬腿等）時(shí)屏幕上自動(dòng)顯示探針?biāo)毫Υ笮　Ｔ搲毫χ导礊闄C(jī)械縮足反射閾值 (paw withdrawal threshold,PWT)。最大刺激強(qiáng)度不超過(guò)90 g，每只大鼠重復(fù)5次，每次間隔5 min，取平均值。實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求溫度22±1℃，濕度55%～65%。

8.蛋白提取及Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)

30 g/kg CBS灌胃給藥4周后處死大鼠，快速取手術(shù)側(cè)L4、L5DRG和脊髓腰膨大部分。按照亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組抽提試劑盒說(shuō)明書(shū)提取蛋白：將樣本組織 (50 mg) 剪切成小塊，加入預(yù)冷的1 ml BufferⅠ后勻漿，4℃旋轉(zhuǎn)混合10 min后4℃離心，1 000 ×g，10 min，小心吸取上清液，此為細(xì)胞質(zhì)蛋白；加入預(yù)冷的1 ml BufferⅡ，最大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩10 s后，4℃旋轉(zhuǎn)混合30 min，4℃離心，6 000×g，10 min，小心吸取上清液，此為細(xì)胞膜蛋白；加入預(yù)冷的500 μl Buffer Ⅲ，最大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩10 s后，4℃旋轉(zhuǎn)混合10 min，4℃離心，7 000 × g，10 min，小心吸取上清液，即得到核蛋白。提取蛋白后，應(yīng)用BCA方法測(cè)量總蛋白濃度。將分裝的蛋白樣本 (50 μg) 進(jìn)行SDS-PAGE (10%、12%) 電泳，電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉約1 h，按1:200比例稀釋一抗孵育過(guò)夜；1:1 000比例稀釋用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，室溫孵育2 h。最后，使用化學(xué)成像發(fā)光成像系統(tǒng)照相，通過(guò)Image tool圖像分析軟件讀取目的以及內(nèi)參條帶在PVDF膜上測(cè)得的光密度值，計(jì)算出目的蛋白量。

9.qPCR檢測(cè)mRNA表達(dá)

各引物序列由上海生工生物工程公司合成。采用A SYBR? Select Master Mix試劑盒提取總RNA并配制20 μl逆轉(zhuǎn)錄體系合成cDNA。反轉(zhuǎn)錄條件：65 ℃ 5 min，37 ℃ 2 min，37℃ 10 min×5 個(gè)循環(huán)，70 ℃ 15 min。采用qPCR法進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR反應(yīng)體系 20 μl：雙蒸水 (ddH2O)7 μl，上、下游引物各1 μl，cDNA 1 μl，SYBR? Select Master Mix 10 μl。反應(yīng)條件：變形95℃ 10 min；95℃ 10 s，退火61℃20 s，延伸72℃ 25 s，40個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)后，采用以下的程序進(jìn)行熔解曲線分析：72 ℃～95 ℃，0.5 ℃，10 s/each。每組重復(fù)檢測(cè)3次。采用2-ΔΔCt法分析NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平。引物序列如下：

基因Gene引物Primer sequence 5' to 3'TNF-α Forward CCACCACGCTCTTCTGTCTACTG Reverse GGGCTACGGGCTTGTCACTC IL-1β Forward CACCTCAATGGACAGAACATAAGC Reverse TCTTCTTTGGGTATTGTTTGGGA IL-6 Forward AAGACAAAGCCAGAGTCATTCAGAG Reverse GTTGGATGGTCTTGGTCCTTAGC NF-κB p65 Forward CTGTGCGAGTGTCCATGCAG Reverse TTCTTCATGATGCTCTTGAAGGTC Actin Forward CCAACCGTGAAAAGATGACC Reverse ACCAGAGGCATACAGGGACA

10.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS 17.0、GraphPad Prism 5.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理并統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±SD)表示，qPCR和Western blot的結(jié)果采用one-way ANOVA檢驗(yàn)，機(jī)械縮足反射閾值 (PWT)的結(jié)果采用two-way ANOVA和Bonferroni' s post hoc 檢驗(yàn)。P＜ 0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.CBS對(duì)SNI模型大鼠PWT的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ctrl組、Sham組、SNI組和SNI + CBS組在造模前的PWT差異無(wú)顯著性。與Sham組相比，SNI組在造模后第7天出現(xiàn)PWT下降 (P＜ 0.001)，提示造模成功，且在造模后的第14、21、28和35天內(nèi)均持續(xù)低于Sham組 (P＜ 0.001)。與SNI組相比，給予劑量為30 g/kg CBS干預(yù)后的第 14、21和28天，PWT顯著上升 (P＜ 0.05，見(jiàn)圖1)。

2.CBS對(duì)SNI模型大鼠脊髓和DRG的NF-κB mRNA表達(dá)的影響

在CBS (30 g/kg) 灌胃治療28天后，與Sham組比較，SNI組大鼠脊髓和DRG中NF-κB p65 mRNA表達(dá)明顯增加(P＜ 0.05)；與SNI組比較，SNI +CBS組大鼠脊髓和DRG中NF-κB p65 mRNA表達(dá)明顯減少 (P＜ 0.05，見(jiàn)圖 2)。

3.CBS對(duì)SNI模型大鼠脊髓及DRG的IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表達(dá)的影響

在CBS (30 g/kg)灌胃治療28天后，與Sham組相比，SNI組大鼠脊髓和DRG中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表達(dá)均明顯增加 (P＜ 0.05,P＜ 0.01)；與SNI組相比，SNI + CBS組脊髓及DRG的IL-1β、IL-6和TNF-α的 mRNA表達(dá)顯著降低 (P＜ 0.05,P＜ 0.01，見(jiàn)圖 3)。

4.CBS對(duì)SNI模型大鼠脊髓和DRG核內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)的影響

在CBS (30 g/kg) 灌胃治療28天后，與Sham組比較，SNI組大鼠脊髓及DRG中NF-κB蛋白表達(dá)明顯增加 (P＜ 0.05)；與SNI組相比，SNI + CBS組脊髓及背根神經(jīng)節(jié)的NF-κB蛋白表達(dá)均顯著下降(P＜ 0.05,P＜ 0.01，見(jiàn)圖 4)。

5.CBS對(duì)SNI模型大鼠脊髓及DRG的IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)的影響

CBS (30 g/kg)灌胃治療28天后，與Sham組相比，SNI組大鼠脊髓和DRG中IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)均明顯增加 (P＜ 0.05,P＜ 0.01)；與 SNI組相比，SNI + CBS組脊髓及DRG的IL-1β、IL-6和 TNF-α蛋白表達(dá)顯著降低 (P＜ 0.05,P＜ 0.01，見(jiàn)圖 5)。

討 論

神經(jīng)病理性疼痛是臨床常見(jiàn)病，其病因多樣，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床治療并無(wú)有效根治方法。進(jìn)一步闡明神經(jīng)病理性疼痛的致痛信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，并以此研發(fā)新型有效治療藥物已成為目前國(guó)內(nèi)外疼痛醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)及臨床研究亟待解決的難題。

臭牡丹是一種傳統(tǒng)中草藥，具有祛風(fēng)解毒，消腫止痛的功效。已有實(shí)驗(yàn)顯示臭牡丹根提取液具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用，且該作用不能被納絡(luò)酮所阻斷，提示臭牡丹是通過(guò)非阿片受體來(lái)發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)的[10]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)臭牡丹正丁醇提取物可顯著抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的急性和繼發(fā)性足腫脹[14]，且明顯抑制NP大鼠IL-1β、TNF-α的表達(dá)[11]。因此，我們?cè)赟NI所致的神經(jīng)病理性疼痛模型上探討臭牡丹對(duì)其痛敏行為的影響及可能的作用機(jī)制。

SNI模型是外周神經(jīng)損傷所誘導(dǎo)神經(jīng)病理性疼痛的經(jīng)典模型之一，該模型因可高度反映臨床疼痛綜合征的一些特點(diǎn)而得到廣泛運(yùn)用[13]。我們實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SNI術(shù)后動(dòng)物均存在術(shù)側(cè)后肢明顯的痛覺(jué)超敏，表現(xiàn)為對(duì)機(jī)械刺激的異常敏感。給予30 g/kg CBS持續(xù)灌胃28 天后PWT顯著上升，提示CBS可緩解SNI所致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠機(jī)械痛敏。

圖1 CBS對(duì)SNI模型大鼠機(jī)械縮足反射閾值 (PWT) 的影響(±SD)與Sham組比較,***P ＜ 0.001；與SNI組比較,#P ＜ 0.05Fig.1 Effects of CBS on mechanical paw withdrawal threshold (PWT) in rats with spared nerve injury (SNI)(±SD)***P ＜ 0.001,compared to Sham group,#P ＜ 0.05,compared to SNI group.

圖2 CBS對(duì)SNI大鼠脊髓及DRG中NF-κB mRNA表達(dá)的影響 (n = 5,±SD)與Sham組比較,*P ＜ 0.05；與SNI組比較,#P ＜ 0.05Fig.2 qPCR analysis of NF-κB mRNA expression in the L4-L6 spinal cord and DRG (n = 5,±SD)*P ＜ 0.05,compared to Sham group,#P ＜ 0.05,compared to SNI group.

圖3 CBS對(duì)SNI大鼠脊髓及DRG中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表達(dá)的影響 (n = 5,±SD)與 Sham 組比較 ,*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；與 SNI組比較 ,#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01Fig.3 qPCR analysis of IL-1β,IL-6 and TNF-α mRNA expression in the L4-L6 spinal cord and DRG (n = 5,±SD)*P ＜ 0.05,**P ＜ 0.01,compared to Sham group,#P ＜ 0.05,##P ＜ 0.01,compared to SNI group.

圖4 CBS對(duì)SNI大鼠脊髓及DRG中核內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)的影響(n = 8,±SD)與 Sham 組比較 ,*P ＜ 0.05；與 SNI組比較 ,#P ＜ 0.05,##P ＜ 0.01Fig.4 Western blot analysis of NF-κB protein expression in the L4-L6 spinal cord and DRG (n = 8,±SD)*P ＜ 0.05,compared to Sham group,#P ＜ 0.05,##P ＜ 0.01,compared to SNI group.

圖5 CBS對(duì)SNI大鼠脊髓及DRG中核內(nèi)IL-1β,IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)的影響 (n = 8,±SD)與 Sham 組比較 ,*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；與 SNI組比較 ,#P ＜ 0.05,##P ＜ 0.01Fig.5 Western blot analysis of IL-1β、IL-6 and TNF-αprotein expression in the L4-L6 spinal cord and DRG (n = 8,±SD)*P ＜ 0.05,**P ＜ 0.01,compared to Sham group,#P ＜ 0.05,##P ＜ 0.01,compared to SNI group.

神經(jīng)病理性疼痛的形成和發(fā)展是多個(gè)因素相互級(jí)聯(lián)的復(fù)雜過(guò)程。多重證據(jù)表明促炎細(xì)胞因子參與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生與維持過(guò)程，其中IL-1β、IL-6、TNF-α與疼痛關(guān)系尤為密切[5]。研究表明，在傷害性刺激作用下，組織受損傷后神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活后釋放相應(yīng)促炎細(xì)胞因如IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)顯著升高[15～17]，在實(shí)驗(yàn)研究中我們觀察到SNI大鼠脊髓和DRG中 IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表達(dá)水平均明顯升高；而給予30 g/kg CBS持續(xù)28天灌胃后可顯著降低IL-1β、IL-6 和TNF-α的mRNA及蛋白的表達(dá)，這與Wang X、Gopalsamy等學(xué)者的研究結(jié)果具有一致性[15～17]。以上我們的研究結(jié)果提示CBS可能通過(guò)下調(diào)IL-1β、IL-6以及TNF-α的基因和蛋白表達(dá)來(lái)抑制外周和中樞炎癥反應(yīng)，減輕中樞敏化，從而緩解NP的痛敏行為。

此外，在促炎細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6等)、細(xì)菌和病毒等刺激下，NF-κB被激活，活化的NF-κB又可調(diào)控IL-1β、IL-6和TNF-α等基因的表達(dá)[7,8]，兩者構(gòu)成一種反饋機(jī)制共同促進(jìn)神經(jīng)病理性疼痛的維持與發(fā)展[18,19]。為觀察CBS對(duì)SNI誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛大鼠NF-κB的變化影響，我們采用qPCR和Western Blot方法檢測(cè)大鼠脊髓和DRG NF-κB的mRNA及細(xì)胞核內(nèi)蛋白表達(dá)變化情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明經(jīng)大鼠術(shù)側(cè)坐骨神經(jīng)分支部分結(jié)扎剪斷后，脊髓和DRG NF-κB的mRNA及蛋白表達(dá)均顯著增加，而CBS灌胃給藥28天后，NF-κB的mRNA及蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，為此，我們認(rèn)為CBS可能是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮對(duì)NP的鎮(zhèn)痛作用。緣由神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制是多因素、多條信號(hào)通路相互級(jí)聯(lián)的復(fù)雜過(guò)程，要完全明確CBS對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的鎮(zhèn)痛機(jī)制，仍需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究加以證實(shí)。

綜上所述，基于文獻(xiàn)報(bào)道和我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示CBS作用于神經(jīng)病理性疼痛的可能機(jī)制是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)途徑，進(jìn)而抑制NF-κB信號(hào)分子所誘導(dǎo)的炎癥介質(zhì)致炎細(xì)胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)的mRNA和蛋白表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

參 考 文 獻(xiàn)

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