李晶　林雄杰　吳舒婷　曾娟鴻　林占熺　魯國(guó)東

摘 要 為篩選有效防止菌草食用菌病原真菌的藥劑，本研究選用7種殺菌劑對(duì)菌草食用菌4種病原真菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定。采用菌落直徑法對(duì)4種病原真菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，并計(jì)算毒力回歸方程。7種供試殺菌劑對(duì)菌草食用菌4種病原真菌的作用效果中，百菌清對(duì)哈茨木霉的抑制作用最好，EC50值最小為0.291 4 mg/L；多菌靈對(duì)蠟孔菌和側(cè)耳木霉的抑制作用最好，EC50值最小分別為0.257 mg/L和1.030 4 mg/L；精甲霜·錳鋅對(duì)赭曲霉的抑制作用最好，EC50值最小為9.233 4 mg/L。百菌清、咪鮮胺、多菌靈和精甲霜·錳鋅對(duì)4種病原真菌均具有較好的抑制作用，建議生產(chǎn)上將這4種藥劑輪換使用，以有效控制菌草食用菌病害。

關(guān)鍵詞 菌草；食用菌；殺菌劑；室內(nèi)毒力測(cè)定

中圖分類號(hào) S435.673 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Abstract In this study， we described the indoor toxicity of seven fungicides to four fungal pathogens of JUNCAO mushroom diseases using the method of colony diameter. The results showed that the seven fungicides had different effects on the fungal pathogens. The chlorothalonil had the best inhibitory effect on Trichoderma harzianum， and the EC50 value was 0.291 4 mg/L. Carbendazim had the best inhibitory effect on Ceriporia lacerata and Trichoderma pleuroticola， and the minimum EC50 value was 0.257 mg/L and 1.030 4 mg/L， respectively. The manganese zinc had the best inhibition effect and the EC50 value was as 9.233 4 mg/L. Chlorothalonil， carbendazim， manganese zinc could effectively control the four diseases. We suggest that the four fungicides should be used alternately.

Keywords JUNCAO mushroom； edible fungi； fungicides； toxicity

DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.08.019

1983年，福建農(nóng)林大學(xué)林占熺團(tuán)隊(duì)開(kāi)展利用人工或野生草本植物代替闊葉樹(shù)栽培食用菌，并于1986年獲得成功，從而發(fā)明了菌草栽培食用菌技術(shù)。該技術(shù)經(jīng)過(guò)30多年的推廣應(yīng)用，到目前已篩選45種菌草栽培55種食用菌，緩解菌業(yè)發(fā)展中的“菌林矛盾”，解決了菌業(yè)生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展的問(wèn)題[1-2]。然而無(wú)論是椴木栽培還是菌草栽培食用菌技術(shù)，隨著該技術(shù)的普遍應(yīng)用和推廣都出現(xiàn)了病害危害，主要是病原菌與食用菌爭(zhēng)奪養(yǎng)分和空間從而危害食用菌生長(zhǎng)發(fā)育；通常伴有感染率高、發(fā)病率高、傳播快等特點(diǎn)，常給菇農(nóng)、工廠等造成嚴(yán)重?fù)p失[3-4]。目前在我國(guó)食用菌栽培種發(fā)現(xiàn)的競(jìng)爭(zhēng)性雜菌就有100多種，發(fā)生在食用菌子實(shí)體上的主要包括褐腐病、褐斑病、軟腐病、褐霉病等[5]，董文慧[6]利用50%咪鮮胺錳鹽抑制雞腿菇上的真菌輪枝霉和粉紅聚端孢菌具有良好的抑制效果，然而選用低毒無(wú)殘留的殺菌劑成為保證食用菌品質(zhì)安全的主要途徑[7]。根據(jù)前期的研究結(jié)果從菌草食用菌常見(jiàn)病害中分離得到的病原真菌包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）[8]、蠟孔菌（Ceriporia lacerata）[9]、赭曲霉（Aspergillus ochraceus）[10]和側(cè)耳木霉（Trichoderma pleuroticola）[11]。

目前關(guān)于菌草食用菌中的病害未見(jiàn)系統(tǒng)、完整的研究報(bào)道，為了提高菌草食用菌生產(chǎn)效率，及時(shí)對(duì)病害進(jìn)行治理，選擇合適的殺菌劑是治理雜菌污染的快速、有效手段。但是在實(shí)際生產(chǎn)中長(zhǎng)期單一、頻繁的選擇同一種殺菌劑對(duì)病害進(jìn)行防治易導(dǎo)致嚴(yán)重的耐藥性。已有研究表明，芒果[12]、油茶[13]和葡萄[14]等炭疽病因廣泛使用多菌靈、甲基硫菌靈等都產(chǎn)生了抗藥性[15-16]。因此，為防止菌草栽培食用菌種也產(chǎn)生抗藥性，筆者參考各病原真菌的生物學(xué)特性和生產(chǎn)中常用的治理方法優(yōu)選多菌靈、百菌清、惡霉靈等7種高效、低殘留的殺菌劑對(duì)其進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，以期為菌草食用菌病原真菌的科學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試病原菌及藥劑 供試4種菌草食用菌病原真菌包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、蠟孔菌（Ceriporia lacerata）、赭曲霉（Aspergillus ochraceus）和側(cè)耳木霉（Trichoderma pleuroticola），均從國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心栽培室分離得到，經(jīng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定后使用，所有菌株保存在國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心；供試藥劑、生產(chǎn)廠家及藥劑濃度設(shè)置見(jiàn)表1，藥劑濃度經(jīng)實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中獲得。

1.1.2 供試培養(yǎng)基 SYM培養(yǎng)基：可溶性淀粉10 g，酵母提取物2 g，蔗糖3 g，瓊脂粉16 g，定容至1 L。

1.2 方法

將病原菌接種至含不同濃度殺菌劑的SYM培養(yǎng)基中，分別于29 ℃、黑暗培養(yǎng)6 d后按照菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定菌落直徑[17-18]，以不含藥劑的SYM培養(yǎng)基為空白對(duì)照，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，分別通過(guò)有效抑制中濃度（EC50）、毒力回歸方程及斜率（R2）評(píng)價(jià)不同殺菌劑對(duì)病原菌的毒力。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用DPS軟件中幾率值分析法計(jì)算不同藥劑對(duì)4種病原菌菌絲生長(zhǎng)的EC50值、毒力回歸方程及R2 [19]。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺菌劑對(duì)哈茨木霉的毒力測(cè)定

從表2可以看出，百菌清的EC50值最小，為0.291 4 mg/L；其次為咪鮮胺和寡糖素，EC50值分別為1.668 1 mg/L和120.458 2 mg/L；而多菌靈、惡霉靈、精甲霜和氧化鈣的EC50值較大。結(jié)果表明，百菌清對(duì)哈茨木霉的抑制效果最好，精甲霜的抑制效果最差。

2.2 7種殺菌劑對(duì)蠟孔菌的毒力測(cè)定

表3是7種殺菌劑對(duì)蠟孔菌的毒力回歸方程，可以看出多菌靈的EC50值最小，為0.257 0 mg/L，其次為氧化鈣、咪鮮胺和百菌清，EC50值分別為1.532 3、1.666 7和1.666 7 mg/L；惡霉靈的EC50值最大，為520.084 5 mg/L。結(jié)果表明，多菌靈對(duì)蠟孔菌的抑制作為最好，惡霉靈的抑制效果最差。

2.3 7種殺菌劑對(duì)赭曲霉的毒力測(cè)定

表4是7種殺菌劑對(duì)赭曲霉的毒力測(cè)定結(jié)果，結(jié)果表明精甲霜靈·錳鋅的EC50值最小，為 9.223 4 mg/L，其次為咪鮮胺和百菌清，EC50值分別為10.908 0 mg/L和25.491 2 mg/L；而氧化鈣的EC50值最大，為210 663.447 0 mg/L。由此可見(jiàn)，精甲霜靈·錳鋅和咪鮮胺對(duì)赭曲霉的抑制率較好，而氧化鈣、惡霉靈等抑制效果較差。

2.4 7種殺菌劑對(duì)側(cè)耳木霉的毒力測(cè)定

從表5可以看出，多菌靈、咪鮮胺和百菌清的EC50值較小，為1.030 4、1.099 5和1.099 5 mg/L；其次為精甲霜·錳鋅，EC50值為5.856 9 mg/L；而惡霉靈、中生寡糖素和氧化鈣的EC50值較大。結(jié)果表明，多菌靈、咪鮮胺和百菌清對(duì)側(cè)耳木霉的抑制效果較好，氧化鈣的抑制效果最差。

3 討論

本文研究了7種常見(jiàn)的殺菌劑對(duì)菌草食用菌4種病原真菌的室內(nèi)毒力測(cè)定。結(jié)果表明，7種殺菌劑對(duì)哈茨木霉（T. harzianum）的毒力強(qiáng)弱依次為百菌清>咪鮮胺>中生寡糖素>氧化鈣>惡霉靈>多菌靈>精甲霜·錳鋅，對(duì)蠟孔菌（C. lacerata）的毒力強(qiáng)弱依次為多菌靈>氧化鈣>百菌清>咪鮮胺>精甲霜·錳鋅>中生寡糖素>惡霉靈，對(duì)赭曲霉（A. ochraceus）的毒力強(qiáng)弱依次為精甲霜·錳鋅> 咪鮮胺>百菌清>多菌靈>中生寡糖素>惡霉靈>氧化鈣，對(duì)側(cè)耳木霉（T. pleuroticola）的毒力強(qiáng)弱依次為多菌靈>咪鮮胺>百菌清>精甲霜·錳鋅>中生寡糖素>惡霉靈>氧化鈣。不同病原菌對(duì)殺菌劑的敏感性差異較大，因此在生產(chǎn)中針對(duì)食用菌病害有危害大、發(fā)病廣、癥狀相似等特點(diǎn)，可以選擇殺菌廣譜、毒性低、效果顯著的農(nóng)藥進(jìn)行多病害防治。根據(jù)本研究的結(jié)果，百菌清、咪鮮胺、多菌靈和精甲霜·錳鋅對(duì)4種病原菌都具有較好的抑制作用，EC50值介于0.257 0～9.223 4 mg/L之間。這4種殺菌劑對(duì)病原菌的作用方式分別為，百菌清作為一種廣譜的保護(hù)性殺菌劑主要是抑制病原菌呼吸產(chǎn)能過(guò)程而使孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)受到抑制；多菌靈是抑制病原菌細(xì)胞分裂中的紡錘體的形成從而抑制菌絲的生長(zhǎng)；精甲霜·錳鋅主要是抑制病原體內(nèi)丙酮酸的氧化而導(dǎo)致病菌死亡；咪鮮胺主要是干擾病原菌細(xì)胞壁形成而抑制其危害[20]。4種農(nóng)藥均具有抗菌譜較廣、高效、低毒等特點(diǎn)，為避免病原菌產(chǎn)生耐藥性，建議在生產(chǎn)中將4種殺菌劑輪換使用。

現(xiàn)有報(bào)道中關(guān)于椴木栽培食用菌病害的研究?jī)?nèi)容廣泛，包括由特異性強(qiáng)的木棲柱孢霉（Schtalidium lignicola）引起的毛木耳油疤病，并發(fā)現(xiàn)75%百菌清（WP）、50%咪鮮胺錳鹽（WP）和70%甲基硫菌靈（WP）對(duì)木棲柱孢霉的抑菌活性相對(duì)較 強(qiáng)[19]。杜愛(ài)玲[22]對(duì)雞腿菇的病害研究表明，總狀炭角菌成為雞腿菇病害的主要來(lái)源之一，且具有單一的寄主，在生產(chǎn)過(guò)程中主要通過(guò)合理調(diào)控生長(zhǎng)環(huán)境，改變?cè)耘喾绞絹?lái)控制該病害的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)椴木栽培平菇中大量存在側(cè)耳木霉[23-24]，且能嚴(yán)重影響平菇采收產(chǎn)量，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失；然而在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中也通常用75%酒精、新潔爾滅、84消毒液等對(duì)其進(jìn)行滅菌[25]。哈茨木霉與其他食用菌相比對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快，在營(yíng)養(yǎng)和空間上形成競(jìng)爭(zhēng)，降低食用菌產(chǎn)量[26-27]。研究表明在工廠栽培真姬菇中也大量出現(xiàn)蠟孔菌等雜菌，并認(rèn)為多菌靈對(duì)雜菌的抑制效果較明顯[28]，可用于生產(chǎn)防治。本研究結(jié)果與已有結(jié)論相比，無(wú)論在防治椴木或菌草栽培食用菌上，均選用了較為常見(jiàn)的殺菌劑，然而殺菌劑對(duì)菌草食用菌生產(chǎn)中進(jìn)行實(shí)際藥效檢驗(yàn)還需結(jié)合室內(nèi)條件和生產(chǎn)實(shí)踐，選擇優(yōu)良、廣譜和經(jīng)濟(jì)的殺菌劑并推廣應(yīng)用。

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