王勤

摘要：對實驗室常用的幾種布魯氏菌病檢測方法進行了分析，為實驗室檢測不同動物群體選擇相應的診斷方法提供參考。

關鍵詞：實驗室；布魯氏菌??；檢測方法

中圖分類號：S858 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2018）04-0025-01

布魯氏菌病（簡稱布?。┦且环N危害性極大的傳染性人獸共患病，在世界范圍內(nèi)廣泛流行。其主要臨床癥狀為雌性動物流產(chǎn)、生育力下降，雄性動物睪丸炎，甚至不育，給畜牧業(yè)造成嚴重的損失。

1 病原學方法

從疑似感染布病的個體中提取血液或其他樣本，對樣本處理后在選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，如有菌落生長則通過細菌染色、生化試驗等方法鑒別是否為布魯氏菌，該方法準確性高，但危險性高、操作難度大、分離時間長，對試驗環(huán)境要求嚴格，需在特定試驗條件下進行。

2 PCR技術

隨著分子生物學技術的發(fā)展和普及，可通過 PCR、熒光定量PCR以及環(huán)介導等溫擴增（LAMP）等技術對布病進行診斷。其中PCR技術具有特異性高、靈敏度好、操作較簡單等優(yōu)點，可用于鑒別不同種屬的布魯氏菌。熒光定量PCR 技術相較于傳統(tǒng) PCR 技術具有靈敏度高、高通量和方便快捷等優(yōu)勢，但由于其引物和探針設計較為困難，且限制較多，對專業(yè)技術有較高要求。LAMP可用于對奶、組織等樣本的檢測，具有操作方便、可視性強、特異性高和試驗條件要求低等優(yōu)點，其靈敏性可達10 pg/反應，且可以在普通水浴下完成反應，適于基層檢測使用。但是LAMP存在多重擴增較為困難，樣本污染等問題，且對引物設計要求很高限制了該技術的進一步使用。

3 血清學檢測方法

3.1 虎紅平板凝集試驗（RBPT）

BRPT是在平板上將30 μL抗原與30 μL血清樣品混合，4 min內(nèi)觀察是否出現(xiàn)凝集來判定陰陽性，該法使用方便、結(jié)果判定簡單、價格低廉，適用于各種家畜布病的田間篩選，在國際上廣泛應用，但是特異性較差，易出現(xiàn)假陽性。

3.2 試管凝集試驗（SAT）

SAT定量是所有試驗中最準確的，所以一直作為確診試驗使用，曾經(jīng)在國際上得到了廣泛應用。近年，由于快速凝集試驗和ELISA等檢測技術的發(fā)展，對比研究發(fā)現(xiàn)SAT的敏感性和特異性比其他常用方法低。在發(fā)達國家，布病的血清學檢測方法基本已淘汰了SAT，在國際貿(mào)易中也未將布病SAT列入。

3.3 補體結(jié)合試驗（CFT）

CFT是公認的特異性和敏感性較高的血清學檢測方法，適用于各種家畜布病的檢測，至今在國際貿(mào)易中仍是重要的診斷方法。CFT在試驗過程中需要對溶血素、補體、抗原等多個組分進行標定，操作十分繁瑣，需經(jīng)驗豐富的人員進行組分準確滴定、試劑保存和結(jié)果判斷等，因此該法在實際檢測過程中難以得到推廣，僅在相關科研機構(gòu)和稀有動物檢疫確診中使用。

3.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA 技術具有成熟穩(wěn)定、方便快捷、特異性敏感性高、高通量等優(yōu)點且其對相關試驗人員要求較低，適合臨床樣本的快速檢測。目前有iELISA 與cELISA兩種方法用于布病診斷，其中iELISA具有高度敏感性，但不能用于檢測自然病原株誘導產(chǎn)生的布病抗體，因此僅用作對免疫接種過的牛進行篩選，并非確認；cELISA 具有比iELISA更高的特異性，可用于排除牛布魯氏菌接種產(chǎn)生的抗體反應。

3.5 熒光偏振試驗（FPA）

FPA是一種定量免疫分析技術，已經(jīng)用于北美和歐洲的布病根除計劃，是OIE 規(guī)定的國際貿(mào)易指定方法，其原理和ELISA相似，但操作簡便，用時更短。大量的研究結(jié)果表明，在布病的抗體檢測方法中，熒光偏振的特異性和敏感性比較高。但是，該方法試劑盒昂貴，且需要在專門儀器內(nèi)使用，限制了該方法的推廣。

3.6 膠體金試驗

國內(nèi)學者初步建立了檢測布病抗體的膠體金方法，其敏感性和特異性均達到了90%以上。膠體金試驗具有方便快捷、敏感性高、結(jié)果易判定等優(yōu)勢，適合臨床快速診斷的需要。但是，現(xiàn)有商品化膠體金試紙條標準參差不齊，符合率和敏感性較差，仍需要進一步發(fā)展。

4 細胞免疫學檢測方法

目前細胞免疫學檢測布病的方法較少報道，原因大致如下：一是細胞免疫狀態(tài)受多種因素影響，難以找到合適的特異性指標進行衡量；二是易感動物個體差異較大，容易引起誤差；三是細胞免疫檢測方法成本更高，操作更復雜；四是相關研究仍不成熟，且難度較大。

5 小結(jié)

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的具有傳染性的人畜共患病，OIE將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。診斷布病的方法有多種，但并非每種方法都適用于所有流行病學情況，因此，需根據(jù)診斷方法的適應性及其優(yōu)缺點，針對不同的動物群體選擇相應的診斷方法進行檢測。