吳娜 朱金峰 王海濤 康業(yè)斌 鄭偉

摘 要 為了解茄病鐮刀菌與棘孢木霉對(duì)碳源、氮源的需求，試驗(yàn)在培養(yǎng)基I與培養(yǎng)基II的基礎(chǔ)上調(diào)整碳源、氮源及C/N比，測(cè)定碳源、氮源對(duì)茄病鐮刀菌和棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)量與產(chǎn)孢量的影響。結(jié)果表明，碳源對(duì)茄病鐮孢菌生長(zhǎng)的影響不明顯，甘露醇有利于其產(chǎn)孢；氮源對(duì)茄病鐮孢菌生長(zhǎng)的影響顯著，硝酸鈉最有利于菌絲生長(zhǎng)，磷酸氫二銨有利于其菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)孢；C/N比值對(duì)茄病鐮孢菌菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響顯著，C/N達(dá)到12∶1時(shí)，菌落直徑6.55 cm，每毫升產(chǎn)孢量3.36×106個(gè)。碳源對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)的影響不明顯，蔗糖和葡萄糖有利于其生長(zhǎng)與產(chǎn)孢；氮源對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)的影響顯著，磷酸二氫銨與硝酸鈉均有利于菌絲生長(zhǎng)，磷酸氫二銨有利于其產(chǎn)孢；C/N比值對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響顯著，C/N達(dá)到9∶1時(shí)，菌落直徑6.20 cm，每毫升產(chǎn)孢量1.45×107個(gè)。

關(guān)鍵詞 茄病鐮刀菌；棘孢木霉；菌絲生長(zhǎng)；產(chǎn)孢量；碳源、氮源需求

中圖分類(lèi)號(hào)：Q945.8；S435.72 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.7.001

近年來(lái)，我國(guó)老煙區(qū)由鐮刀菌侵染煙草引起的根腐病為害愈來(lái)愈重[1]。貴州省煙草根腐病病原菌的優(yōu)勢(shì)種是茄病鐮刀菌（Fusarium solani）[2]。河南省為害煙草的鐮刀菌有尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）、茄病鐮刀菌、輪枝鐮刀菌（Fusarium verticillioides）及層出鐮刀菌（Fusarium proliferatum），其中尖孢鐮刀菌分離頻率50.0%，茄病鐮刀菌分離頻率31.8%[3]，為主要的致病菌。目前，通過(guò)增施生物有機(jī)肥，達(dá)到抑制病原菌生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)土壤微生物種群結(jié)構(gòu)、增強(qiáng)植物抗病性之目的，從而防止土傳病害的生物防治措施倍受重視[4]。棘孢木霉對(duì)多種植物病原真菌具有拮抗作用[5]。陳小均等用施有100～200 g·667 m-2木霉菌的肥土包根假植后盆栽，可有效防治煙草鐮刀菌根腐病，并有較好的治療作用和促生效應(yīng)[6]。本試驗(yàn)測(cè)定碳源、氮源對(duì)茄病鐮刀菌與棘孢木霉絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響，為進(jìn)一步利用棘孢木霉控制煙草鐮刀菌根腐病提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株和培養(yǎng)基

供試菌株：茄病鐮刀菌（Fusarium solani）和棘孢木霉（Trichoderma asperellum），由河南科技大學(xué)植物免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基、PSA培養(yǎng)基、Czapek培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基I（磷酸氫二鉀1.0 g、氯化鉀0.5 g、硫酸鎂0.5 g、硫酸鐵0.01 g、葡萄糖30 g、酵母膏2 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL）與基礎(chǔ)培養(yǎng)基II[酵母膏0.9 g，蛋白胨1.8 g（測(cè)試碳源時(shí)加入），磷酸二氫鉀0.9 g，瓊脂18 g，蒸餾水900 mL][7]。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)茄病鐮刀菌與棘孢木霉絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

茄病鐮刀菌轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基上，25 ℃下恒溫培養(yǎng)6 d，用直徑5 mm的取樣器打取菌餅，接種于PDA、PSA、基礎(chǔ)培養(yǎng)基I、Czapek、MA固體培養(yǎng)基中央，于25 ℃下恒溫培養(yǎng)，6 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，10 d后用血球計(jì)數(shù)法測(cè)量產(chǎn)孢量。每個(gè)處理重復(fù)4皿。

棘孢木霉轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基上，25 ℃下恒溫培養(yǎng)2 d，用直徑5 mm的取樣器打取菌餅，接種于PDA、PSA、Czapek、MA、OA固體培養(yǎng)基中央，于25 ℃下恒溫培養(yǎng)，2 d后測(cè)量菌落直徑，6 d后測(cè)量產(chǎn)孢量。每個(gè)處理重復(fù)4皿。

1.2.2 碳氮源和C/N對(duì)茄病鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

以Czapek培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，每1 000 mL添加葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、乳糖各30 g，制成含5種不同碳源的固體培養(yǎng)基；添加硝酸鈉、硫酸銨、硝酸銨、磷酸二氫銨、磷酸氫二銨各3 g，制成含5種不同氮源的固體培養(yǎng)基。將直徑5 mm的茄病鐮刀菌菌餅轉(zhuǎn)接于上述培養(yǎng)基平板中央，同上述方法測(cè)量菌落直徑及產(chǎn)孢量，以不加碳源、氮源的培養(yǎng)基為對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)4皿。

以Czapek培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整上述篩選出的最佳碳源、氮源的比例，制成1∶1，3∶1，6∶1，9∶1，12∶1（均為質(zhì)量比，下同）的培養(yǎng)基，以碳、氮比值（19∶1）的培養(yǎng)基為對(duì)照。同“1.2.1”的方法接種、培養(yǎng)，定時(shí)測(cè)量菌落直徑及產(chǎn)孢量。每個(gè)處理重復(fù)4皿。

1.2.3 碳氮源和C/N對(duì)棘孢木霉菌菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量的影響

以基礎(chǔ)培養(yǎng)基II為基礎(chǔ)，每1 000 mL添加葡萄糖、蔗糖、甘露醇、淀粉、麥芽糖各6.6 g，制成含5種不同碳源的固體培養(yǎng)基；添加硝酸鈉、硫酸銨、磷酸二氫銨、硝酸銨、磷酸氫二銨各3 g，制成含5種不同氮源的固體培養(yǎng)基。將直徑5 mm的棘孢木霉菌餅轉(zhuǎn)接于上述培養(yǎng)基平板中央，同上述方法測(cè)量菌落直徑及產(chǎn)孢量，以不加碳源、氮源的培養(yǎng)基為對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)4皿。

以基礎(chǔ)培養(yǎng)基II為基礎(chǔ)，調(diào)整上述篩選出的最佳碳源、氮源的比例，制成1∶1，3∶1，6∶1，9∶1，12∶1的培養(yǎng)基，以碳、氮比值（7.27∶1）的培養(yǎng)基為對(duì)照。同“1.2.1”的方法接種、培養(yǎng)，定時(shí)測(cè)量菌落直徑及產(chǎn)孢量。每個(gè)處理重復(fù)4皿。

2 結(jié)果與分析

2.1 茄病鐮刀菌與棘孢木霉在不同培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)狀況及產(chǎn)孢量

茄病鐮刀菌在5種培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng)，在PDA培養(yǎng)基上菌落直徑最大，產(chǎn)孢量最多；在麥芽糖培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢最差（見(jiàn)表1）。

棘孢木霉在5種培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng)，在PDA、PSA培養(yǎng)基上菌落圓形，白色菌絲呈放射狀生長(zhǎng)，菌絲濃密，每毫升產(chǎn)孢量在3.1×107個(gè)以上；在麥芽糖培養(yǎng)基上菌落圓形，白色菌絲稀疏，每毫升產(chǎn)孢量?jī)H1.8×106個(gè)，最差（見(jiàn)表2）。

2.2 不同碳源、氮源及碳氮比對(duì)茄病鐮孢菌菌絲生長(zhǎng)的影響

碳源對(duì)茄病鐮孢菌生長(zhǎng)的影響不明顯，但甘露醇有利于其產(chǎn)孢，其次是蔗糖和葡萄糖（見(jiàn)表3）。

氮源對(duì)茄病鐮孢菌生長(zhǎng)的影響顯著，硝酸鈉最有利于菌絲生長(zhǎng)，其次是磷酸氫二銨，且磷酸氫二銨也有利于其產(chǎn)孢（見(jiàn)表4）。

C/N比值對(duì)茄病鐮孢菌菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響顯著，C/N達(dá)到12∶1時(shí)，菌落直徑6.55 cm，每毫升產(chǎn)孢量3.36×106個(gè)，接近對(duì)照值（見(jiàn)表5）。

2.3 不同碳源、氮源及碳氮比對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)的影響

碳源對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)的影響不明顯，以蔗糖、葡萄糖更有利于其生長(zhǎng)與產(chǎn)孢（見(jiàn)表6）。

氮源對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)的影響顯著，磷酸二氫銨與硝酸鈉均有利于菌絲生長(zhǎng)，磷酸氫二銨有利于其產(chǎn)孢（見(jiàn)表7）。

C/N比值對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響顯著，C/N達(dá)到9∶1時(shí)，菌落直徑6.20 cm，每毫升產(chǎn)孢量1.45×107個(gè)，接近對(duì)照值（見(jiàn)表8）。

3 討論

據(jù)楊紹麗等報(bào)道，茄病鐮刀菌病菌能夠利用多種碳源和氮源，最適碳源是麥芽糖，最適氮源是硝酸鈉[8]。據(jù)楊靜美等報(bào)道，茄病鐮刀菌菌絲在以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基中擴(kuò)展最快，淀粉中最慢，葡萄糖與其他碳源之間有顯著差異；不同氮源培養(yǎng)基中，病菌在以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最快，在添加磷酸二氫銨的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最慢[9]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，碳源對(duì)茄病鐮孢菌生長(zhǎng)的影響不明顯，甘露醇有利于其產(chǎn)孢；氮源對(duì)茄病鐮孢菌生長(zhǎng)的影響顯著，硝酸鈉最有利于菌絲生長(zhǎng)，磷酸氫二銨有利于其菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)孢；C/N為12∶1時(shí)，最有利于其菌絲擴(kuò)展與產(chǎn)孢。

顏梅新等研究認(rèn)為，棘孢木霉生長(zhǎng)最佳碳源是甘露醇，其次是蔗糖，葡萄糖和淀粉[7]。于曉丹等研究認(rèn)為，木霉生長(zhǎng)的最佳碳源是蔗糖，其次是麥芽糖和葡萄糖，淀粉最差[10]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，碳源對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)的影響不明顯，以蔗糖和葡萄糖更有利于其生長(zhǎng)與產(chǎn)孢；氮源對(duì)棘孢木霉菌絲生長(zhǎng)的影響顯著，磷酸二氫銨與硝酸鈉均有利于菌絲生長(zhǎng)，磷酸氫二銨有利于其產(chǎn)孢；最適C/N比值為9∶1。

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（責(zé)任編輯：丁志祥）