王紅瑋，于文熙，于永峰，于海平，林思敏

（深圳博美醫(yī)療美容門(mén)診部，廣東 深圳，518013）

隨著生活水平的提高，面部年輕化已受到廣大愛(ài)美人士的最愛(ài)，素顏呈現(xiàn)的自然美，當(dāng)初大家都在打肉毒素來(lái)去除額頭皺紋、魚(yú)尾紋，但是注射后，會(huì)出現(xiàn)短時(shí)間的表情不自然。如今富血小板血漿容已得到歐洲CE認(rèn)證、ISO、SQS及其他地區(qū)的廣泛醫(yī)學(xué)臨床驗(yàn)證，僅需一次治療就可對(duì)整個(gè)皮膚結(jié)構(gòu)進(jìn)行全面修復(fù)和重新組合，全面提升肌膚狀態(tài)，延緩衰老，加上其操作步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，因此PRP 美容技術(shù)將逐步代替其他美容除皺技術(shù)作為新一代美容方式。

我院從2016年4月至2018年2月，治療患者62例，采取血小板激活后，富血小板血漿注射對(duì)美膚除皺的效果很好，其中38例為面部年輕化，美膚除皺，效果滿意。25例加在自體脂肪移植中，可以促進(jìn)自體脂肪細(xì)胞的成活，也獲得了滿意的效果，總結(jié)如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

已經(jīng)檢測(cè)比較血小板激活前后自體血漿不同成分的含量：血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF-AB)、表皮生長(zhǎng)因子（EGF)、類胰島素生長(zhǎng)因子（IGF)及膠原的產(chǎn)量等[1]。（圖1）血小板激活自體血漿準(zhǔn)備流程；（圖2）血小板激活自體血漿成分的含量變化；（圖3）前期血小板激活自體血漿注射前后皮膚變化個(gè)案

本組62例患者來(lái)自我院美容外科，均為女性，年齡35-56歲。其中38例為面部年輕化，美膚除皺。25例加在自體脂肪移植中，使脂肪細(xì)胞成活率大大增加[2]。

1.2 方法

1.2.1 術(shù)前準(zhǔn)備 詢問(wèn)病史 行血常規(guī)、凝血四項(xiàng)、血糖、術(shù)前傳染病五項(xiàng)等檢查，與患者溝通與簽字拍照。1.2.2說(shuō)明本項(xiàng)目擬采取的方法、技術(shù)路線以及工藝流程：

（1）抽取靜脈血5-10ml注入無(wú)菌真空抗凝管內(nèi)(2管),輕輕倒轉(zhuǎn)試管混合4－5次。如不馬上處理,放置于4度冰箱, 不超過(guò)30小時(shí)。

（2）離心抗凝管內(nèi)的血液7分鐘，3000g。

（3）離心后血液分成以下4層[3]：頂層為PPP（少含血小板）;；2層為PRP（濃縮血小板）；3層為MNC；底層為RBC (如圖)，有些樣本不明顯分層，則取上1/3層為PPP；中1/3層為PRP（濃縮血小板）；下1/3層為MNC。

（4）用無(wú)菌注射器把2層的PRP抽吸出來(lái),各轉(zhuǎn)到5ml小管內(nèi)(2管)。

（5）把5ml小管放置于-20度冰箱內(nèi)30分鐘(或者干冰上5min)后,取出放在室溫融化。加入血小板活化劑pre-mixed solution：用0.5ml /1ml無(wú)菌注射器抽吸出血小板活化劑；每0.1ml的血小板活化劑加入到1mlPRP；輕輕倒轉(zhuǎn)試管混合3-4次,室溫靜置15分鐘[4]。

（6）離心5ml小管200g,3分鐘；無(wú)菌注射器抽吸出的較粘稠液體，此為活化血小板(A-PRP)，底部如有沉淀物，丟棄不用；如不馬上應(yīng)用;可-20度凍存活化血小板(A-PRP)備用。

圖1 血小板激活自體血漿準(zhǔn)備流程

圖2 血小板激活自體血漿成分的含量變化

1.2.3 （A-PRP）注射方法 本組病例22人通過(guò)水光槍將A-PRP 皮下注射；16人通過(guò)1ml注射器31G針頭將A-PRP皮下注射、25人將A-PRP加入提純后的自體脂肪中并充分混勻[5]。

2 結(jié) 果

本組本組病例22人通過(guò)水光槍注射皮下3次注射后，19人效果滿意，3人效果不太明顯，16人通過(guò)1mm注射器31G針頭注射，13人效果比較滿意，3人治療后出現(xiàn)紅色丘疹，25人注入提純好的自體脂肪中，治療部分為額部、顳部、頰部，頦部。治療兩次后，自體脂肪成活率很高，面部的輪廓改善滿意。提供的成果形式為活化前后的PRP生物成品，并進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)。約20-30天后顧客的皺紋將逐漸消失，重拾彈性健康，皮膚平滑緊致的年輕狀態(tài)[6]

2.1 典型病例

2.1.1 患者，女45歲，眼尾皺紋明顯，按上法提取PRP注射，采用點(diǎn)狀注射，每側(cè)注射量為1ML,注射一個(gè)月后，效果滿意，見(jiàn)圖3。

圖3 典型案例1，左側(cè)為術(shù)前，右側(cè)為術(shù)后一個(gè)月

2.1.2 患者，女，47歲，由于遺傳及常期上夜班，休息不好的原因，上瞼脂肪缺失比較明顯，會(huì)顯得人比較衰老。查體：上瞼皮膚松馳、上瞼脂肪缺失、頦部輕度后傾。手術(shù)過(guò)程，在右側(cè)大腿外側(cè)，選擇腫脹液（0.9%生理鹽水500ML、利多卡因5ML、鹽酸腎上腺素0.5ML、碳酸氫鈉6.5ML）局部麻醉,抽取脂肪及腫脹液一起10ML，經(jīng)離心處理后，提取脂肪顆粒3ML，加入處理好的PRP2ML。進(jìn)入充分混合后，沿眉骨下緣緩緩注射，一只手注射，一只手找平整度，術(shù)后即時(shí)效果滿意，觀察術(shù)后三個(gè)月效果，患者自覺(jué)滿意，見(jiàn)圖4。

3 討 論

圖4 左側(cè)為手術(shù)前，中間為手術(shù)后即刻，右側(cè)為術(shù)后一個(gè)月

本研究主要觀察了血小板激活后富血小板血漿注射對(duì)美膚除皺的效果。富血小板血漿是通過(guò)密度梯度離心法從全血中分離出來(lái)的自體材料，含有大量血小板的無(wú)活性物質(zhì)，但是，當(dāng)活化因子活化血小板時(shí)，所述血小板會(huì)釋放生長(zhǎng)因子，促進(jìn)傷口的愈合[7]。本研究主要技術(shù)手段為抽取靜脈血注入無(wú)菌真空抗凝管內(nèi)進(jìn)行離心，并取第2層的富血小板血漿（platelet Rich plasma, PRP）作為研究對(duì)象。取一部分的PRP分別加入血小板活化劑，以探討血小板活化前后對(duì)皺紋的影響。技術(shù)指標(biāo)主要包括檢測(cè)活化前后血漿內(nèi)生長(zhǎng)因子的活性和注射后患者的皮膚狀況[8]。

富血小板血漿（PRP)是通過(guò)密度梯度離心法從全血中分離出來(lái)的自體材料（autologous material)特征，是相對(duì)于少量的血漿濃縮含有大量血小板的無(wú)活性物質(zhì)，并且含有高濃度的白細(xì)胞。通過(guò)血管中含有的物質(zhì)活化富血小板血漿（PRP)中的血小板，然后釋放生長(zhǎng)因子（growth factor)和各種活性物質(zhì)（active substance)。當(dāng)活化因子活化血小板時(shí)，所述血小板由于其α顆粒（alpha granules)的脫顆粒作用（degranulation)而釋放生長(zhǎng)因子（growth factor)[9]。所述因子在傷口愈合（wound healing)初期扮演著重要角色。在此，釋放的生長(zhǎng)因子（growth factor)包括血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF-AB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-bl(TGF-bl)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF)、表皮生長(zhǎng)因子（EGF)、類胰島素生長(zhǎng)因子（IGF)等。而且，在體外條件下，富血小板血漿（PRP)釋放細(xì)胞因子等，由此合成成纖維細(xì)胞的DNA[10]。這增加了膠原的產(chǎn)量，從而促使形成膠原結(jié)構(gòu)。我們通過(guò)比較添加血小板激活劑后富血小板血漿注射對(duì)除皺的效果。還有，把PRP加入自體脂肪移植手術(shù)中，增加自體脂肪細(xì)胞的成活率，也收到了滿意的效果。

重點(diǎn)解決的技術(shù)關(guān)鍵問(wèn)題為PRP的提取和活化，提取活化過(guò)程將在標(biāo)準(zhǔn)無(wú)菌百級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，由生物技術(shù)專業(yè)人員采用專有技術(shù)對(duì)PRP的提取和活化操作。技術(shù)指標(biāo)主要包括檢測(cè)活化前后血漿內(nèi)生長(zhǎng)因子的活性和注射后患者的皮膚狀況。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]袁霆, 張長(zhǎng)青, 李四波,等. 自體富血小板血漿與難愈合傷口的修復(fù)[J]. 中華整形外科雜志, 2006, 22(5)：391-393.

[2]黎洪棉, 柳大烈, 吳濤,等. 早期應(yīng)用富血小板血漿凝膠對(duì)自體脂肪組織移植存活率的影響[J]. 中國(guó)組織工程研究,2011, 15(31)：5751-5755.

[3]李秋濤. 自體高濃度血小板血漿(PRP)面頸部皮膚抗衰老臨床觀察[J]. 中華醫(yī)學(xué)實(shí)踐雜志, 2011.

[4]程飚, 劉宏偉, 唐建兵,等. 自體富血小板血漿促進(jìn)美容外科傷口愈合的臨床觀察[J]. 中國(guó)輸血雜志, 2011,24(4)：282-284.

[5]王悅, 朱喆, 成榮杰,等. 富血小板血漿對(duì)人真皮細(xì)胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表達(dá)的影響[J]. 實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2012, 28(1)：64-69.

[6]Man D, Plosker H, Winland-Brown J E. The use of autologous platelet-rich plasma (platelet gel)and autologous platelet-poor plasma (fibrin glue)in cosmetic surgery.[J]. Plastic & Reconstructive Surgery, 2001, 107(1)：239-0.

[7]Eppley B L, Woodell J E, Higgins J. Platelet quantification and growth factor analysis from platelet-rich plasma： implications for wound healing[J]. Plastic & Reconstructive Surgery, 2004,114(6)：1502-1508.

[8]Ehrenfest D, David M, Rasmusson, et al. Classification of platelet concentrates： from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin(L-PRF)[J]. Trends in Biotechnology, 2009, 27(3)：158-67.

[9]Eppley B L, Pietrzak W S, Blanton M. Platelet-rich plasma： a review of biology and applications in plastic surgery[J]. Plastic & Reconstructive Surgery,2006, 118(6)：147e.

[10]Kanno T, Takahashi T, Tsujisawa T, et al. Plateletrich plasma enhances human osteoblast-like cell proliferation and differentiation[J]. J Oral Maxillofac Surg, 2005, 63(3)：362-369.